简介：目的：构建蜱传脑炎病毒（TBEV）结构蛋白E的原核表达载体，表达重组蛋白。方法：PCR扩增E蛋白全长基因片段，插入原核表达载体pET-32a并转化大肠杆菌进行诱导表达，镍柱纯化、复性。结果：E蛋白在大肠杆菌中获得表达，表达量达60mg／L；重组E蛋白能与人抗TBEV多克隆抗体产生特异反应；用重组E抗原免疫家兔后，能检测到较高的抗体水平。结论：原核表达的E抗原蛋白具有抗体结合活性，可用于制备ELISA诊断试剂。

简介：目的建立一种能在临床上快速、准确地检测大鼠疑似泰勒氏病毒（Theiler’s-likevirusofrats,TLV）的方法,采用TaqMan探针荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）技术,特异性针对TLV病毒核酸进行检测。方法通过基因合成序列作为质粒标准品的模板,同时选择特异性的序列在3622~3729nt处,设计一对引物和TaqMan性探针,优化反应体系及条件,进行qPCR扩增,从而建立TLVTaqMan探针qPCR方法,并对其灵敏度、稳定性和特异性进行评价。结果建立的TLVqPCR检测方法,标准曲线线性关系良好,R~2值可达到0.99,灵敏性最低能够检测到10个拷贝数/μL,对比普通PCR方法,高出其100倍;对其他常见大鼠病毒均无非特异反应;重复性良好,批内和批间变异系数均小于1%。结论利用TaqMan探针建立快速检测TLV的荧光定量PCR方法,该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好等特点。

简介：目的：建立汉滩病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞模型。方法：PBS灌洗6-8周龄C57BL／6小鼠腹腔，分离获取小鼠腹腔巨噬细胞后，以100TCID50汉滩病毒76—118株感染小鼠腹腔巨噬细胞，通过间接免疫荧光、ELISA和Real-timePCR检测病毒感染情况。结果：病毒感染3d后，间接免疫荧光和ELISA检测到病毒核衣壳蛋白的表达，Real-timePCR检测到病毒核酸的表达。结论：建立了汉滩病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞的模型，为进一步阐明汉滩病毒的发病机制奠定了基础。

简介：在一项新的研究中。来自英国利兹大学的研究人员发现一种方法阻止疱疹病毒劫持宿主细胞中该病毒进行复制和导致疾病所需的重要通路。相关研究结果在线发表在NatureMicrobiology期刊上。论文共同通信作者为来自利兹大学阿斯特伯里结构分子生物学中心的AdrianWhitehouse教授和RichardFoster博士。Whitehouse教授说，“我们已花了数年时间证实在所有疱疹病毒中发现的一种蛋白招募宿主细胞中的一种被称作人TREX的蛋白复合体来协助稳定化和运输细胞核外的疱疹病毒RNA，这样它们能够表达为病毒蛋白。”“如今我们鉴定出一种能够破坏这种至关重要的病毒一宿主细胞相互作用的化合物，从而阻止疱疹病毒复制和产生传染性的病毒颗粒。”

简介：目的：了解北京地区Merkel细胞多瘤病毒（MCPyV）在呼吸道感染住院儿童中的流行情况和临床特点。方法：采集北京友谊医院儿科呼吸道感染住院患儿的鼻咽抽吸物样本200份，并收集相应的患儿临床资料，采用Taq．Manreal—timePCR方法检测MCPyVLTAg基因，并经测序确认；MCPyV阳性样本同时检测常见的人呼吸道病毒混合感染情况。结果：200份标本中共检出MCPyV阳性6例，检出率3％；感染儿童年龄从6月到5岁，其中年龄≤3岁的占83．3％（5／6）。诊断包括支气管肺炎和急性支气管炎，临床表现包括发热、咳嗽、喘息。6例阳性样本均与其他呼吸道病毒混合感染，A型流感病毒和呼吸道合胞病毒混合感染最常见，6例阳性样本MCPyV载量均低于10拷贝／μL。结论：real—timePCR方法检测呼吸道感染住院患儿中MCPyV的感染率为3％，6例MCPyV阳性样本均与其他呼吸道病毒混合感染且MCPyV载量较低，不能认为MCPyV是儿童呼吸道感染的病因。

简介：目的：建立一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，快速、定量检测汉滩病毒感染中的中和抗体活性。方法：将本室前期制备的抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100TCIDso的病毒混合液于37℃孵育1h后感染Vero—E6细胞，提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76—118株S基因序列设计特异性引物，在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品，建立qRT—PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性的实验方法。结果和结论：建立了一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，可定量测定汉滩病毒感染中的中和抗体活性，该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。

简介：目的：构建汉滩病毒包膜糖蛋白基因的真核表达载体，并加入可增强免疫应答效应的细胞因子CD40L基因，检测其可否在真核细胞中表达。方法与结果：参照GenBank中汉滩病毒M基因和小鼠CD40L的全基因序列设计引物，通过聚合酶链反应（PCR）获得M和CD40L基因片段，将其与pCI—neo载体相连，测序证实该载体构建成功后，将此真核表达载体以脂质体转染法转染至哺乳动物细胞CHO—K1中，利用间接免疫荧光法（IFA）检测发现M基因和CD40L基因可以同时表达于CHO-K1细胞中。结论：构建了带有CD40L基因的汉滩病毒包膜糖蛋白重组质粒并获得表达，为深入研究汉滩病毒感染后包膜糖蛋白引起的特异性免疫应答规律奠定了实验基础。

简介：目的：了解皮肤性病患者不同病变类型中的HPV感染型别。方法：选择2014年6月~2015年6月我科门诊就诊者368例,分为4个组别：尖锐湿疣患者组242例,鲍温样丘疹病患者18例,男性冠状沟珍珠疹和女性假性湿疣70例,未见任何皮疹且醋酸白试验阴性的体检者38例。采用PCR-反向点杂交法检测皮损或外阴局部HPV-DNA亚型,并用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果：（1）HPV-DNA的总检出率为72.9%,其中单一型别感染率57.1%,多重感染率15.8%;（2）268例HPV阳性标本中,高危型感染占51.9%,低危型和混合型的阳性率分别为33.2%、14.9%;（3）尖锐湿疣组和鲍温样丘疹病患者组HPV-DNA的阳性率分别为97.9%、88.9%,而男性珍珠疹和女性假性湿疣组以及要求体检人群的阳性率分别为14.3%和13.2%;从感染型别分析,尖锐湿疣主要是6、11、16、18、31、33、35、43和66亚型,鲍温样丘疹病患者主要是16亚型,男性珍珠疹和女性假性湿疣以及要求体检人群的感染型别主要是低危型感染,分别是6、42、43、81和6、42、83;（4）在被检测的18个高危HPV亚型中,最常见类型依次为HPVl6、18、58、56、33、52、68、31、39,未检测出HPV35、45、51、53、59、66、73和82亚型;在被检测的5个低危HPV-DNA亚型中依次为HPV6、11、42和43,未检测出81亚型。结论：HPV感染以单一型别感染为主,且以高危型为主,应该重视临床HPV感染亚型的检测,尤其是高危型HPV感染者的随访管理。

简介：目的：建立检测人4型腺病毒拷贝数的荧光定量PCR方法。方法：提取本实验室构建的4型腺病毒全基因组质粒，以梯度稀释质粒为标准模板，选取人4型腺病毒六邻体区域基因设计一对特异性引物，进行SYBRGreenI荧光定量PCR扩增并制作标准曲线。结果：标准曲线为y=-4．284x＋53．468，由全基因组质粒所构建的标准曲线线性关系良好，扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈线性关系（R2=0．999609），检出敏感度可达1×10^2拷贝/μL，且与其他几种腺病毒无交叉反应。用该方法检测4型腺病毒感染细胞2、12和24h后的病毒拷贝数，其病毒拷贝数随时间增加，与细胞病变（CPE）变化保持一致，且荧光定量PCR的测量结果稳定（变异系数〈6％）。结论：建立了检测人4型腺病毒基因拷贝数的荧光定量RT—PCR方法，该方法灵敏度高、特异性强。

简介：目的：探讨过敏性紫癜合并消化道出血的相关危险因素。方法：回顾性分析2013年9月至2016年6月在武汉协和医院儿科住院治疗的80例过敏性紫癜初诊患儿的临床资料,根据是否合并消化道出血分为消化道出血组11例,非消化道出血组69例,比较两组患儿的年龄、地区、性别、发病季节、紫癜分布特征、是否合并紫癜性肾炎、hsCRP、ESR、血常规、生化等。结果：与非消化道出血组相比,消化道出血组患儿的发病季节、血清超敏C反应蛋白（hsCRP）、血清钙离子（Ca）水平差异均有统计学意义（P〈0.05）,两组紫癜性肾炎发病率比较差异无统计学意义,但消化道出血组合并紫癜性肾炎的比例（45.5%）明显高于非消化道出血组（21.7%）。结论：夏冬季节、高水平血清CRP、低水平血清Ca2＋是过敏性紫癜患儿合并消化道出血的危险因素。

简介：目的：分析阿奇霉素联合糖皮质激素治疗重症支原体肺炎患儿的临床效果及安全性。方法：选择112例重症支原体肺炎患儿并通过抽签法分为对照组与观察组,每组各56例。对照组予以阿奇霉素治疗,观察组在对照组基础上加用糖皮质激素治疗。观察并比较两组患儿治疗前后血沉（ESR）、血清乳酸脱氢酶（LDH）、同工酶MB（CK-MB）、肌酸激酶（CK）、谷草转氨酶（AST）、C反应蛋白（CRP）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平、CD4^＋及CD8^＋,临床疗效及不良反应的发生情况。结果：观察组有效率为96.4%,显著高于对照组（82.1%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。治疗后,两组ESR、血清LDH、CK-MB、CK、AST、CRP、IL-6、TNF-α水平及CD8^＋均较治疗前显著降低,且观察组以上指标均明显低于对照组;两组CD4^＋均较治疗前明显上升,且观察组显著高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。观察组退热、咳嗽缓解、肺部湿啰音消失时间均明显短于对照组（P〈0.05）。两组不良反应的发生情况比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：阿奇霉素联合糖皮质激素治疗小儿重症支原体肺炎的临床效果明显优于单用阿奇霉素治疗,可有效减轻心肌损伤和炎症反应,并提高患儿免疫功能,且安全性高。

简介：目的：探究头孢哌酮钠舒巴坦钠联合莫西沙星治疗老年重症肺炎的临床疗效。方法：选取我院诊治的重症肺炎老年患者90例,平均随机分为A、B、C三组。在常规治疗的基础上,A组予以头孢哌酮钠舒巴坦钠治疗,B组予以莫西沙星治疗,C组则予以头孢哌酮钠舒巴坦钠与莫西沙星的联合治疗。分析比较三组患者的临床疗效、细菌清除率、临床症状及体征好转时间、实验室检查指标及不良反应的发生情况。结果：治疗后,C组的临床总有效率、细菌清除率均显著高于A组及B组（P〈0.05）,B组细菌清除率明显高于A组（P〈0.05）。三组患者的WBC、CRP和PaO2/FiO2均较治疗前明显改善（P〈0.05）,而ALT、AST、Scr和BUN均没有显著变化,C组的WBC、CRP、PLT、PaO2及PaO2/FiO2与A组、B组相比差异均有显著性意义（P〈0.05）。三组的退热时间、白细胞下降时间、痰液颜色改变时间、肺部炎症明显吸收时间比较有差异（P〈0.05）,且C组退热时间、白细胞下降时间、痰液颜色改变时间、肺部炎症明显吸收时间均明显短于A组及B组,B组的肺部炎症明显吸收时间短于A组（P〈0.05）。三组患者仅出现轻度胃肠道反应、皮疹、失眠等轻微不良反应,不良反应发生率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：头孢哌酮钠舒巴坦钠联合莫西沙星治疗老年重症肺炎的临床疗效明显优于二者单药治疗,其能显著改善患者的临床症状且安全性高。

简介：目的：探讨医学模拟教学结合以问题为导向（PBL）的教学模式在重症医学教学中的应用价值。方法：选取2015年1月-2017年1月在我院重症医学科轮转实习的五年制医学生64人作为研究对象。按随机数字表法将64名医学生分为PBL组（n=32）和结合教学组（n=32）。PBL组采用PBL教学，结合教学组采用医学模拟结合PBL教学。分别在入科时和轮转实习结束时对两组学员进行理论考试和技能操作考核，记录成绩并比较。理论考试和技能操作考核后采取发放问卷进行调查的形式获得学员对教学效果的主观评价。结果：轮转实习结束时，两组理论考试分数差异无统计学意义（P〉0．05）；而结合教学组技能操作考核成分数显著高于PBL组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。两组学员在教学方法接受度高、学习兴趣提升、自学能力提升和临床诊疗水平提高所占比例差异无统计学意义（P〉O．05）；结合教学组学员在团队协作能力提高、沟通能力与人文关怀提高和技能操作水平提高所占比例高于PBL组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：与单独PBL教学相比较，医学模拟教学结合PBL的教学模式应用于重症医学教学对学员技能操作的掌握有更好的效果，同时能提高学员团队协作能力、沟通能力以及对患者的人文关怀，且受到学员的认同与喜爱，应在重症医学的教学实践中逐步完善并进一步推广应用。

简介：目的：研究溴隐亭不同给药方案在治疗高泌乳素血症（HPRL）女性不育症中的临床疗效,关注其对女性促性腺激素诱导排卵的影响。方法：本研究共纳入60例就诊于我院的确诊为高泌乳素血症不孕不育患者,随机分为两组。分为研究组与对照组：研究组采取先口服溴隐亭调整血清泌乳素水平至正常后予以促性腺激素诱导排卵;对照组采取促性腺激素与溴隐亭同步治疗方案。结果：观察两组患者的促排卵周期数、平均用药天数、雌二醇水平及妊娠率,两组治疗前后的血清泌乳素都显著改善（P〈0.05）;但是两组之间相比,采取溴隐亭药物治疗后诱导排卵的研究组在促排卵、雌二醇水平和妊娠率方面具有显著优势（P〈0.05）。结论：采用溴隐亭治疗高泌乳素血症患者,调整至正常后再使用促卵泡激素药物促排卵治疗不孕不育具为较优的治疗方案。

简介：在最近发表在《MolecularPsychiatry》杂志上的一项研究中。科学家们检测了阿兹海默症患者在发病过程的不同阶段大脑中tau蛋白沉积样的扩散特征。这一结果表明沉积斑块的的大小以及其扩散的速度具有明显的个体差异性，而大脑中tau蛋白的水平与记忆损伤的严重程度之间也有明显的相关性。

简介：目的：探讨补肾温阳化瘀法对子宫内膜异位症患者子宫内膜腺上皮细胞骨桥蛋白（OPN）与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响.方法：选择我院2013年4月～2016年4月收治的92例子宫内膜异位症患者,分为对照组与观察组,各46例,对照组行常规西医治疗,观察组行补肾温阳化瘀法治疗,比较两组OPN及MMP-9,雌二醇（E2）、促黄体生成素（UH）、卵泡刺激素（FSH）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）,CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋,临床疗效及安全性.结果：治疗后,观察组OPN、MMP-9,TNF-α、IL-6、IL-8,CD8＋低于对照组,观察组CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋/CD8^＋高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.观察组总有效率高于对照组,不良反应率低于对照组（P＜0.05）.结论：补肾温阳化瘀法可下调子宫内膜异位症患者子宫内膜腺上皮细胞OPN及MPP-9表达.