简介:摘要微小RNA( microRNAs, miRNAs)是一类广泛存在于真核生物中进化保守的非编码小的内源性单链的RNA,可以作为重要的调控分子参与生命活动的不同过程,其中miRNA-1299的研究主要集中在癌症中,被认为通过靶向关键致癌基因或抗癌基因而充当一种肿瘤抑制因子,调节其下游靶基因的表达,从而激活或抑制其转录,调控细胞增殖,迁移,存活,程序性细胞死亡等相关生命活动,近年来日益成为疾病机理和生物标志物研究的热点。因此阐明miR-1299在肿瘤发生,增殖,凋亡,侵袭,迁移和血管生成发展中的重要调控作用,将为miR-1299用作肿瘤早期诊断的新型的生物标志物提供新的视角。
简介:摘要目的探讨敲除转化生长因子β调节因子4(TBRG4)对肺癌H1299细胞增殖的影响及其机制。方法培养肺癌H1299细胞、TBRG4敲除阴性对照及TBRG4敲除H1299细胞,分别命名为对照组、阴性对照组、TBRG4敲除组。采用细胞计数(CCK)-8试剂盒检测各组细胞的增殖情况。采用还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒检测各组细胞GSH的含量。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞TBRG4、沉默信息调节因子2相关酶4(SIRT4)、c-Myc和谷氨酰胺酶1(GLS1)mRNA的表达。采用Western blot检测各组细胞TBRG4、SIRT4、c-Myc和GLS1蛋白的表达水平。结果CCK-8和GSH含量检测结果显示,对照组、阴性对照组、TBRG4敲除组H1299细胞的吸光度值分别为1.025±0.021、1.032±0.019、0.726±0.018,GSH的含量分别为(20.836±0.367)、(21.167±0.460)、(15.091±0.241)μmol/L,与对照组和阴性对照组相比,TBRG4敲除组的吸光度值、GSH含量均降低,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。与对照组和阴性对照组相比,TBRG4敲除组TBRG4、c-Myc、GLS1基因mRNA和蛋白的相对表达水平均减少,SIRT4基因mRNA和蛋白的相对表达水平均增加,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。结论敲除TBRG4可抑制肺癌H1299细胞增殖,其作用机制可能与促进SIRT4的表达、抑制c-Myc和GLS1的表达、阻断谷氨酰胺代谢有关。
简介:摘要目的探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂对人非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响及其可能的机制。方法体外培养人非小细胞肺癌细胞H1299。CCK-8检测厄洛替尼对H1299的毒性作用,并计算IC50及IC20,将IC20作为后续试验的药物作用浓度。克隆形成实验检测射线联合厄洛替尼对H1299的作用,计算放射敏感性参数,绘制细胞存活曲线。流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡。Western blot检测细胞EGFR/PI3K/AKT通路及凋亡相关蛋白表达。结果厄洛替尼对H1299具有一定增殖抑制作用,IC50为27.3 μmol/L、IC20为3.3 μmol/L。X射线联合IC20浓度厄洛替尼能够降低H1299的克隆能力,使G0/G1期、G2/M期比例增加,S期减少比例,细胞凋亡增加;抑制pEGFR及pAKT蛋白表达,增加凋亡相关蛋白Active Caspase 3、Cleaved PARP表达。结论厄洛替尼对H1299具有放射增敏作用,其可能的机制是厄洛替尼联合射线抑制EGFR/PI3K/AKT通路,降低细胞损伤修复能力,改变细胞生长周期,诱导细胞凋亡。
简介:摘要文章首先针对ADS-B系统工作原理展开简要分析,而后进一步就其在空中管制领域中的应用加以讨论,对于深入了解ADS-B系统特征以及优势有着一定的帮助作用。
简介:目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299VEGF、bFGF表达的抑制作用.方法:采用RT-PCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGFmRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量.结果:不同浓度的(2.0、4.0μg·ml-1)CCVAF对H1299bFGFmRNA水平有降低作用,其中4.0μg·ml-1CCVAF作用7h后bFGFmRNA的表达明显降低,但对VEGFmRNA的表达无明显影响.CCVAF作用H1299细胞24h后,其细胞上清中VEGF、bFGF的含量较对照组明显减少(P<0.05),且呈剂量依赖性.结论:CCVAF可抑制H1299细胞bFGFmRNA和蛋白的表达及VEGF蛋白的表达.
简介:摘要目的探讨miRNA-628-3p(miR-628-3p)对非小细胞肺癌H1299细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其与胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)的靶向关系。方法设立空白对照组(未经处理的H1299细胞)、miR-NC组(转染空载质粒的H1299细胞)、miR-628-3p-M组(转染含miR-628-3p模拟物序列质粒的H1299细胞)、miR-628-3p-I组(转染含miR-628-3p抑制序列质粒的H1299细胞)。各组细胞培养72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,结晶紫染色测定细胞单克隆形成数,流式细胞术测定细胞凋亡水平,Transwell法测定细胞侵袭能力,反转录、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定细胞中miR-628-3p、IGF-1R mRNA水平,蛋白质印迹法测定细胞中IGF-1R蛋白水平。结果与空白对照组和miR-NC组比较,miR-628-3p-M组细胞存活率[(42±7)%比(78±6)%、(76±7)%]、单克隆形成数[(235±35)个比(614±89)个、(618±75)个]、侵袭细胞数[(265±85)个比(693±185)个、(703±119)个]、IGF-1R mRNA相对表达量(2.17±0.14比3.38±0.15、3.37±0.13)和IGF-1R蛋白相对表达量(0.34±0.13比0.89±0.19、0.88±0.18)均低(均P<0.05),细胞凋亡率[(9.30±3.51)%比(3.30±1.54)%、(3.10±1.94)%]、miR-628-3p相对表达量(6.93±0.17比3.29±0.15、3.30±0.16)均高(均P<0.05);而miR-628-3p-I组细胞存活率[(90±6)%]、单克隆形成数[(1 063±102)个]、侵袭细胞数[(1 985±426)个]、IGF-1R mRNA相对表达量(4.30±0.18)和IGF-1R蛋白相对表达量(1.47±0.17)均高(均P<0.05),细胞凋亡率[(0.90±0.20)%]、miR-628-3p相对表达量(1.93±0.18)均低(均P<0.05)。与miR-628-3p-M组比较,miR-628-3p-I组细胞存活率、单克隆形成数、侵袭细胞数、IGF-1R mRNA及蛋白相对表达量均高(均P<0.05),细胞凋亡率、miR-628-3p相对表达量均低(均P<0.05)。结论调节miR-628-3p水平对H1299细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡有影响;miR-628-3p与IGF-1R可能有靶向关系。