简介:洁净空气系统是一家现代化医院必不可少的硬件之一。目前新建和改建的综合性医院均把空气净化这一概念引入工程建设之中。我院是由香港著名实业家邵逸夫先生捐资,浙江省人民政府配套,美国罗马琳达大学协助建造和管理的一所具有国内示范水平、与国际接轨的现代化综合医院。自1994年建院初期就陆续建立了配有洁净空气的手术室、层流病房、生殖医学中心(IVF)、药物配制中心(PIVAS)、药房制剂室、中心实验室、动物实验室等,空气净化级别分别为百级、千级、万级。作为医院后勤维护保障部门,就是要运用科学的管理来确保洁净空气系统的正常运行,使洁净空气系统处于一个正常的运行状态以控制室内产尘、产菌,并能有效地清除粉尘、细菌,使洁净区域内的空气参数能满足医疗实际的需求。本文报道我院数年来对洁净空气系统设施的日常维护和科学管理的探索与思考。
简介:目前,在供体器官短缺的情况下,大家公认猪是最合适的异种器官和组织的提供者,用猪肝细胞治疗急性肝衰病人已有报道.如何将肝细胞最大限度完整地、无损伤地分离出来,这是非常关键和重要的一步.我室在进行猪肝细胞的分离中,逐渐探索出一套比较行之有效的方法.材料与方法:采用中国实验用小型猪,常规麻醉、消毒、开腹,用D-Hank′s液进行肝脏原位灌注,再用0.02%EDTA-Hank′s液(37℃)灌注18~20min,摘取肝脏行多点灌注5min,置肝脏于60目钢网上,用直剪迅速剪开肝脏被膜,用镊子夹起轻轻抖动,并用1640液冲洗,边抖动边冲洗,使细胞滤出漏于烧杯中.与此同时,用剪刀把肝组织剪成小块,再用玻璃注射器芯轻轻研磨,边研磨边冲洗,操作要轻,并保持无菌,收集肝细胞,离心洗涤三次,并逐级用80目、100目、120目、150目钢网过滤.分离出的肝细胞进行计数、台盼蓝拒染试验检查、PAS染色、葡萄糖-6-磷酸酶染色及电镜检查.结果:肝细胞存活率90±1.3%,PAS染色显示肝糖元丰富,葡萄糖-6-磷酸酶染色显示酶的活性良好.电镜观察,肝细胞的线粒体、内质网等亚显微结构未见异常.对于猪肝细胞的分离,国外文献报道多采用Ⅳ型胶原酶循环灌注法,但费用很昂贵.在实践中,我们用EDTA代替胶原酶,采用肝脏原位灌注+多点灌注+机械研磨的方法,取得了较为满意的效果.此法与胶原酶灌注法比较,从分离的肝细胞数量、活力、肝糖元及细胞中一些酶的活性都与胶原酶法无显著差异,且光镜及电镜观察,显示细胞形态及亚细胞结构未见异常.我们认为此方法易于控制,价格低廉;而胶原酶法容易消化过度,造成细胞膜破损,或消化不完全造成多个细胞连在一起,且费用昂贵.实验证明,改良的猪肝细胞分离方法为用猪肝细胞治疗急性肝衰病人的研究提供了一个可行的方法.
简介:树突状细胞(DC)是一类专职性抗原呈递细胞,不仅启动免疫反应和诱导免疫耐受,还在调节免疫反应与免疫耐受的平衡中起决定性作用.肝脏因其固有的移植耐受性而在免疫耐受研究中深受关注,肝移植物容易存活,伴有肝移植的其他器官(如心脏、肾脏等)移植存活时间也较其单独移植明显延长.最近有人提出,在肝移植耐受中DC可能起关键作用,但因其难于分离培养,国外仅美国Pittshburgh大学在做相关研究,国内尚未见报道.材料与方法:1.肝非实质细胞的分离:取6~8w小鼠,麻醉后无菌开腹,门静脉插管,用前灌液(PBS+肝素500μ/100ml)灌流2~3min,改用注射器缓慢推注2mlⅣ胶原酶(GIBCOL公司,0.05%);取材后剪碎,15mlⅣ胶原酶液(0.05%)体外消化30min.尼龙网过滤,PBS液清洗(400g×5min离心)两次,稀释成4~5ml细胞悬液.下铺细胞分离液Percoll(Pharmacia公司)制成的不连续密度梯度液,500g×30min离心后,细胞分三层,先吸弃最上层细胞碎片,再吸取两液体界面的肝非实质细胞,避免吸到最底层的血细胞,RPMI1640液(GIBCOL公司)清洗两次,400g×5min离心,即可得肝非实质细胞.2.肝树突状细胞(HDC)的培养:将肝非实质细胞用含灭活的10%胎牛血清(GIBCOL公司)的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2.5×106/ml,接种于24孔培养板,每孔1ml,加GM-CSF(GIBCOL公司)10ng/ml.培养第三天轻轻吸去未贴壁细胞,换液.后隔天半量换液,培养第7~8d可收取HDC.结果与讨论每只小鼠可得肝非实质细胞约1.0~1.5×107个,细胞大小不一,类型较多.培养24~48hr后,有大量细胞贴壁生长,少量HDC前体细胞半贴壁状散在分布,经筛选、扩增,第4d时HDC数量增多,出现6~8个细胞组成的小集落.第7~8d,HDC数量增多,此阶段细胞有一明显的增殖高峰,有大量半贴壁半悬浮的集落,集落表面的细胞有小的突起.第7~8d,每只小鼠HDC得率约为2~3×106个.因HDC难于分离培�
简介:目的研究地黄(Rehmanniaglutinosa)中寡糖的提取分离工艺.方法建立水苏糖的HPLC测定法;以水苏糖含量为指标,采用正交试验优化地黄水提取物的提取工艺,对水提物进一步用离子交换树脂进一步纯化,再进行活性炭柱层析,以不同浓度梯度乙醇洗脱,分得寡糖的不同部位.结果地黄水提取的最佳工艺为A2B3C2,即溶剂(水)体积10倍,提取3次,每次提取1h.水提物经活性炭柱层析得到4个部位,部位Ⅰ~Ⅳ,其中部位Ⅱ及部位Ⅲ中水苏糖的含量分别为20.99%及60.51%.结论地黄水提取的较佳工艺条件为A2B3C2,活性炭柱层析可以较好地将地黄中寡糖进行分离,其中水苏糖的HPLC测定法简便、稳定、可靠.
简介:摘要目的了解SEROZYME-I型磁分离酶联免疫内分泌定量测定仪检测生殖内分泌激素FSH、LH、T、P、E2、PRL的性能。方法使用SEROZYME-Ⅰ型磁分离酶联免疫内分泌定量测定仪及其配套试剂对FSH、LH、T、P、E2、PRL检测结果的线性、精度、互染率、可比性、抗干扰能力进行评价。结果SEROZYME-I型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统及其配套试剂对FSH、LH、T、P、E2、PRL检测结果的线性良好;总重复性CV<6%,批内变异CV<4%,批问变异CV<12%,互染率<3%;与RIA法同时检测20份标本,其结果经统计学分析,两者相关性良好。结论磁分离酶联免疫激素定量分析系统检测生殖内分泌六项激素重复性好,灵敏度高,快速简便,无放射性污染,有推广应用价值。