简介:L-丙氨酸作为最小的手性化合物之一,被广泛应用于食品、医药和日化领域.目前,微生物法生产L-丙氨酸存在发酵周期长,生产强度低等问题.为此,通过强化前体供给、启动子工程和转运工程等代谢工程策略,构建高产L-丙氨酸的大肠杆菌细胞工厂.进一步通过生化工程策略优化L-丙氨酸生产工艺,提高L-丙氨酸大肠杆菌细胞工厂的生产性能.结果:过表达gapA(3-磷酸甘油醛脱氢酶基因)强化前体丙酮酸供给,使L-丙氨酸产量和转化率分别提高了 5.1%和15.6%.启动子工程优化gapA表达,使L-丙氨酸产量和转化率进一步提高到18.3g/L和0.55 g/g.过表达L-丙氨酸外运蛋白(AlaE),增加L-丙氨酸转运,使L-丙氨酸产量提高到20.4 g/L.生化工程策略优化培养基组分,得到最佳碳源为葡萄糖40 g/L,最佳氮源为(NH4)2SO4 25 g/L.最佳发酵条件为:接种量15%,10h转厌氧发酵和变速补料发酵.5L发酵罐发酵36h,...