简介:玻璃化法作为简单方便的超低温保存方法之一,目前已成功地应用于植物茎尖、胚性细胞、原生质体、悬浮细胞等多种单一组织或细胞培养体系,但尚未见对幼苗这种复合组织的保存报道.本文研究了拟南芥(Arabidopsisthaliana,Landsbergerecta)幼苗的玻璃化保存程序并发现了一些有价值的研究现象.幼苗来自萌发的种子,种子消毒后播种在MS培养基上,4℃处理48h后转入25℃,10h光周期,萌发不同天数为实验材料.玻璃化程序包括:1)预处理———用2M甘油+04M蔗糖在20℃处理20min;2)脱水处理———用玻璃液PVS2(30%w/v蔗糖+15%w/v乙二醇+15%w/v二甲基亚砜+含04M蔗糖的MS)0℃处理50min;3)冷冻融化———玻璃液及幼苗一起投入液氮(LN2)保存,20℃室温自然融化;4)置换———用MS+12M蔗糖20℃处理30min,成活力检查;幼苗转到MS培养基培养5天,观察再生长状况.10天后转到培养土中,在生长箱中长到结实.结果表明:1)使用完整的程序,冻融后成活率最高,为765%;玻璃液处理是成功的关键,省去此处理成活率为0;冻融是造成玻璃化保存成活率降低的主要因子;2)由萌发0~2天的种子形成的幼苗便使用该技术,冻存融化后成活率分别为88%,838%和765%,结实正常;3)
简介:菊花(DendranthemaMorifolium)是多年生宿根花卉,原产我国,是世界上栽培面积较大的花卉。其品种多达25000种,我国的菊花品种也有7000种以上。种质保存很重要,本文通过对526种观赏菊的组织培养,得出观赏菊的取材方法及材料的诱导、增殖和生根的最佳培养基配方,即外植体为茎尖和茎段,在MS+BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L的培养基上接种诱导分化丛生芽,选择优质芽低温保存种质,然后在MS+BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L的培养基上快速增殖,在1/2MS+IBA0.2mg/L培养基上生根及培养壮苗,出瓶培养成生产用苗。为观赏菊的种质保存研究提供依据。