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  • 简介:干旱应答元件结合蛋白(dehydrationresponsiveelementbindingprotein,DREB),在植物应对干旱、盐碱低温胁迫反应中起非常重要调控作用。利用已知甘蔗栽培种DREB2转录因子序列,设计引物,按照同源克隆方法,获得了2个割手密DREB2基因DNA序列,分别命名为SsDREB2-aSsDREB2-f(GenBank登录号分别为:KU963272KU963277)。序列分析结果表明,SsDREB2-a基因序列全长为1578bp,SsDREB2-f基因序列全长为1729bp,2个基因均包含1个内含子2个外显子。SsDREB2-aSsDREB2-f基因cDNA序列全长分别为824bp971bp,均编码262个氨基酸。序列比对分析显示,2个基因序列相似性为96.6%,编码蛋白相似性为98.9%,存在3个氨基酸变异位点。系统进化分析结果显示,割手密DREB2转录因子与高粱、牛鞭草、斑茅、玉米等植物DREB2转录因子同源关系最近。基因获得为下一步了解DREB2基因表达与割手密抵御非生物胁迫能力之间关系奠定了基础。

  • 标签: 割手密 DREB2 基因克隆 比较分析
  • 简介:《基因学与应用生物学》,期刊曾用名《广西农业大学学报》、《广西农业生物科学》,创刊于1982。从2009开始,《广西农业生物科学》更名为《基因学与应用生物学》,已入编《中文核心期刊要目总览》2011版(即第六版)之综合性农业科学类核心期刊,是中国科学引文数据"中国期刊方阵",先后被国际知名检索系统——英国国际农业与生物科学研究中心(CABI)、美国《化学文摘》(CA:JYYSAZ)、美国《剑桥科学文摘:自然科学》(CSA:NS)、英国《动物学记录》(ZR)俄罗斯《文摘杂志》(AJ)等收录。

  • 标签: 应用生物学 基因组学 中国期刊方阵 《动物学记录》 广西农业大学 农业科学类
  • 简介:《基因学与应用生物学》,期刊曾用名《广西农业大学学报》、《广西农业生物科学》,创刊于1982。从2009开始,《广西农业生物科学》更名为《基因学与应用生物学》,已入编《中文核心期刊要目总览》2011版(即第六版)之综合性农业科学类核心期刊,是中国科学引文数据"中国期刊方阵",先后被国际知名检索系统——英国国际农业与生物科学研究中心(CABI)、美国《化学文摘》(CA:JYYSAZ)、美国《剑桥科学文摘:自然科学》(CSA:NS)、英国《动物学记录》(ZR)俄罗斯《文摘杂志》(AJ)等收录。

  • 标签: 应用生物学 基因组学 中国期刊方阵 《动物学记录》 广西农业大学 农业科学类
  • 简介:橡胶树起源热带雨林,对低温敏感。在中国橡胶树(Heveabrasiliensis)种植受到严重低温胁迫影响,而CBF/DREB1(C-repeatbindingfactor/dehydrationresponsiveelementbindingfactor1)是低温信号通路中重要转录因子,但目前橡胶树中仅克隆到HbCBF1。本研究从橡胶树中克隆出两个新CBF家族基因HbCBF2HbCBF3。经测序,HbCBF2HbCBF3分别编码了234个242个氨基酸。氨基酸序列分析表明HbCBF2HbCBF3均含有CBF家族特有两个短肽序列包括一个保守DNA结合结构域NLS簇。通过构建进化树发现HbCBF2、HbCBF3与HbCBF1以及拟南芥中CBF序列同源性很高。将HbCBF2HbCBF3构建到pGEX4T-1原核表达载体上,在Transetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE电泳检测它们蛋白质表达量为51.8kD53kD,与预期一致。对蛋白诱导条件进行优化,构建融合表达质粒pGEX4T-1-CBF2pGEX4T-1-CBF3,在28℃、IPTG浓度为0.4mmol/L情况下表达量最佳。实验为纯化蛋白研究HbCBF2HbCBF3在橡胶树中功能提供理论帮助。

  • 标签: 巴西橡胶树 CBF 原核表达
  • 简介:基于转基因作物安全性考虑,在用于转化表达载体上除了含有目的基因以及控制该目的基因表达启动子终止子外,最好不存在其它有可能存在安全性争议DNA序列,由此培育转基因植物可能将更易于被消费者所接受。本研究以pCAMBIA1300载体为基础,基因操作去除pCAMBIA1300质粒上潮霉素抗性基因花椰菜花叶病毒35S启动子序列,构建了两种只含有水稻蜡质基因启动子引导蜡质基因反义片段表达载体,p13AWY-1p13AWY-2。其中p13AWY-1表达载体含有一个由水稻蜡质基因启动子、第一内含子、反义蜡质基因(Waxypro+intron1+anti-Waxy)融合基因单元;而p13AWY-2表达载体含有两个正向排列Waxypro+intron1+anti-Waxy融合基因单元。我们通过构建水稻反义蜡质基因安全性表达载体,试图为植物安全性表达载体构建提供一种思路,为今后大规模商业化采用转基因技术改良农作物遗传特性提供安全转基因方法。

  • 标签: 转基因植物 植物表达载体 生物安全性 35S启动子 抗生素标记 水稻
  • 简介:通过增加外源CaCl2钙离子螯合剂EGTA处理后,研究香蕉幼苗在60mmol/LNaCl人工模拟盐胁迫0、4h、8h、12h、24h48h不同时间下,测定其叶片CaMCa^2+-ATPase基因相对表达量。结果表明,在NaCl胁迫过程中,香蕉幼苗在正常生长条件下,其根叶片CaM基因Ca^2+-ATPase基因均有表达。巴西蕉幼苗根在盐胁迫过程中CaM基因没有发生显著变化,但是粉蕉根却发生了显著变化,这可能与粉蕉耐盐性高于巴西有关。随着盐胁迫时间延长,巴西蕉粉蕉幼苗根Ca^2+-ATPase基因相对表达量均呈现先上升后下降趋势。

  • 标签: 香蕉幼苗 盐胁迫 CaM基因 Ca2+-ATPase基因 荧光定量
  • 简介:DREB类转录因子是一类植物中特有的,在非生物逆境胁迫中起重要作用调控因子。本研究以割手密为材料,采用同源基因克隆方法克隆获得2个DREB2类转录因子基因SsDREB2-1SsDREB2-2(GenBank登录号分别为KU963264KU963265)。序列分析表明,这2个基因长度分别为814bp709bp,分别编码262227个氨基酸;预测其蛋白质分子量分别为28.66kD24.95kD,等电点(PI)分别为5.426.47。氨基酸亲水/疏水性分析表明,这2个转录因子属于亲水性蛋白。多序列比对分析表明,两基因序列相似性为98.7%。原核表达分析表明,这2个基因编码区能正常表达出目的蛋白,说明得到2个基因为功能基因而非假基因。

  • 标签: 割手密 DREB 基因克隆 原核表达
  • 简介:为研究黄金茶出芽早分子机制,本研究采用SMART-RACE技术,获得了与解除休眠相关转录因子CsDAM2基因全长eDNA序列,并进一步对该氨基酸序列进行了生物信息学分析。研究发现CsDAM2基因全长为1386bp,序列分析表明,该序列含有一个完整编码区,大小为657bp,编码区GC含量为50.45%。此编码区可以编码分子量为24.86kD亲水性蛋白,该蛋白由218个氨基酸组成,理论等电点(pI)为8.96。黄金茶CsDAM2蛋白有11个磷酸化位点,属跨膜蛋白,与毛白杨DAM3相似性为71%,与已登录茶树MADS.box蛋白一致性为35%。本研究为进一步揭示黄金茶春芽萌发早分子机制提供了理论依据。

  • 标签: 黄金茶 CsDAM2基因 全长克隆 序列分析
  • 简介:利用生物信息学手段,结合公共大豆基因数据库大豆发育表达芯片数据获得大豆GST家族基因序列、蛋白序列染色体位置等信息并进一步对基因组织表达等进行分析。结果显示大豆中含94个GST家族基因,根据系统发育分析将这些GST基因分成5个亚家族;定位分析表明,94个GST基因分布于大豆16条染色体上。表达分析结果表明,14个不同发育阶段,大多成员至少在一个组织中表达,11差异表达基因中有7在根中表达,另外4在其它部位优势表达,基因表达具有一定特异性。本研究为进一步研究GST家族功能及其抗逆利用提供基础。

  • 标签: GST家族 全基因组筛选 分类分析 差异表达基因
  • 简介:作为植物特有的转录因子家族,TCP基因处于植物多种信号传导途径中心节点位置。对蒺藜苜蓿全基因进行检索,共获得21个TCP基因序列。蒺藜苜蓿TCP成员间在蛋白质大小、等电点等方面具有明显差异。对蒺藜苜蓿TCP基因进行基因结构、染色体定位系统进化分析,发现蒺藜苜蓿TCP基因结构较为简单,一般不含有内含子,仅一个外显子。21个基因中仅有5个基因有内含子。系统进化关系上其中4个基因亲缘关系非常近。这4个基因位于1号、4号、7号染色体上TCP基因聚集存在位置。蒺藜苜蓿TCP基因在各个器官间特异性表达。TCP基因参与蒺藜苜蓿根瘤发育过程,也响应外界盐胁迫病菌侵染刺激。本研究发现蒺藜苜蓿TCP基因家族信息,可为蒺藜苜蓿乃至豆科植物育种提供有价值信息。

  • 标签: 蒺藜苜蓿 TCPs基因家族 进化 表达模式
  • 简介:本研究以普通小麦品种‘中国春’染色体DNA为封阻,用生物素(biotin-16-dUTP)标记大麦染色体DNA作为探针,通过基因原位杂交法解析了来自杂交组合CS×(CS+Betzes2H)杂种后代X99-13遗传组成,此材料含有42条染色体,其中1条大麦染色体,2条小麦-大麦易位染色体39条小麦染色体,鉴定为小麦-大麦代换易位系。以小麦第二部分同源群短臂探针psr131进行RFLP分析,结果表明此代换易位系是涉及小麦染色体2B大麦染色体2H代换易位。为进一步选育小麦-大麦2H纯合易位系及利用其上α-淀粉酶抑制蛋白基因打下了坚实物质基础。

  • 标签: 小麦 大麦 代换易位系 GISH RFLP
  • 简介:鉴定合成或通过高通量随机组合方法获得潜在功能片段生物学功能需要一套高效便捷酵母表达专用载体。酵母表达载体pYES2多克隆位点处不含起始密码子,通过设计含有ATGEcoRⅠ酶切位点特异性引物扩增一段Intron,利用In-Fusion重组技术(Clontech)将该片段构建酵母表达载体pYES2,得到一个含有ATG重组酵母表达载体pYES2-ATG。为了检测该载体功能,扩增不含起始密码子DNA序列nlea,该序列由本实验室设计合成,具有潜在耐盐功能。构建重组表达载体pYES2-ATG-nlea在酵母中进行功能鉴定。研究结果表明,半乳糖诱导后,含pYES2-ATG-nlea重组酵母菌株耐盐能力明显高于含pYES2-ATG空质粒菌株,表明在该载体系统上添加了起始密码子nlea成功表达,具有一定耐盐性,同时也证明改造载体系统可用于没有起始密码子编码区序列功能筛选鉴定。pYES2-ATG酵母载体系统不影响原始载体基本功能元件表达,同时能使不含起始密码子编码区序列在酵母中正常表达,在大规模进行多个基因功能鉴定中具有重要应用价值。

  • 标签: 起始密码子 酿酒酵母 pYES2 In-Fusion重组技术
  • 简介:表型学,是将生物体表现型特征视为一个整体(表型)进行研究领域,生物体表型特征大都是由基因与环境相互作用产生。1996,衰老研究中心主任StevenA.Garan在滑铁卢大学一次应邀演讲上首先提出了Phenomics概念。

  • 标签: 表型特征 滑铁卢大学 相互作用 生物体 表现型 基因组
  • 简介:对香蕉束顶病毒(BBTV)广州分离物MGHDNA组分6全序列进行了克隆及序列分析。并对来自广州、海南、台湾、澳大利亚及印度BBTV组分6进行了分析,结果表明:BBTV组分6都含有CR-SL(stem-loopcommonregions),CR-M(majorcommonregions)结构等典型特征序列。BBTV组分6核苷酸全序列、开放阅读框(ORF)核苷酸、CR-M核苷酸序列及其氨基酸序列系统进化树结果显示,BBTV分离物可分为2个组群:亚洲和南太平洋。CR-M结构在2个组群间有明显差异,南太平洋组分离物CR-M结构中有一段不完全保守16个核苷酸重复序列,而在亚洲分离物中这个序列并不重复。对BBTV组分6蛋白质进行了二级结构预测理化性质分析发现,这2个类群蛋白质二级结构有差异,但是理化性质无明显差异。

  • 标签: 香蕉束顶病毒 DNA组分6 克隆 分离物
  • 简介:西红花总苷是栀子果实中次生代谢产物,具有重要药理作用,也是国际流行天然色素"栀子黄"主要成分。番茄红素β-环化酶b(lycopeneβ-cyclase,LCYb)催化合成了西红花总苷代谢途径前体化合物-β-胡萝卜素。本研究利用RACE技术,从栀子果实中克隆了一条长1672bp序列,含有一个1500bp开放阅读框,编码499个氨基酸组成蛋白质。该蛋白具有番茄红素β-环化酶结构域,分子量为56.39kD,N端有一个40个氨基酸组成质体定位信号肽,属于LCYb亚家族,因此命名为GjLCYb2。进行密码子优化后,利用两种原核表达系统诱导GjLCYb2融合蛋白表达,pSYNO-1系统可以在大肠杆菌中表达出可溶蛋白,pET-28a(+)系统表达蛋白以包涵体形式存在。荧光绝对定量qPCR检测结果表明,在栀子果实发育成熟过程中,GjLCYb2基因表达量变化与西红花总苷合成量变化趋势一致,表明GjLCYb2基因可以作为遗传操作靶点,进行栀子果实中西红花总苷生物合成途径调控。

  • 标签: 栀子 西红花总苷 番茄红素Β-环化酶
  • 简介:转录连接基因遗传信息与蛋白质,也是基因功能研究基础出发点。单分子测序技术是近年逐渐成熟新一代测序技术,也称为第三代测序技术,在转录学研究方面较前代测序技术具有独到优势,应用前景广阔。在非模式植物功能基因学研究中,全长转录本获得可有力地推进相应基础研究水平,而第三代测序技术为此提供了较好解决方案。本研究就目前技术较为成熟且应用较广泛SMRT等单分子测序技术原理进行了介绍,综述了该技术在非模式植物转录学研究中应用现状,对其应用前景进行了展望。

  • 标签: 单分子测序 全长转录组 SMRT 非模式植物
  • 简介:微卫星标记(SSR)是分子育种中常用遗传标记,葫芦中仅有黄瓜、甜瓜、西瓜进行了大规模SSR标记开发,其他作物均不同程度地面临SSR标记缺乏情况。利用近源物种间分子标记具有一定通用性,本研究合成源于黄瓜、甜瓜西瓜60对SSR标记,从中筛选出42对可用标记,对甜瓜、西瓜、黄瓜、南瓜、苦瓜、冬瓜、节瓜丝瓜8种葫芦作物进行验证,分析这三种瓜类SSR标记在葫芦穿梭性。结果表明,42对标记中有29对(69%)能在8种常见葫芦作物中都得到有效扩增,在5种及5种以上物种中有扩增引物达到38对,占90.5%,表明这三种瓜类SSR标记在葫芦作物中有良好穿梭性,这为葫芦中数目庞大未测序作物提供一种切实可行、高效低成本分子标记开发方法。

  • 标签: SSR 葫芦科 穿梭标记 黄瓜 甜瓜 西瓜