简介：目的：探讨手足口病（HFMD）患JLN拭子病毒水平及其临床意义。方法：对39例HFMD患儿采集咽拭子（其中19例于恢复期采集咽拭子复查），以荧光定量RT—PCR方法检测病毒负荷量并做对比分析：用描述性流行病学方法对实验室确诊病例进行流行病学特征分析。结果：本组病例均为肠道病毒71型（EV71）检测阳性，其中合并甲型流感病毒、冠状病毒感染各1例，副流感病毒感染4例。急性期患儿EV71病毒负荷水平明显升高，恢复期病毒水平显著下降，8例恢复期患儿病毒检测阴性。结论：2010年秋冬季佛山地区儿童HFMD病原以EV71为主，在流行季节可出现流感病毒及其他呼吸道病毒混合感染。咽拭子荧光定量RT—PCR检测是儿童手足口病病原学诊断的快速有效手段。HFMD临床表现轻重与患儿咽部EV71病毒负荷量无相关性，患病早期病毒呈高水平表达，抗病毒治疗宜尽早实施。

简介：摘要目的构建miR-7-1启动子核心序列的真核表达载体，并初步探讨其意义。方法根据5’端缺失实验原理，设计引物，PCR法分别扩增含不同长度启动子序列和相同miR-7-1成熟体序列的产物；纯化、经KPNI和XHOI双酶切后将它们分别亚克隆入pGL3.0-Basic真核表达载体，并进行酶切及测序鉴定；将三个构建成功的pGL3.0-miR-7载体（分别命名为p-1189-miR-7，p-1731-miR-7，p-2192-miR-7）体外瞬时转染小鼠乳腺癌4T1细胞；用Real-timePCR检测各组中miR-7成熟体的表达水平；CCK-8法检测细胞生长的变化；最后，利用TRANSFAC数据库预测结合miR-7-1启动子核心序列的潜在转录因子。结果酶切和测序验证成功构建了p-1189-miR-7、p-1731-miR-7、p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体；与表达载体p-1189-miR-7、p-1731-miR-7转染组相比，表达载体p-2192-miR-7瞬时转染4T1细胞后可有效表达miR-7成熟体，并显著抑制4T1细胞的体外生长（p＜0.05），提示miR-7启动子序列-1593位点到-2024位点为核心序列；最后，预测结果显示NK2-同源盒-5（NK2-Homebox-5，NKX2-5）和肝细胞核因子4（hepatocytenuclearfactor4homeobox，HNF-4）可能是结合该核心序列的转录因子。结论成功构建了p-1189-miR-7，p-1731-miR-7，p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体，并筛选到miR-7-1启动子的核心序列（-1593位点到-2024位点），为后续深入研究miR-7-1在乳腺癌发生中的作用及机制提供了前期实验基础。