简介：目的观察外源性第10号染色体同源缺失磷酸酶和张力蛋白(PTEN)基因对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖、凋亡及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法取对数期SPC-A-1细胞转染重组腺病毒Ad-PTENGFP、Ad-GFP,分别设为PTEN组、空载组,并检测转染效率,另取不做处理为对照组。MTT法检测并对比各组细胞增殖情况;Hoechst33342荧光染色法检测细胞凋亡情况;Transwell试验检测细胞侵袭能力;分别采用实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法检测并对比各组细胞中PTENmRNA和蛋白、粘着斑激酶(FAK)、蛋白激酶B(AKT)mRNA表达情况及pFAK/FAK、pAKT/AKT。结果FACS法检测重组腺病毒Ad-PTEN-GFP、Ad-GFP对SPC-A-1细胞转染效率分别为(82.41±5.46)%、(83.02±6.20)%。PENT组MTT试验不同时刻OD值显著低于对照组和空载组(P<0.05),3组OD值均随时间延长呈显著升高趋势(P<0.05);Hoechst33342荧光染色发现,对照组和空载组细胞形态正常,呈弥散均匀荧光,PTEN组部分细胞核浓染,呈月牙形聚集、颗粒状荧光碎片,PENT组细胞凋亡率显著高于对照组和空载组(P<0.05);PENT组细胞侵袭数目显著少于对照组和空载组(P<0.05);对照组和空载组OD值、凋亡率及细胞侵袭数目比较差异均无显著性(P>0.05);与对照组和空载组比较,PENT组PENTmRNA和蛋白相对表达量显著较高(P<0.05),pAKT/AKT、pFAK/FAK显著较低(P<0.05);对照组和空载组PENTmRNA和蛋白相对表达量、pAKT/AKT、pFAK/FAK、3组AKT、FAKmRNA相对表达量比较差异均无显著性(P>0.05)。结论外源性PTEN基因可显著抑制SPC-A-1细胞增殖及侵袭,促进其凋亡,推测与抑制AKT/FAK信号通路有关。

简介：

简介：本研究探讨四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）诱导白血病细胞株SHI-1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu-1在体外培养SHI-1细胞,用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst33258荧光染色等分析细胞凋亡。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位（ΔΨm）,用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导SHI-1细胞凋亡过程中bcl-2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表达变化。用RT-PCR观察经ZGDHu-1作用后SHI-1细胞bcl-2、bax、p53基因表达改变;同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明：ZGDHu-1能诱导SHI-1细胞凋亡,呈作用时间和剂量的量效关系,出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加;Annexin-V/PI和Hoechst33258荧光染色后细胞发生凋亡的特征性改变。SHI-1细胞经不同浓度的ZGDHu-1体外培养后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是bax基因和蛋白上调,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调,均呈剂量依赖性。随ZGDHu-1作用浓度的增加,ΔΨm下降,而线粒体膜蛋白表达显著升高,端粒酶hTERT-mRNA的表达显著下调。结论：ZGDHu-1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl-2比值,使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu-1诱导细胞凋亡的途径之一,Fas也参与其中,端粒酶有可能是其抗肿瘤的作用靶点。

简介：本研究探讨去甲基化制剂地西他滨（decitabine）和（或）组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）对MDS—RAEB细胞株SKM—1的影响及作用机制．用台盼蓝拒染法研究药物对SKM—1细胞生长曲线的影响；用四氮唑蓝还原试验和流式细胞术观察药物对SKM—1细胞分化作用；用AnnexinV—FITC标记药物作用后的细胞，了解其早期凋亡的情况；用RT—PCR研究药物作用前后细胞Fas，survivin和P15^INK4B。基因表达的变化。结果表明：decitabine和（或）TSA对SKM—1细胞生长有抑制作用，能促进SKM—1细胞分化，细胞表面CD14、CD11b表达增加，HLA—DR表达减少；decitabine和（或）TSA处理SKM—1细胞后，SKM—1细胞凋亡增加，细胞Fas和P15^INK4BmRNA表达增加，survivinmRNA表达减少。结论：decitabine和TSA均可以促进SKM—1细胞凋亡和分化，可能与Fas、P15^INK4B和survivin基因表达有关，二者联用有协同作用。

简介：本研究构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立U266-li稳定细胞株,为下一步Bmi-1的功能研究及应用RNAi技术治疗打下基础。设计、合成1对针对Bmi-1mRNA的shRNA序列,退火后连接到pLVTHM干扰载体上,与psPAX2、PMD2G共转染HEK293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染U266细胞,建立稳定细胞株;应用实时PCR和Westernblot技术分别检测U266稳定细胞中Bmi-1及P14mRNA和蛋白水平的表达,并与对照组进行比较。结果表明,成功构建了针对Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,病毒滴度为5×107TU/ml;建立稳定转染的U266细胞株。有效干扰验证显示,shBmi-1能明显降低Bmi-1的mRNA及蛋白水平,而P14的mRNA及蛋白水平则都上调,其差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：成功构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立稳定干扰Bmi-1表达的U266细胞株。

简介：目的探索胃癌细胞miRNA表达情况并确定MKN-45胃癌细胞株侧群（sidepopulation,SP）细胞中的关键miRNA。方法利用荧光活化的细胞分选技术及Hoechst33342荧光染料标记胃癌侧群细胞,用miRNA基因芯片检测胃癌侧群细胞及主群细胞的表达情况,根据miRNA差异表达情况及生物信息学预测结果筛查关键miRNA。结果设定miRNA表达差异在1.5倍及以上为差异显著,发现侧群细胞和主群细胞相比,表达升高和降低的miRNA各有34条;经实时RT-PCR验证及生物信息学预测发现,表达下调的hsa-miR-3175和hsa-miR-203及表达上调的hsa-miR-130a,hsa-miR-324-5p,hsa-miR-34a和hsa-miR-25-star在维持及调控侧群细胞的特性方面具有重要作用。结论胃癌细胞MKN-45侧群细胞中差异表达的miRNA为hsa-miR-3175,hsa-miR-203,hsa-miR-130a,hsa-miR-324-5p,hsa-miR-34a和hsa-miR-25-star,但是否在维持及调控侧群细胞的特性方面具有重要作用还需进一步研究证实。

简介：目的：探讨二甲双胍（metformin）对体外培养的急性单核细胞白血病细胞株THP-1细胞增殖、分化和凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法：用不同浓度的二甲双胍分别对THP-1细胞进行体外干预,24h、48h后用CCK-8法检测细胞的增殖情况;20mmol/L二甲双胍干预24h后用AnnexinV/7-AAD双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b、CD14的变化;实时定量PCR检测BCL-XL、BAX、BIM、Caspase-3mRNA表达的变化。结果：CCK-8法检测显示二甲双胍对THP-1细胞增殖具有显著的抑制作用,且作用呈时间和剂量依赖性;20mmol/L二甲双胍干预THP-1细胞24h后,流式细胞术检测结果显示CD11b、CD14阳性细胞率无明显变化（P〉0.05）;AnnexinV/7-AAD标记的流式细胞术检测显示,实验组和对照组早期凋亡细胞比例分别为（2.02±0.85）%和（4.46±1.33）%,晚期凋亡细胞比例分别为（1.43±0.83）%和（3.31±0.59）%,在实验组明显高于对照组（P〈0.05）;20mmol/L二甲双胍诱导THP-1细胞过程中BCL-XL、BIM表达无明显变化,BAX、Caspase-3表达显著增加（P〈0.01）。结论：二甲双胍能有效抑制THP-1细胞增殖并促进细胞凋亡,但对THP-1细胞分化无明显影响,其促进凋亡机制可能与上调BAX及Caspase-3基因有关。

简介：目的研究金雀异黄素（GEN）对人结癌细胞系（SW480）细胞的作用并探讨其作用机理。方法采用细胞计数法MTT法、免疫组化等方法，观察GEN对体外培养的SW480细胞的生长抑制以覆COX2表达的影响。结果GEN对体外培养SW480细胞具有明显的生长抑制效应且呈剂量-效应的依赖关系，当50μmol／LGEN作用SW480细胞24h，抑制率达28％。免疫组化的结果显示：GEN处理后的SW480细胞COX2表达下降。结论CEN对体外培养SW480细胞具有增殖抑制作用，CEN通过下调SW480细胞COX2蛋白的表达，促进细胞凋亡。

简介：为了探索CML的治疗新思路研究了siRNA(smallinterferingRNA)对K562细胞株bcr-abl融合基因表达的抑制作用.制备特异性对应bcr-abl融合基因的siRNA,转染K562细胞株,采用RT-PCR法测定bcr-abl融合基因mRNA的表达.结果表明:siRNA对bcr-abl基因表达的抑制作用随浓度的增加而增强,0.2μgsiRNA能使bcr-abl融合基因mRNA的表达在24和48小时分别降低至对照组的19.9%和26.6%,但72小时时恢复到原水平,同时转染siRNA后细胞生长受到抑制.结论:siRNA可以有效的抑制K562细胞株中bcr-abl融合基因的表达.

简介：

简介：目的：本文旨在研究长春新碱（vincristine,VCR）与盐霉素（salinomycin,Sal）联合作用对急性T淋巴细胞白血病jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法：CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各实验组细胞凋亡率;Westernblot检测凋亡相关蛋白BCL-2、caspase-3和caspase-8表达水平。结果：VCR、Sal单独及联合处理Jurkat细胞株均显示出明显的增殖抑制作用,两药联合使用的增殖抑制作用更显著（P〈0.05）,具有协同作用。联合用药组BCL-2蛋白水平较VCR和Sal单独处理组明显减少,而caspase-3和caspase-8水平明显增高;VCR和Sal联合用药组细胞凋亡率较VCR和Sal单独处理组明显提高（P〈0.05）。结论：长春新碱联合盐霉素作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖及诱导凋亡的作用。

简介：目的:利用诱导多能性干细胞(iPSC)技术建立原发性骨髓纤维化(PMF)诱导多能性干细胞系,为研究血液病的发生发展提供一个实验模型。方法:采用非基因整合型质粒重编程携带JAK2V617F突变的PMF患者骨髓来源的单个核细胞,诱导生成该患者特异的iPS细胞株。结果:采用此方法建立的iPS细胞株,在体外能够稳定传代,无外源性基因整合,多能性基因表达水平与人胚胎干细胞类似,在体内具有形成三胚层结构的能力。测序结果显示,所建立的患者的iPS细胞株携带不同负荷的JAK2V617F突变。结论:成功地建立非基因整合的PMF患者特异的iPS细胞株,这为研究PMF的发病机制、化疗药物筛选及实现精准化治疗提供了一个重要的疾病模型。

简介：目的比较观察甘草黄酮、熊果苷对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响。方法选择系列浓度梯度的药物作用于B16黑素瘤细胞株，测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率变化。结果在实验浓度时，甘草黄酮具有浓度依赖性黑素合成抑制作用，与熊果苷比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论两种化合物均显示有抑制黑素生成的作用，存在一定细胞毒性。

简介：摘要目的探讨二氯乙酸钠（DCA-Na）诱导人胃癌SGC-7901和MGC803细胞株凋亡的影响。方法MGC-803细胞与SGC-7901接种于含有浓度为10%胎牛血清的RPMI1640培养液当中，待持续培养24h之后，加入二氯乙酸钠（10、40与80?mol/L），继续培养，时间为12、24h与48h。待药用24h后，运用流式细胞术对细胞凋亡率进行检测。结果二氯乙酸钠对人胃癌SGC-7901与MGC803细胞株凋亡具有依赖性诱导作用。结论二氯乙酸钠对胃癌SGC-7901与MGC803细胞增殖具有抑制作用，并能诱导其凋亡。

简介：摘要目的探讨榄香烯联合奥沙利铂诱导人肺腺癌A549细胞生长抑制和凋亡的作用。方法将人肺腺癌A549细胞株进行传代培养，将不同浓度榄香烯以及奥沙利铂作用于细胞株上，MTT法检测A549细胞的增殖抑制率。结果榄香烯作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是54.8μg/ml、27.2μg/ml，奥沙利铂作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是12.2μg/ml、3.8μg/ml。联合组抑制率明显高于单药组。结论两者联合在一定浓度范围内呈现出协同的抗肿瘤作用。

简介：目的了解Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达.方法分别采用放射性配体分析与RT-PCR法检测GHR在Bel-7402与QGY-7701肝癌细胞株的表达.结果7402肝癌细胞可表达GHRmRNA,在蛋白表达水平放射性配体法发现GHR在此肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891,平衡解离常数为0.63±0.04583nmol/L;未发现7701肝癌细胞株表达GHR.结论7402肝癌细胞株表达GHR,可为将来研究rhGH与原发性肝癌的增殖关系奠定一些实验基础.

简介：目的探讨PTEN—P13K／AKT信号传导途径对胃癌细胞株MKN28凋亡的调控作用及其机制。方法构建PTEN真核表达载体，转染至胃癌细胞株MKN28中（转染组）；同样方法转染空载体和等量的PBS分别作为阴性对照组和空白对照组，检测对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及对P13K、AKT、Caspase-3、Caspase-9的影响。MTT检测细胞生长曲线，TUNEL染色法检测细胞凋亡，Westernblot检测蛋白的表达。P13K抑制剂LY294002处理未转染PTEN的胃癌细胞株MKN28（处理组）；对照组加入等量的PBS，抑制P13K活性后检测细胞凋亡蛋白及凋亡相关蛋白的表达。组间比较采用t检验，时间依赖性检验采用相关分析方法。结果成功构建PTEN真核表达质粒并转染至胃癌细胞株MKN28中，获得稳定过表达PTEN的细胞模型。MTT检测发现转染组胃癌细胞株MKN28生长明显受到抑制，且呈时间依赖性（r=0．938，P〈0．05）。转染组平均凋亡率达到27．86％±4．78％，明显高于阴性对照组的0．01％±0．01％（t=9．527，P〈0．05）。转染PTEN后，转染组P13K蛋白表达量为0．25±0．03，明显低于空白对照组的0．93±0．16及阴性对照组的0．96±0．15（t=7．235，8．883，尸〈0．05）。转染组活化的AKT（P．AKT）蛋白表达量为0．214-0．03，明显低于空白对照组的0．93±0．13及阴性对照组的0．91±0．12（t=9．347，9．802，P〈0．05）。而转染组凋亡相关蛋白Caspase-3及Caspase-9表达量分别为0．86±0．11和0．87±0．12，明显高于阴性对照组的0．16±0．03和0．18±0．04及空白对照组的0．15±0．02和0．16±0．03（t=10．634，10．999，9．448，9．942，P〈0．05）。抑制P13K活性后，处理组细胞凋亡率为28．60％±4．50％，明显高于对照组的0．12％±0．06％（t=10．961，P〈0．05）。Westernblot检测发现处理组P13K和P—AKT的蛋白表达量分别为0．18±0．02和0．11±0．叭，明显低于对�

简介：本研究探讨胰岛素样生长因子-1（IGF—1）对人骨髓瘤细胞株KM3增殖的影响以及MAPK途径磷酸化在该过程中的作用。采用流式细胞术检测不同浓度的重组人IGF-1处理后KM3细胞周期的变化．Westernblot法检测细胞内MAPK信号转导途径主要分子Erk1／2磷酸化在IGF-1刺激及PD98059特异性抑制作用下的改变，TUNEL法检测特异性阻断Erk1／2磷酸化在抑制KM3细胞增殖和诱导凋亡中的作用。结果表明，IGF—1可以显著提高S期和G2／M期的KM3细胞比率和细胞内Erk1／2分子的磷酸化水平，阻断IGF-1引起的Erk1／2磷酸化可以显著抑制KM3细胞的增殖并引起其凋亡。结论：IGF-1引起的Erk1／2分子磷酸化在KM3细胞增殖过程中起着十分重要的作用。

简介：目的：探讨热休克蛋白90（HSP90）抑制剂17-二甲胺乙胺基-17去甲氧基格尔德霉素（17-DMAG）对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖及凋亡的影响。方法：收集Jurkat细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果：不同浓度17-DMAG作用于Jurkat细胞48h后,HSP90mRNA表达明显减少,且呈剂量依赖性（r=0.9530,P〈0.01）;17-DMAG处理Jurkat细胞48h的IC50为3.17μmol/L,作用于Jurkat细胞后抑制Jurkat细胞增殖（r=0.9903,P〈0.01）,促进Jurkat细胞凋亡,且呈剂量依赖性（r=0.9876,P〈0.01）。结论：HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的增殖并诱导其凋亡。

简介：目的建立胰高血糖素样多肽2受体（glucagonlikepeptide-2receptor，GLP-2R）上调表达的Caco2细胞株，为研究GLP-2肠道保护机制构建体外模型。方法常规扩增抽提GLP-2R／pcDNA3．1质粒，经酶切、测序鉴定正确后，用脂质体转染法将其转染至Caco2细胞。G418抗性筛选，挑选耐药细胞克隆培养获得稳定细胞株。以HER293细胞、VE细胞、正常Caco2细胞及正常人小肠组织为对照，采用逆转录聚合酶链反应与蛋白质印迹法检测稳定转染细胞中mRNA及其蛋白的表达。结果扩增抽提GLP-2R／pcDNA3．1质粒后经酶切、测序结果正确。GLP-2RmRNA及其蛋白在HER293细胞及VE细胞中无表达，在正常Caco2细胞中表达微弱，在人小肠组织中有较强表达；转染GLP-2R后，Caco2／GLP-2R（＋）细胞中GLP-2RmRNA及其蛋白表达明显增强。结论GLP-2R分布具有相对特异性，正常Caco2细胞中GLP-2R表达较弱；构建的caco2／GLP-2R（＋）细胞模型成立，为深入研究GLP-2的作用机制奠定了良好基础。