简介:【摘要】 目的:探讨染料试验在床旁吞咽评估的应用。方法:利用染料试验分别对环咽肌失弛缓症、更换气管套管、拔除气管套管等进行临床的早期筛查。同时在试验过程中通过观察血氧饱和度和颈部听诊等加强判断染料试验的准确性。结果:染料试验是对床旁吞咽误吸风险评价的重要筛查手段。
简介:目的建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计特异性引物,建立染料法(SYBRgreenI)实时荧光定量PCR,评估其灵敏性及特异性;并对恙虫病东方体鸡胚培养物、东方体感染小白鼠脏器标本以及恙虫病病人血样等多种样本进行检测。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r2=0.99),灵敏性评估显示20¨l体系单PCR反应管靶基因大于28个拷贝即可被有效检测,最低检出浓度为2拷贝/¨l,比普通PCR检测方法提高1~2个数量级,并且具有较好的重复性;建立的SYBRI染料法具有良好的特异性,与立氏立克次体R株等其他5种立克次体,以及被检测的其他几种病原菌DNA模板均不发生特异性扩增;用建立的染料法对东方体鸡胚培养物、东方体感染动物脏器,以及采集的现场恙虫病病人血样共59份标本进行检测,其中57份检出阳性。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肾脏、肝脏标本,结果脾脏中东方体检出量最多,肝脏和肾脏次之,血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立荧光定量PCR方法均具有很高的特异性和敏感性,适合各种样本中东方体的快速检测,可用于实验室的快速诊断。
简介:目的探讨染料木黄酮(Gen)对HepG2人肝癌细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调节作用。方法体外培养HepG2细胞,将HepG2细胞在含有0、0.01、0.10、1.00、10.00、50.00、100.00μmol/LGen的培养液内分别培养24、48、72h后,用MTT法检测细胞增殖活性。用分别含0、0.01、1.00、10.00、50.00μmol/LGen的完全培养液培养HepG2细胞24h,收集细胞,分别进行细胞内总胆固醇(TC)含量检测、实时荧光定量PCR检测细胞低密度脂蛋白受体(ldlr)、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(hmgcr)基因的mRNA表达和蛋白印迹法检测核转录因子SREBP-2的表达。结果0.01、0.10、1.00、10.00、50.00、100.00μmol/LGen分别作用于HepG2细胞24h,0.01、0.10、1.00μmol/LGen组细胞增殖率高于溶剂对照组(均P〈0.05);作用48、72h,1.00、10.00、50.00、100.00μmol/LGen组细胞增殖率均低于溶剂对照组(均P〈0.05)。1.00、10.00、50.00μmoL/LGen与HepG2细胞共同孵育24h,HepG2细胞内TC水平分别为(1.81±0.15)、(2.29±0.17)、(2.88±0.08)mmol/L,均高于对照组[(1.44±0.17)mmol/L],且随着Gen浓度升高,呈增加趋势(R2=0.48,P〈0.01);各Gen实验组的hmgcr和ldlr基因的mRNA表达水平随着Gen浓度升高而升高(R2分别为0.53、0.79,均P〈0.01)。1.00、10.00、50.00μmol/LGen组蛋白表达灰度值均高于对照组(均P〈0.01)。结论染料木黄酮能够调节细胞内胆固醇的代谢,其作用机制可能与调控SREBP-2通路有关。