简介：摘要目的探讨胎膜早破（PROM）孕妇外周血CD8+CD25+FoxP3+调节性T细胞（Treg）表达水平对辅助性T细胞（Th）1/Th2平衡的影响。方法选择2019年9月至2020年5月江苏省滨海县人民医院收治的PROM孕妇（PROM组）、正常足月妊娠孕妇（正常妊娠组）及正常未孕女性（未孕组）各30例为研究对象，取各组外周血，流式细胞仪测定CD8+CD25+FoxP3+Treg比例；提取外周血单个核细胞（PBMCs），聚合酶链反应法（PCR）测定叉头翼状螺旋转录因子3（FoxP3） mRNA；Luminex液相芯片法测定Th1相关细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-2及Th2相关细胞因子IL-10、IL-4水平；分析CD8+CD25+FoxP3+Treg表达对Th1/Th2平衡的影响。结果PROM组、正常妊娠组CD8+CD25+FoxP3+Treg比例及FoxP3 mRNA表达水平低于未孕组[（0.15 ± 0.03）%和　（0.35 ± 0.09）%比（0.47 ± 0.11）%、0.89 ± 0.11和3.15 ± 0.67比3.75 ± 0.23]，PROM组CD8+CD25+FoxP3+Treg比例及FoxP3 mRNA表达水平又低于正常妊娠组，差异均有统计学意义（P<0.05）。PROM组、正常妊娠组IFN-γ、IL-2水平高于未孕组，IL-4水平低于未孕组，PROM组IFN-γ、IL-2水平又高于正常妊娠组，IL-4水平又低于正常妊娠组，差异均有统计学意义（P<0.05）。PROM组孕妇外周血CD8+CD25+FoxP3+Treg比例及FoxP3 mRNA表达水平与IFN-γ（r = - 0.413、- 0.451， P<0.05）、IL-2（r = - 0.645、- 0.535， P<0.05）呈负相关，与IL-4水平呈正相关（r = 0.558、0.469，P<0.05）。结论PROM孕妇外周血CD8+CD25+FoxP3+Treg比例较低，FoxP3 mRNA表达水平较低，均影响Th1/Th2免疫平衡，引起Th1免疫漂移，可能为PROM发生的相关免疫机制。

简介：摘要目的探讨胎膜早破（PROM）孕妇外周血CD8+CD25+FoxP3+调节性T细胞（Treg）表达水平对辅助性T细胞（Th）1/Th2平衡的影响。方法选择2019年9月至2020年5月江苏省滨海县人民医院收治的PROM孕妇（PROM组）、正常足月妊娠孕妇（正常妊娠组）及正常未孕女性（未孕组）各30例为研究对象，取各组外周血，流式细胞仪测定CD8+CD25+FoxP3+Treg比例；提取外周血单个核细胞（PBMCs），聚合酶链反应法（PCR）测定叉头翼状螺旋转录因子3（FoxP3） mRNA；Luminex液相芯片法测定Th1相关细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-2及Th2相关细胞因子IL-10、IL-4水平；分析CD8+CD25+FoxP3+Treg表达对Th1/Th2平衡的影响。结果PROM组、正常妊娠组CD8+CD25+FoxP3+Treg比例及FoxP3 mRNA表达水平低于未孕组[（0.15 ± 0.03）%和　（0.35 ± 0.09）%比（0.47 ± 0.11）%、0.89 ± 0.11和3.15 ± 0.67比3.75 ± 0.23]，PROM组CD8+CD25+FoxP3+Treg比例及FoxP3 mRNA表达水平又低于正常妊娠组，差异均有统计学意义（P<0.05）。PROM组、正常妊娠组IFN-γ、IL-2水平高于未孕组，IL-4水平低于未孕组，PROM组IFN-γ、IL-2水平又高于正常妊娠组，IL-4水平又低于正常妊娠组，差异均有统计学意义（P<0.05）。PROM组孕妇外周血CD8+CD25+FoxP3+Treg比例及FoxP3 mRNA表达水平与IFN-γ（r = - 0.413、- 0.451， P<0.05）、IL-2（r = - 0.645、- 0.535， P<0.05）呈负相关，与IL-4水平呈正相关（r = 0.558、0.469，P<0.05）。结论PROM孕妇外周血CD8+CD25+FoxP3+Treg比例较低，FoxP3 mRNA表达水平较低，均影响Th1/Th2免疫平衡，引起Th1免疫漂移，可能为PROM发生的相关免疫机制。

简介：摘要目的探讨CD8+FoxP3+CD25+ T细胞亚群与程序性死亡受体1（PD-1）抑制剂帕博利珠单抗治疗子宫颈癌效果的关系。方法回顾性分析2018年1月至2020年1月于秦皇岛市第一医院收治的105例在化疗基础上给予帕博利珠单抗治疗的子宫颈癌患者资料。采用流式细胞术检测患者外周血CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例。分析疗效和安全性。根据疗效将患者分为缓解组（完全缓解+部分缓解）及未缓解组（疾病稳定+疾病进展），比较两组临床特征及CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例。采用多因素logistic回归模型分析疗效的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例预测患者疗效的效能。结果全组患者的客观缓解率为17.14%（18/105），不良反应发生率为39.05%（41/105）。缓解组中有子宫颈癌家族史患者比例低于未缓解组[5.56%（1/18）比34.48%（30/87）]，差异有统计学意义（χ2=6.00，P=0.014）。105例患者治疗前后CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例分别为（0.83±0.21）%、（0.77±0.10）%；其中，缓解组治疗前后CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例分别为（0.55±0.26）%、（0.31±0.12）%，未缓解组分别为（0.89±0.30）%、（0.87±0.28）%；缓解组治疗后CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例低于治疗前（P<0.05），未缓解组治疗前后差异无统计学意义（P>0.05），未缓解组治疗前后CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例均高于缓解组（均P<0.001）。治疗前CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例高于治疗前全组均值及治疗后CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例高于治疗后全组均值为疾病缓解的独立危险因素（OR=2.542，95% CI 1.649~3.918，P<0.001；OR=2.936，95% CI 2.154~4.002，P<0.001）。ROC曲线分析显示，治疗前CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例预测疾病缓解的曲线下面积为0.720，最佳临界值为0.77%，灵敏度和特异度分别为77.78%和70.11%。结论早期检测CD8+FoxP3+CD25+ T细胞比例有助于预测PD-1抑制剂帕博利珠单抗治疗子宫颈癌的效果。

简介：摘要目的了解γδT细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在HIV感染者/AIDS患者外周血中的表达水平，探讨γδT细胞、CD4+CD25+ Treg在HIV感染/AIDS病情进展中的相关性以及可能的作用机制。方法采用免疫荧光单克隆抗体标记技术、流式细胞术检测AIDS患者12例、HIV中期感染者19例、HIV早期感染者15例、健康体检者30例外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、γδT细胞、CD4+CD25+ Treg的表达水平；采用Pearson分析γδT细胞与CD4+CD25+Treg相关性。结果γδT细胞在AIDS组、HIV感染中期组、HIV感染早期组、健康对照组外周血中的表达(Mean±SD, %)分别为：4.46±1.37、3.59±0.67、3.12±0.33、1.73±0.36，组间比较差异有统计学意义(F＝6.091，P＝0.018)。CD4+CD25+Treg在AIDS组、HIV感染中期组、HIV感染早期组、健康对照组外周血中的表达(Mean±SD, %)分别为：10.28±1.94、7.37±1.03、6.68±0.58、4.03±0.82，差异有统计学意义(F＝13.568，P＝0.020)。γδT、CD4+CD25+Treg在4组中的比较，有明显统计学意义，AIDS组>HIV感染中期组>HIV感染早期组>对照组。相关性方面，γδT、CD4+CD25+Treg与CD4+T细胞呈负相关(r分别为-0.982、-0.712, P值分别为0.001、0.002)，与CD8+T细胞计数呈正相关(r分别为0.873、0.809, P值分别为0.000、0.000)；γδT细胞与CD4+CD25+Treg呈正相关性(r＝0.911, P＝0.000)。结论HIV感染诱导了γδT细胞、CD4+CD25+Treg的增殖，两者可能参与了机体感染HIV后引起的免疫应答。γδT细胞与CD4+CD25+Treg成正相关，两者可能具有协同作用。

简介：摘要目的探讨外周血CD4＋T细胞水平、CD4＋/CD8＋比值作为预测Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)放疗后生存指标的可能性，并构建Nomogram预测模型。方法回顾分析2011-2017年间经病理学确诊的初治682例NSCLC患者外周血疗前CD4＋T细胞、CD4＋/CD8＋比值水平对临床因素、生存的影响，并构建Nomogram预测模型。结合110例疗后免疫细胞水平变化验证预测预后的价值。计数结果采用t检验，Kaplan-Meier法计算生存率并log-rank检验和单因素分析，Cox模型多因素分析。结果单因素分析治疗前CD4＋>43.15%显著延长生存，多因素分析治疗前CD4＋>43.15%是延长生存的因素，并可构建Nomogram预测模型并验证与总生存有良好的相关性；CD4＋T细胞水平43.15%作为临界值均显示治疗前、治疗后、治疗前后高水平、联合CD4＋/CD8＋>1.65的生存延长。结论外周血治疗前CD4＋T细胞的基线水平是Ⅳ期NSCLC生存的预后因子，而外周血治疗前CD4＋/CD8＋比值预测预后的作用有限。

简介：摘要目的研究甲型流感病毒（IAV）感染者外周血中CD160+CD8+ T淋巴细胞亚群的特征。方法收集2018年12月至2019年3月流感季就诊于北京大学地坛医院教学医院感染二科IAV感染者共37例及同期体检的健康对照者51例，应用多色流式细胞检测平台，检测外周血不同分化阶段CD160+CD8+ T淋巴细胞的比例。结果与健康对照相比，IAV感染者外周血T细胞中CD160+CD8+ T细胞比例下降[24.50%（14.70%，44.10%）vs. 8.85%（5.14%，18.15%）]，差异有统计学意义（U = 326.00、P < 0.001）。IAV感染者与健康对照相比，其CD8+ T中初始T细胞（TN）[3.88%（1.28%，9.48%） vs. 0.22%（0.12%，0.60%）]、中央记忆性T细胞（TCM）[8.70%（4.43%，15.80%） vs. 1.51%（0.69%，2.54%）]、效应记忆性T细胞（TEM）[22.30%（13.80%，30.40%） vs. 7.71%（5.23%，16.25%）]和终末效应记忆T细胞（TEMRA）[（46.99 ± 22.91）% vs. （21.60 ± 13.38）%]4个亚群中CD160+细胞的比例均下降，差异有统计学意义（U = 238.50、81.50、412.00，t = 6.03；P均< 0.001）。IAV感染者出院时较入院时CD160+CD8+ T细胞比例上升[（8.92 ± 7.84）% vs. （16.40 ± 9.43）%]（t = 4.09、P = 0.001），但仍低于正常水平[24.50%（14.70%，44.10%） vs. （16.40 ± 9.43）%]，差异有统计学意义（U = 209.50、P = 0.0029）。结论甲型流感病毒感染者外周血中T淋巴细胞CD160+CD8+ T细胞亚群比例显著降低，可能是免疫失衡的重要表现。

简介：摘要目的探讨急性期川崎病(Kawasaki disease，KD)患儿CD8+CD28－调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)改变及其在KD免疫发病机制中的作用。方法研究对象为2019年6月—2021年12月收治的48例KD患儿，分别于急性期及静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin，IVIG)治疗后取血备检，对照组为32例同龄健康儿童。流式细胞术检测外周静脉血CD8+CD28－Treg细胞比例及程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1，PD-1)、凋亡相关因子配体(factor associated suicide ligand，FasL)、可诱导共刺激分子配体(inducible T-cell co-stimulator ligand，ICOSL)、CD80、CD86蛋白表达水平；荧光定量PCR分析转录因子Helios、穿孔素、颗粒酶B、免疫球蛋白样转录物3(immunoglobulin-like transcript 3，ILT3)和ILT4 mRNA表达水平；ELISA检测细胞培养上清中IL-10和TGF-β1蛋白浓度。结果(1)急性期KD患儿CD8+CD28－Treg细胞比例及Helios表达明显高于对照组(P<0.05)，但合并冠状动脉损伤组(coronary artery lesion，CAL)前述2项指标低于未合并冠状动脉损伤组(non-coronary artery lesion，NCAL)，差异有统计学意义(P<0.05)。经IVIG治疗后，KD患儿CD8+CD28－Treg细胞比例及Helios表达明显降低(P<0.05)。(2)急性期KD患儿CD8+CD28－Treg细胞FasL、PD-1、ICOSL和穿孔素表达均高于对照组(P<0.05)，经活化的CD4+T细胞刺激后CD8+CD28－Treg细胞培养上清中IL-10和TGF-β蛋白浓度低于对照组(P<0.05)，其中CAL组患儿前述6项指标均低于NCAL组(P<0.05)。经IVIG治疗后，KD患儿前述指标均呈不同程度恢复(P<0.05)。各组间颗粒酶B表达虽略有差异，但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)急性期KD患儿CD14+细胞表面过度表达CD80和CD86等共刺激分子(P<0.05)，抑制性分子ILT3和ILT4表达亦高于对照组(P<0.05)；CAL组患儿CD14+细胞表面CD80和CD86蛋白水平高于NCAL组(P<0.05)，而ILT3、ILT4表达低于NCAL组(P<0.05)。经IVIG治疗后，KD患儿前述指标均明显恢复(P<0.05)。结论CD8+CD28－Treg细胞相对不足及功能障碍可能是导致KD患儿免疫功能异常活化及血管损伤的重要因素之一。

简介：摘要目的通过建立大鼠自身免疫性听神经病模型，探讨CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+T regulatory cell，CD4+CD25+Treg）在大鼠自身免疫性听神经病中的表达及作用。方法用P0蛋白（自身免疫性内耳病相关抗原）免疫健康大鼠，共免疫8周，建立大鼠自身免疫性听神经病模型。分别于P0蛋白免疫后2、4、6、8周，检测大鼠外周血和耳蜗中CD4+CD25+Treg的数量以及耳蜗中Foxp3基因的表达。再分别于P0蛋白免疫大鼠2、4、6、8周后，通过静脉向大鼠过继转输CD4+CD25+Treg，随后检测大鼠听性脑干反应（ABR）、畸变产物耳声发射（DPOAE）并观察耳蜗螺旋神经节细胞及毛细胞的变化。结果P0蛋白免疫2、4、6、8周后，模型大鼠外周血中CD4+CD25+Treg的数量随免疫时间的延长而逐渐减少，耳蜗中CD4+CD25+Treg的数量随免疫时间的延长而逐渐增多；耳蜗中Foxp3基因的表达随免疫时间的延长而逐渐下降。听神经病模型大鼠静脉过继转输CD4+CD25+Treg后，其ABR反应阈下降，DPOAE无明显变化；光镜下耳蜗罗氏管内螺旋神经节细胞的数量增加，电镜下毛细胞无明显变化。结论在大鼠自身免疫性听神经病模型中，CD4+CD25+Treg数量和功能的下降，使其对自身免疫反应的抑制作用降低，促进了自身免疫性听神经病的发生。过继转输CD4+CD25+Treg可减轻自身免疫反应，促进耳蜗螺旋神经节细胞的恢复和ABR反应阈的改善。

简介：摘要目的分析CD4＋CD25＋调节性T细胞与原因不明复发性流产的相关性。方法抽取2018年10月到2019年10月枣庄市妇幼保健院收治的原因不明复发性流产患者110例作为研究组，另抽取同期收治的正常行人工流产术的患者80例作为对照组。检测并比较两组患者外周血及蜕膜组织中CD4＋CD25＋调节性T细胞比例、调节性T细胞特异性调节因子Foxp3和EBi3的mRNA的表达水平、血清炎性因子水平，分析其与原因不明复发性流产的相关性。结果研究组外周血以及蜕膜组织中调节性T细胞比例分别为(4.86±1.13)%、(6.85±1.73)%，低于对照组的(9.31±1.88)%、(11.29±2.04)%，P<0.05。研究组外周血以及蜕膜组织中调节因子Foxp3和EBi3的mRNA表达水平均低于对照组，且外周血中Foxp3和EBi3的mRNA表达水平低于蜕膜组织，P<0.05。研究组血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)分别为(9.25±1.67)、(11.47±2.95)、(0.29±0.15)、(7.44±1.35)ng/L，而对照组TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10分别为(1.46±0.53)、(5.74±1.06)、(4.58±0.93)、(16.62±4.34)ng/L，研究组TNF-α、IL-2水平高于对照组，而IL-6、IL-10水平低于对照组(P<0.05)。结论调节性T细胞比例、调节性T细胞因子水平可能与维持妊娠有关，原因不明复发性流产与调节性T细胞降低有一定的相关性。

简介：AbstractBackground:The mortality rate among patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC) has improved significantly with the advent of chemoradiotherapy strategies. However, distant metastasis remains problematic. Tumor-specific reactivity in cancer patients has been detected exclusively in CD39+ T cells, particularly in CD39+CD103+ T cells. Circulating cancer-specific T cells are important for protecting against metastasis. This study aimed to evaluate the predictive value of circulating CD39+CD8+ T cells for metastasis in patients with NPC.Methods:We performed a cross-sectional, longitudinal study of 55 patients with newly diagnosed NPC of stage III-IVa. All patients were initially treated with standard combined chemoradiotherapy. Blood samples were obtained from 24 patients before and at 1 month and 6 months after treatment. T cell expression of CD39 and CD103, together with the markers of T cell exhaustion programmed death-1 (PD-1)/T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3 (Tim-3) and markers of cell differentiation CD27/CC-chemokine receptor 7/CD45RA, was examined by flow cytometry. The Wilcoxon rank-sum test analysis was used to analyze the differences between two groups. Kaplan-Meier analysis was used for analysis of progression-free survival (PFS).Results:The expression of circulating CD39+CD8+ and CD39+CD103+ CD8+ T cells was significantly higher in patients without distant metastasis (CD39+CD8+: 6.52% [1.24%, 12.58%] vs. 2.41% [0.58%, 5.31%], Z=-2.073, P=0.038 and CD39+CD103+ CD8+: 0.72% [0.26%, 2.05%] vs. 0.26% [0.12%, 0.64%], Z=-2.313, P = 0.021). Most CD39+ T cells did not express PD-1 or Tim-3. Patients with high expression of CD39+CD103+CD8+ T cells had better PFS than patients with low expression (log rank value = 4.854, P = 0.028). CD39+CD8+ T cells were significantly elevated at 1-month post-treatment (10.02% [0.98%, 17.42%] vs. 5.91% [0.61%, 10.23%], Z = -2.943, P = 0.003). The percentage of advanced differentiated CD8+ T cells also increased at 1-month post-treatment compared with pre-treatment (33.10% [21.60%, 43.05%] vs. 21.00% [11.65%, 43.00%], Z =-2.155, P = 0.031). There was a significant correlation between elevated CD39+CD8+ T cells and increased effector memory T cells (intermediate stage: r = 0.469, P = 0.031; advanced stage: r = 0.508, P = 0.019).Conclusions:CD39+CD8+ circulating T cells have preserved effector function, contributing to an improved prognosis and a reduced risk of metastasis among NPC patients. These cells may thus be a useful predictive marker for a better prognosis in patients with NPC.

简介：摘要目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血CD4-CD8-双阴性T淋巴细胞(DNT)、T淋巴细胞亚群、自然杀伤(NK)细胞、CD19+B淋巴细胞的变化及临床意义。方法回顾性分析2019年1月至2020年2月上海交通大学附属儿童医院收治的肺炎患儿，年龄段划分为0～3岁、4～7岁、≥8岁，急性期接受外周血T淋巴细胞亚群检测，其中185例MPP患儿为观察组，根据病情分为117例MPP普通组和68例MPP重症组，另外选取69例非MPP肺炎患儿作为对照组。采用流式细胞术分析各组患儿外周血DNT、T淋巴细胞亚群、NK细胞、CD19+B淋巴细胞绝对计数。分析不同年龄段DNT水平。结果1.观察组外周血淋巴细胞CD3+[1.527(1.059，2.348)×109/L]、CD4+[0.771(0.559，1.206)×109/L]、CD8+[0.528(0.343，0.773)×109/L]、CD4+/CD8+[1.570(1.130，1.945)]、CD19+ [0.455(0.285，0.771)×109/L]、DNT[0.168(0.095，0.294)×109/L]均低于对照组[2.116(1.506，3.728)×109/L、1.170(0.685，2.114)×109/L、0.696(0.414，1.226)×109/L、1.780(1.230，2.210)、0.694(0.483，1.343)×109/L、0.235(0.134，0.391)×109/L]，差异均有统计学意义(均P<0.05)。2.MPP普通组的外周血淋巴细胞CD3+[1.704(1.215，2.566)×109/L]、CD4+[0.855(0.628，1.267)×109/L]、CD8+[0.582(0.378，0.843)×109/L]、NK[0.269(0.176，0.417)×109/L]、CD19+[0.461(0.317，0.808)×109/L]、DNT[0.180(0.117，0.306)×109/L]均明显高于MPP重症组[1.369(0.831，1.760)×109/L、0.676(0.433，0.924)×109/L、0.495(0.292，0.699)×109/L、0.196(0.112，0.380)×109/L、0.391(0.181，0.730)×109/L、0.143(0.071，0.265)×109/L]，差异均有统计学意义(均P<0.05)。3.急性期，观察组外周血DNT与相同年龄段对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)；观察组中，0～3岁组外周血DNT[0.230(0.125，0.364)×109/L]高于4～7岁组[0.143(0.085，0.233)×109/L]和≥8岁组[0.144(0.078，0.271)×109/L]，且在0～3岁组病情越重，指标越低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论急性期，MPP患儿外周血各淋巴细胞亚群变化显著。外周血DNT淋巴细胞绝对计数降低，且病情越重，指标越低。小年龄患儿DNT绝对计数较高。监测外周血DNT对评估MPP免疫功能状态或病情可能有一定价值。

简介：摘要目的探讨Ⅲ-Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)放化疗前后外周血CD8＋T细胞水平及其变化规律预测生存的临床价值。方法收集2011-2017年完成外周血CD8＋T细胞检测的Ⅲ-Ⅳ期NSCLC共795例(其中249例疗后6个月内完成1～3次检测)，分析治疗前后CD8＋T细胞不同水平的生存差异及其变化规律对生存的预测作用。Kaplan-Meier生存分析并log-rank检验和单因素预后分析，Cox模型多因素预后分析。结果795例患者不同临床因素的疗前外周血CD8＋T细胞水平相近，Ⅲ期NSCLC中<26.44%生存期显著延长(P＝0.043)。疗后CD8＋T细胞水平较疗前显著升高且1～3个月内水平相似，4～6个月下降但仍然显著高于疗前。249例疗后CD8＋T细胞<43.90%水平的中位生存期高于≥43.90%的(22个月∶16个月，P＝0.032)，但分层分析疗后1、2～3个月的生存期相近(P>0.05)，而4～6个月显示生存期不同(P＝0.001)。多因素分析显示疗后CD8＋T细胞<43.90%是延长生存的独立预后因素(HR＝0.714，P＝0.031)。结论Ⅲ-Ⅳ期NSCLC外周血疗前CD8＋T细胞预测预后作用有限，疗后CD8＋T细胞显著升高；一定水平的升高可延长生存期，过度升高对生存不利；CD8＋T细胞亚型检测更重要。

简介：摘要目的研究重症肌无力（MG）患者白细胞介素-7（IL-7）/CD127信号通路对CD8+T细胞的调控作用。方法收集2017—2020年在南阳市中心医院神经内科就诊的初治MG患者57例（MG组），同时入组健康对照者35名（健康对照组），采集两组受试者的外周血分离血浆和外周血单个核细胞，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆中IL-7和可溶型CD127水平，用流式细胞术检测CD8+T细胞中膜型CD127的表达比例，分析上述指标在不同性别和发病年龄、有无胸腺瘤、不同Osserman分型之间的差异及与定量重症肌无力（QMG）量表评分的相关性。纯化MG患者CD8+T细胞，使用重组人IL-7（5 μg/L）刺激培养，比较可溶型CD127和膜型CD127的水平变化，ELISA法检测培养上清中穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测CD8+T细胞中免疫检查点分子mRNA表达量。结果MG组血浆IL-7水平高于健康对照组［（293.4±74.7）pg/ml比（233.8±70.8）pg/ml，t=3.78，P<0.001］，可溶型CD127水平低于健康对照组［（102.7±13.7）pg/ml比（131.2±20.9）pg/ml，t=7.91，P<0.001］。MG组外周血CD8+T细胞比例高于健康对照组（35.4%±7.1%比30.2%±7.5%，t=3.31，P=0.001），膜型CD127+CD8+T细胞比例亦高于健康对照组（45.5%±7.7%比34.7%±11.5%，t=5.44，P<0.001）。上述指标在不同性别之间、早发型和晚发型之间、非胸腺瘤组和胸腺瘤组之间、不同Osserman分型之间的差异均无统计学意义，与QMG量表评分均无明显相关性。IL-7刺激MG患者CD8+T细胞后，培养上清中可溶型CD127水平、膜型CD127+CD8+T细胞比例、免疫检查点分子mRNA表达水平与未经IL-7刺激时比较差异无统计学意义。经IL-7刺激后CD8+T细胞分泌穿孔素［（208.1±67.2）pg/ml］、颗粒酶B［（941.8±273.9）pg/ml］、干扰素-γ水平［（19.1±5.2）pg/ml］高于未经IL-7刺激时［分别为（168.8±46.2）pg/ml，t=2.16，P=0.038；（782.4±137.2）pg/ml，t=2.33，P=0.025；（15.3±4.5）pg/ml，t=2.47，P=0.018］。TNF-α的分泌水平在经IL-7刺激前后差异无统计学意义。结论MG患者中升高表达的IL-7介导的信号通路可增加CD8+T细胞分泌毒性分子和细胞因子，增强CD8+T细胞功能活性。

简介：摘要目的探讨CD4＋T淋巴细胞和CD8＋T淋巴细胞对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的临床分型及其预后的价值。方法纳入2020年1月至3月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的95例COVID-19患者，比较普通型、重型、危重型患者及临床转归为治愈、好转、未愈、死亡患者的CD4＋T淋巴细胞计数和CD8＋T淋巴细胞计数。采用受试者操作特征曲线下面积评估CD4＋T淋巴细胞计数和CD8＋T淋巴细胞计数对COVID-19临床分型及预后的价值。组间比较采用曼-惠特尼U检验。结果95例COVID-19患者中，普通型68例，重型11例，危重型16例。治疗前普通型、重型和危重型患者的CD4＋T淋巴细胞计数分别为419(309，612)、267(212，540)和141(77，201)/μL，CD8＋T淋巴细胞计数分别为238(153，375)、128(96，172)和92(51，144)/μL，差异均有统计学意义(Z＝24.322、15.956，均P<0.01)。死亡、未愈、好转和治愈病例的CD4＋T淋巴细胞计数分别为149(143，349)、315(116，414)、344(294，426)和745(611，966)/μL，CD8＋T淋巴细胞计数分别为106(43，501)、176(67，279)、194(188，432)和429(276，564)/μL，差异均有统计学意义(Z＝36.083、16.658，均P<0.01)。评估危重型患者的CD4＋T淋巴细胞计数最佳临界值为237/μL，曲线下面积为0.911[95%可信区间(confidence interval, CI) 0.833～0.989，P<0.01]，灵敏度和特异度分别为86.1%和87.5%；评估(危)重型患者治疗有效性的CD4＋T淋巴细胞计数最佳临界值为405/μL，曲线下面积为0.863(95%CI 0.727～0.999，P＝0.001)，灵敏度和特异度分别为78.6%和74.6%。结论COVID-19的病情可能随CD4＋T淋巴细胞计数和CD8＋T淋巴细胞计数减少呈加重趋势，CD4＋T淋巴细胞计数可用作COVID-19临床分型诊断和评估(危)重型病例预后的指标。

简介：摘要目的了解高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy，HAART)后HIV/AIDS患者T淋巴细胞免疫活化及CD4＋CD45RA＋ T细胞的亚群变化，探讨抗病毒治疗对HIV感染者免疫恢复的影响。方法前瞻性分析105例接受HARRT治疗的HIV/AIDS患者，流式细胞仪检测治疗前和治疗后1、3、6及12个月T淋巴细胞活化水平(CD38、HLA-DR的表达)及CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞；同时选取未暴露且HIV-1抗体检测阴性者35名作为健康对照。结果HAART治疗前HIV/AIDS患者T淋巴细胞活化水平显著高于健康对照(P<0.01)，HAART治疗后随治疗时间延长活化水平明显下降，治疗1个月时CD4＋CD38＋ HLA-DR＋及CD8＋CD38＋ 、CD8＋ HLA-DR＋ T淋巴细胞首先出现降低，治疗6个月时包含CD8＋CD38＋HLA-DR＋ T在内的4项活化指标均明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)；治疗12个月与6个月相比，CD8＋CD38＋HLA-DR＋ T表达水平继续降低(P<0.01)，而其余3项活化指标差异无统计学意义。但HAART治疗12个月后，4项活化指标仍全部高于健康对照组(P<0.01)。CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞百分比在治疗前及治疗后12个月均明显低于健康对照组。结论HIV/AIDS患者在HAART治疗后6个月免疫活化水平降低，但HAART并不能使免疫活化逆转；HAART治疗也不能恢复HIV感染后降低的CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞的水平。

简介：摘要目的探讨轴突导向因子3A（Sema3A）对脂多糖（LPS）诱导的CD4+CD25+调节性T细胞（Tregs）稳定性的作用及机制。方法采用体外免疫磁珠法分离和培养C57BL/6J小鼠脾脏CD4+CD25+ Tregs，将分离的细胞按随机数字表法分为对照组（仅给予抗小鼠CD3e和CD28诱导细胞处于激活状态）、LPS组（在对照组的基础上给予LPS 100 μg/L）、LPS+核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L）、LPS+磷酸盐缓冲液（PBS）组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL）、LPS+PDTC+重组Sema3A（rSema3A）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L+rSema3A 300 μg/L）和LPS+PBS+rSema3A组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL+rSema3A 300 μg/L）。各组培养24 h后，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光法检测CD4+CD25+ Tregs特异性标志物叉头翼状转录因子-3（Foxp-3）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）和膜相关转化型生长因子-β1（TGF-β1m+）的基因及蛋白表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-10（IL-10）和分泌型转化生长因子-β1（sTGF-β1）的水平，采用免疫荧光法检测细胞凋亡，采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测Foxp-3-Tregs特异性去甲基化区（Foxp-3-TSDR）的去甲基化程度，以反映CD4+CD25+ Tregs的稳定性，采用电泳迁移率分析（EMSA）检测NF-κB信号通路的DNA结合活性，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路活性。结果与对照组比较，LPS能够增加细胞稳定性，表现为Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1m+的基因及蛋白表达上调，IL-10和sTGF-β1分泌增加，细胞凋亡减少，Foxp-3-TSDR去甲基化程度增加；同时LPS可增加细胞内NF-κB信号通路的DNA结合活性，以及主要分子NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）和p65的磷酸化水平，说明LPS增加细胞稳定性的机制与NF-κB信号通路有关。与LPS组比较，PBS并未对细胞稳定性和NF-κB信号通路产生影响；但添加rSema3A后能进一步增加细胞稳定性，并激活NF-κB信号通路。而PDTC能够抑制rSema3A增加细胞稳定性的功能，表现为：与LPS+PBS+rSema3A组比较，LPS+PDTC+rSema3A组Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1m+的基因及蛋白表达明显下调〔Foxp-3基因（2-ΔΔCt）：8.092±1.117比18.509±1.068，Foxp-3蛋白（相对荧光强度）：1.224±0.033比1.826±0.181；CTLA-4基因（2-ΔΔCt）：3.254±0.760比11.840±0.827，CTLA-4蛋白（相对荧光强度）：1.305±0.058比1.842±0.111；TGF-β1m+基因（2-ΔΔCt）：3.589±1.180比8.509±0.472，TGF-β1m+蛋白（相对荧光强度）：1.319±0.033比1.822±0.063，均P<0.01〕，IL-10和sTGF-β1分泌减少〔IL-10（ng/L）：445.33±54.08比992.67±83.10，sTGF-β1（ng/L）：1 116.67±65.25比1 494.67±94.45，均P<0.01〕，细胞凋亡明显增加（荧光强度：0.398±0.031比0.268±0.046，P<0.01），Foxp-3-TSDR去甲基化程度明显降低（灰度值：0.467±0.048比1.780±0.119，P<0.01），NF-κB信号通路的DNA结合活性被明显抑制（灰度值：1.23±0.02比3.95±0.06，P<0.01），IKKβ和p65的磷酸化水平降低〔p-IKKβ表达（p-IKKβ/IKKβ）：0.97±0.07比1.97±0.04，p-p65（p-p65/p65）：0.95±0.08比1.93±0.06，均P<0.01〕。结论LPS能通过NF-κB信号通路增加CD4+CD25+ Tregs稳定性；Sema3A能够进一步增加CD4+CD25+ Tregs稳定性，并且与NF-κB信号通路有关。

简介：摘要耗竭CD8+T细胞(exhausted CD8+T cells，CD8+Tex)是一种由静止CD8+T细胞在持续高抗原刺激条件下形成的独特亚群。静息CD8+T细胞在短期抗原刺激下可分化为具有细胞毒性的功能细胞并发挥抗感染和抗肿瘤作用，而持续的高抗原刺激将使效应CD8+T细胞逐渐分化为终末CD8+Tex细胞并且不可逆转地失去效应器功能。与记忆和效应T细胞不同，CD8+Tex细胞具有一个独特的转录程序。同时，众多研究正在试图绘制一个详尽的CD8+Tex亚型分化图谱，旨在未来通过靶向CD8+Tex细胞内的单个亚群或单个分化阶段来最大限度增加效应T细胞的数量，同时避免损伤效应细胞。本文结合最新研究进展，从转录失调、代谢重编、亚群分型及临床应用等方面进行综述，旨在为以CD8+T细胞为基础的肿瘤免疫学疗法提供更多治疗策略。

简介：摘要SS是一种以外分泌腺损伤为特征的系统性自身免疫病，目前发病机制不清楚。在病变涎腺、泪腺及肾脏等组织有大量淋巴细胞浸润，除了CD4 T细胞和B细胞以外，CD8 T细胞也是其中重要成分之一。近年研究发现CD8 T细胞在SS发病中起重要作用，本文就CD8 T细胞在SS外周血和病变组织分布情况以及其在发病作用中的机制进行综述。

简介：摘要目的观察脓毒症患者中膜型CD127(membrane-bound CD127，mCD127)和可溶型CD127(soluble CD127，sCD127)的表达，探讨IL-7调控脓毒症患者CD8+T细胞活性的机制。方法采用前瞻性研究队列，入组47例脓毒症患者和18例健康对照者，分离血清和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，纯化CD8+T细胞，酶联免疫吸附试验检测血清中IL-7和sCD127，流式细胞术检测CD8+T细胞表面mCD127表达，实时定量PCR法检测CD8+T细胞中总CD127 mRNA和sCD127 mRNA相对表达量。使用重组人IL-7刺激CD8+T细胞并抑制信号转导和转录激活因子5(signal transducer and activator of transcription 5，STAT5)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)通路，检测CD8+T细胞表面mCD127表达、总CD127 mRNA和sCD127 mRNA相对表达量的变化，利用CD8+T细胞与MCF-7细胞共培养系统评估IL-7刺激后CD8+T细胞杀伤功能的变化。采用t检验或LSD-t检验进行统计分析。结果脓毒症患者血清中IL-7和sCD127水平均低于对照组[(101.82±12.58) pg/ml vs (111.07±11.10) pg/ml，P<0.01；(278.58±62.31) pg/ml vs (334.62±70.55) pg/ml，P<0.01]，且两者水平呈正相关(r＝0.46，P<0.01)。脓毒症患者CD8+T细胞中mCD127+CD8+T细胞比例和mCD127平均荧光强度均高于对照组(P<0.05)。脓毒症患者CD8+T细胞中sCD127 mRNA相对表达量低于对照组(1.34±0.33 vs 1.80±0.60，P<0.001)。重组人IL-7刺激后CD8+T细胞sCD127分泌水平、总CD127和sCD127 mRNA相对表达量升高(P<0.05)，抑制STAT5后IL-7诱导的sCD127分泌水平、总CD127和sCD127 mRNA相对表达量降低(P<0.05)，但抑制PI3K后IL-7诱导的sCD127分泌水平、总CD127和sCD127 mRNA相对表达量变化无统计学意义(P>0.05)。脓毒症患者CD8+T细胞诱导靶细胞死亡的比例低于对照组[(12.49±2.12)% vs (23.83±3.76)%，P<0.001]，重组人IL-7刺激后CD8+T细胞诱导靶细胞死亡的比例升高(P<0.05)，细胞因子和毒性颗粒分泌增加(P<0.05)，抑制STAT5后IL-7诱导的CD8+T细胞杀伤功能减弱(P<0.05)，但抑制PI3K后IL-7诱导的CD8+T细胞杀伤功能变化无统计学意义(P>0.05)。结论IL-7可增加sCD127分泌，通过STAT5信号通路增强脓毒症患者CD8+T细胞的体外杀伤功能。

简介：摘要目的观察CD5+CD19+B细胞在体外是否具有分泌IL-10的功能，并探讨其在HBV感染过程中对CD8+细胞的作用和机制。方法纳入2017年7月至2018年6月在南京医科大学附属无锡第二医院确诊的慢性乙型肝炎(乙肝组)23例、肝硬化(肝硬化组)18例患者，以及同期健康对照(健康对照组)19名。通过外周血单个核细胞(PBMC)分离、细胞培养、流式细胞术分析、CD5+CD19+B细胞分离等操作，比较3组CD5+CD19+B细胞含量较多(占淋巴细胞百分比>6%)的患者比例、CD5+CD19+B细胞分泌IL-10的情况和IL-10+细胞含量较多(占淋巴细胞百分比>4%)的患者比例，分析CD5+CD19+B细胞对CD8+细胞分泌γ干扰素的影响和可能机制。通过对慢性乙型肝炎13例和肝硬化5例患者行肝活组织和免疫组织化学检查，分析CD5+CD19+B细胞在人体肝组织中表达情况。统计学分析采用卡方检验和Fisher确切概率法。结果肝硬化组中CD5+CD19+B细胞含量较多的患者比例高于健康对照组(8/18比2/19)，差异有统计学意义(Fisher确切概率法，P＝0.029)。健康对照组(10名)、乙肝组(23例)、肝硬化组(18例)的CD5+CD19+B细胞分别占IL-10+细胞的81.6%、82.3%、70.1%，IL-10+细胞含量较多的患者分别为2、7和2例，3组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。在脂多糖刺激培养48 h后，健康对照组(10名)CD8+γ干扰素+细胞占淋巴细胞百分比与乙肝组(10例)、肝硬化组(10例)比较(10.73%比7.05%和9.52%)差异均无统计学意义(P均>0.05)；剔除CD5+CD19+B细胞后，健康对照组(10名)、乙肝组(10例)和肝硬化组(10例)中分别有5、4、4例患者CD8+γ干扰素+细胞占淋巴细胞百分比升高。添加IL-10受体阻滞剂后，PBMC中CD8+γ干扰素+占淋巴细胞百分比较添加IL-10受体阻滞剂前升高(7.23%比6.87%)。肝活组织标本免疫组织化学分析结果显示，CD4+和CD8+细胞在患者肝小叶汇管区强表达，CD5+和CD19+细胞较少表达。结论CD5+CD19+B细胞在HBV慢性感染的进展过程中并未体现出明显数量和功能上的差异，但对CD8+细胞分泌γ干扰素的能力具有抑制作用，并且可能是通过分泌IL-10而不是通过细胞间的直接接触实现。