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  • 简介:目的探讨乙肝病毒血清学标志物常见检出模式与血清HBV-DNA关系.方法用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法定量检测血清HBV-DNA,与乙肝病毒血清学标志物常见检出模式进行比较分析.结果在HBeAg阳性、HBeAb阴性模式中,HBV-DNA阳性率为96.63%,其中HBV-DNA拷贝数〉5.0×107/ml占67.34%.在HBeAg阴性、HBeAb阳性模式中,HBV-DNA阳性率为45.23%,其中HBV-DNA拷贝数〉5.0×107/ml占8.45%.在HBeAg及HBeAb均阴性模式中,HBV-DNA阳性率为62.79%,其中HBV-DNA拷贝数〉5.0×107/ml占15.12%.结论乙肝病毒血清学标志物检测尚不能完全反映病毒复制情况,不管何种检出模式,建议最好结合血清HBV-DNA检测作临床分析判断.

  • 标签: 乙肝病毒 HBV-DNA 荧光定量 聚合酶链反应 酶联免疫吸附实验
  • 简介:乙肝病毒前S1抗原含多个免疫优势表位及乙肝病毒肝细胞受体结合位点,具有重要生物学功能.为使其高效、可溶性表达,在DnaStar软件辅助分析下,将前S1基因5′端复杂二级结构突变后,克隆入原核表达载体pQE-30a,转化大肠杆菌M15感受态细胞,经IPTG诱导后,获得了高水平、可溶性表达;并进行纯化鉴定,为进步研究乙肝病毒前S1抗原结构功能特点奠定了基础.

  • 标签: 乙肝病毒 前S1抗原 可溶性表达 突变体 大肠杆菌 表达
  • 简介:预防与控制乙型肝炎发病乙型肝炎病毒(HBV)疫苗,有重大社会经济意义。HBV持续感染引起慢性肝脏疾患,并逐步发展为肝硬化肝细胞癌(HCC)。目前乙肝重组亚单位疫苗可以使90%接种者产生保护性抗体;但是慢性HBV携带者,由于机体HBsAg蛋白产生耐受,不能产生体液细胞免疫,因此它只能作为种预防性疫苗。DNA疫苗(基因疫苗)种新疫苗技术,通过向体内递送编码抗原细菌质粒,刺激产生特异体液细胞免疫反应。在小鼠其他肝炎病毒感染动物模型中,HBVDNA疫苗可以特异性地引起体液细胞免疫,清除HBV转基因动物血循环中HBsAg颗粒HBVDNA。如果加入各种免疫调节细胞因子基因,可以进步提高HBVDNA疫苗免疫效果,因此它不仅可作为预防性疫苗,也可作为治疗型疫苗。

  • 标签: 乙型肝炎病毒 DNA疫苗 免疫 HBV 基因
  • 简介:利用DNA重组细胞体内同源重组技术,分别获得了P7.5启动子P11启动子单独带动乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因重组痘苗病毒重组痘苗病毒中含有P7.5P11启动子分别带动HBsAg基因(正反两插入方向)四种重组痘苗病毒,比较了它们HBsAg表达影响。含P7.5启动子比含P11启动子重组痘苗病毒表达HBsAg水平更高些;在同重组痘苗病毒中P7.5P11两启动子分别带动HBsAg基因时,两启动子同向转录表达HBsAg水平较低,而两启动子又向转录时表达HBsAg水平较高,但均没有单P7.5启动子带动HBsAg基因表达水平高。

  • 标签: 乙型肝炎病毒表面抗原 重组痘苗病毒 启动子
  • 简介:目的:设计靶向乙型肝炎病毒HBV)基因保守区的人工microRNA(amiRNA),考察HBV基因表达抑制作用。方法:比对HBV全基因组现有序列,选择保守区设计amiRNA,定向克隆到pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体,将amiRNA载体与HBV复制载体pHBV1.31共转染HepG2细胞,72h后收取细胞上清,ELISA检测HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)含量,荧光定量PCR检测HBVDNA含量。结果:amiRNA可显著抑制细胞上清HBsAg、HBeAgHBVDNA水平。结论:amiRNA作为防治HBV感染潜在有效手段之一值得进步深入研究。

  • 标签: 乙型肝炎病毒 人工microRNA RNA干扰
  • 简介:乙型肝炎病毒HBV感染严重影响人类健康,感染HBV慢性患者可引起肝硬化、肝细胞癌及肝功丧失等病症。开发有效HBV药物,对于感染治疗非常关键。HBV具有非常窄宿主范围,因此选择合适药物评价用动物模型至关重要,常用模型动物有鸭、土拔鼠、黑猩猩及近年研究转基因小鼠等。

  • 标签: 乙型肝炎病毒 抗乙肝病毒药物 动物模型
  • 简介:轮状病毒(rotavirus,RV)在世界范围内造成婴幼儿幼年动物病毒性腹泻主要病原.A组RVNSP4蛋白被认为病毒肠毒素,近年来研究发现,这个非结构蛋白NSP4在RV致病过程中起着重要作用.本文简要综述了多功能肠毒素NSP4研究进展.

  • 标签: 轮状病毒 非结构蛋白 肠毒素 NSP4
  • 简介:流行性乙型脑炎乙型脑炎病毒引起、经蚊虫传播严重危害中枢神经系统的人畜共患急性传染,重症病死率高,易造成永久性神经系统后遗症,严重威胁着人类健康。目前尚无特效治疗流行性乙型脑炎方法,控制蚊虫传播免疫接种当前主要防御手段。简要综述了乙型脑炎病毒基因组结构、结构蛋白与非结构蛋白功能、基因分型,以及流行性乙型脑炎疫苗研究进展。

  • 标签: 乙型脑炎病毒 乙脑疫苗
  • 简介:酶联免疫斑点法(ELISPOT)项具有较高敏感性特异性细胞免疫学检测技术,目前常用于疫苗开发中评价疫苗诱发细胞免疫效应。我们就ELISPOT技术原理、具体实验操作、技术优势,及其在新发传染疫苗研究中应用等进行综述。

  • 标签: 酶联免疫斑点法 新发传染病 疫苗
  • 简介:丙型肝炎病毒(HCV)造成慢性肝炎,肝硬化及肝癌重要原因之一,目前全球约有1.7亿感染HCV。然而缺乏有效HCV感染模型,严重阻碍了HCV致病机制认识。最近几年JFH1株Huh-7细胞系为基础,通过不同病毒株基因组重组细胞系优化,进步提高感染能力,在HCV感染系统建立上取得了突破性进展。我们简要综述近几年在HCV感染细胞模型方面取得进展。

  • 标签: 丙型肝炎病毒 感染 细胞模型
  • 简介:博士研究学历,中国科学院动物研究所研究员、生殖生物学国家重点实验室副主任。周琪长期从事克隆技术研究工作,他先后在中科院法国国立农业研究中心进行博土后研究。1999,第次成功用体细胞克隆出小鼠,被“多莉羊”之父Wihnut博士誉为“该领域迄今为止最重要成果之一”。

  • 标签: 克隆技术 周琪 中国科学院动物研究所 国家重点实验室 博士研究生 大鼠
  • 简介:目的:了解牡丹市在校医学生恒牙患龋情况,指导学生口腔保健.方法使用自制调查问卷牡丹市在校1221名医学生进行调查分析.结果:医学生恒牙总患龋率为59.62%,龋均为1.40,龋失补构成比为龋46.58%,失8.13%,补45.29%.女生恒牙患龋率(62.07%)高于男生(56.09%),男、女生恒牙患龋率有显著差异(x^2=4.51,p〈0.05).根据调查结果分析患龋情况学生口腔卫生习惯口腔保健意识紧密相关.结论:通过本次调查显示牡丹市医学生恒牙患龋率较高,男、女生恒牙患龋有显著差异,根据分析所得结果,需加强口腔卫生保健工作.

  • 标签: 医学生 龋齿 患龋率 龋失补牙数
  • 简介:microRNA(miRNA)类内源性非编码小RNA,广泛存在于病毒、植物动物等生物体内。miRNA通过与目标mRNA互补配对,基因进行转录后表达调控,在生物体发育、增殖、分化凋亡等方面发挥重要生理作用。最近研究表明,miRNA与病毒介导肿瘤之间存在密切关系,尤其在调控乙肝病毒介导肝癌、乳头瘤病毒介导宫颈癌及EB病毒介导鼻咽癌、淋巴瘤等肿瘤中发挥重要作用。在病毒导致肿瘤发生与发展过程中,miRNA表达谱出现时间与空间上改变,表达调控成为近年来病毒致癌研究热点。我们简要综述病毒致癌相关miRNA研究进展。

  • 标签: MICRORNA 病毒 致癌
  • 简介:病毒感染启动宿主先天免疫反应是通过激活转录因子NF-κB干扰素调节因子3(IRF-3),它们协同调控Ⅰ型干扰素表达。病毒在复制过程中产生复制中间体双链RNA作为病原相关分子模式,被细胞内具有RNA解旋酶活性维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-1)编码蛋白检测到。线粒体抗病毒蛋白(MAVS)作为接头蛋白,在RIG-1信号通路下游NF-κB、IRF-3信号通路上游扮演着重要角色。MAVS通过疏水跨膜结构域定位在线粒体外膜上,线粒体中发现与先天免疫相关蛋白质,将线粒体先天免疫联系在起。

  • 标签: 线粒体抗病毒蛋白 先天免疫 维甲酸诱导基因Ⅰ 病原相关分子模武
  • 简介:目的:研究严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白甘油三酯总胆固醇含量影响。方法:检测分析144例SARS患者甘油三脂总胆固醇含量在发病后变化;将小鼠随机分组,分别注射生理盐水SARS-CoVN蛋白,连续给药9d后检测小鼠血清中甘油三酯总胆固醇含量变化。结果:SARS患者甘油三酯总胆固醇含量随发病时间有升高变化(P〈0.05),在发病40d前后甘油三酯总胆固醇含量超标的病例数占本时间段内病例数比例显著高于其他时间段,而且超标的含量也明显升高。SARS-CoVN蛋白使小鼠体重明显高于对照组(P〈0.05),甘油三酯含量在3951d明显高于对照组(P〈0.05),总胆固醇含量在2139d也明显高于对照组(P〈0.05)。结论:SARS-CoVN蛋白可以升高小鼠甘油三酯总胆固醇含量,升高最为明显时间段与SARS患者甘油三酯总胆固醇含量升高时间段基本致。由此推测,SARS-CoVN蛋白可能促使SARS患者发病后甘油三酯总胆固醇含量升高重要原因。

  • 标签: 严重急性呼吸系统综合征 冠状病毒 N蛋白 甘油三酯 总胆固醇
  • 简介:目的:角鲨烯、山梨醇、吐温为组分,在琥珀酸缓冲液中混和甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白制备复合佐剂Nano-fla,评价该佐剂二倍体狂犬疫苗免疫效果安全性。方法:二倍体细胞制备狂犬灭活疫苗为抗原,BALB/c小鼠设置PBS对照组、全剂量疫苗组、半剂量疫苗组、低剂量佐剂组(含半剂量抗原+5μg鞭毛蛋白)、中等剂量佐剂组(含半剂量抗原+10μg鞭毛蛋白),免疫程序为在0、3、7d肌肉注射,并在首针免疫后第7、14d尾静脉采血分离血清,通过快速免疫荧光灶抑制实验检测中和抗体,通过酶联免疫斑点实验检测细胞因子水平。结果:首针免疫后第7d,中等剂量佐剂组中和抗体达保护效力水平,显著高于全剂量疫苗组低剂量佐剂组;第14d时中等剂量佐剂组IgG抗体浓度显著高于全剂量疫苗对照组;第14d中等剂量佐剂组与全剂量疫苗组相比,分泌IFN-γIL-4淋巴细胞数量显著增加。结论:复合佐剂Nano-fla应用到狂犬疫苗中,能有效刺激小鼠体液免疫细胞免疫应答,更早地产生中和抗体,且能有效降低抗原用量,具有潜在应用价值。

  • 标签: 鞭毛蛋白 狂犬病疫苗 佐剂
  • 简介:利用PCR技术扩增HCVns3基因,经BamHⅠHindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX-HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX-HTb-ns3并测序;pProEX-HTb-ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白高效表达,薄层扫描显示占菌体总蛋白35%;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患者阳性血清做为抗行Western-Blot证实特异性抗原性.结果成功表明,诱导表达产物主要以包涵体形式存在;6His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-blot结果显示纯化蛋白具有良好抗原性.HCVNS3蛋白高效表达及纯化,为利用NS3蛋白作为诊断抗原及制备单克隆抗体奠定了基础.

  • 标签: 丙型肝炎病毒 非结构区 原核表达 纯化 抗原性 ns3基因
  • 简介:目的:利用巴斯德毕赤酵母表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突糖蛋白S。方法:根据GenBank中猪TGEV纤突糖蛋白S全基因设计引物,并在5’引物3’引物中引入EcoRI、NotI酶切位点,2。2kb目的基因S经PCR扩增后克隆于pBS-T载体,再将S基因经双酶切从T载体切下并与穿梭质粒pPIC9k连接,SalI线性化重组穿梭质粒pPIC9k—S,电转化于毕赤酵母GS115感受态细胞,G418筛选鉴定阳性重组子,经甲醇诱导,SDS—PAGE检测诱导后上清。结果:pPIC9k—S重组酵母表达载体测序证实已成功克隆了猪TGEVS基因;重组酵母菌诱导表达后,SDS-PAGE检测结果显示表达产物相对分子质量为为82×10^3,且S蛋白可溶性形式分泌表达于胞外。结论:利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功表达了猪传染性胃肠炎病毒(河北分离株)纤突糖蛋白S。

  • 标签: 猪传染性胃肠炎病毒 纤突糖蛋白 巴斯德毕赤酵母 分泌表达
  • 简介:目的:探索联合免疫策略乳头瘤病毒16型(HPV16)治疗疫苗L2E7E6rAdE7E6免疫效果影响。方法:用L2E7E6融合蛋白重组腺病毒rAd5E7E6不同联合免疫程序分别免疫C57BL/6小鼠,通过检测诱发体液免疫细胞免疫反应,以及观察在HPV16小鼠治疗模型中抑瘤效果,比较分析联合免疫小鼠免疫反应及治疗肿瘤效果影响。结果:异源性联合免疫组均可检测到较高水平体液免疫,该2组针对E6、E7特异性T细胞免疫反应与同源性联合免疫2组相比明显提高,并在小鼠肿瘤治疗模型中能抑制肿瘤生长.结论:异源性联合免疫策略可明显提高HPVl6L2E7E6及rAd5E7E6疫苗T细胞免疫反应,且有效治疗HPV16相关肿瘤.为HPVl6L2E7E6及rAd5E7E6疫苗应用提供了实验基础。

  • 标签: 人乳头瘤病毒 宫颈癌 免疫治疗 联合免疫