简介：在国家现代农业产业技术体系建设专项资金支持下，“十一五”期间，国家食用豆产业技术体系以产销量较大的绿豆、小豆、芸豆、蚕豆、豌豆等为主要突破口，针对产业发展中存在的品种混杂退化严重产量低而不稳、栽培管理粗放种植技术落后、

简介：菰是一种稻族野生资源,水生或沼生,在我国有着广泛的分布。野生菰群体不仅是一种重要的育种基因资源,同时还有着巨大的生态作用。为建立适宜于菰的ISSR反应体系,以菰DNA基因组为模板对ISSR反应体系中的主要影响因子进行优化。采用单因素变量法在12个不同梯度水平上设计正交试验针对体系中dNTPs浓度、Mg^2＋浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度及引物退火温度等6个因子进行优化,确定了在20μLISSR反应体系中各组分的最适因素水平分别为：3.0mmolMg^2＋（10×Buffer）,0.5mmoldNTPs、1.0μmol引物浓度、0.24U/μLTaq聚合酶、1.5ng/μLDNA模板以及55℃退火温度。应用该优化体系对80个菰材料进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性,为菰遗传资源的鉴定、评价与利用提供了技术支撑。

简介：以结缕草属植物DNA为模板，应用正交设计法对简单重复序列（simplesequencerepeats，SSR）反应体系中的各个主要影响因子进行了优化筛选，并通过比较不同浓度的模板DNA对聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）的影响，确立了适合结缕草属植物SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明，10μl的SSR反应体系中各组分的最适浓度分别为：10×PCR缓冲液，Mg^2＋2．5mmol／L，dNTP200μmol／L，左右引物分别为0．6μmol／L，TaqDNA聚合酶0．5U，模板DNA的用量在30～90ng均可。利用该优化体系，通过30对SSR引物对包含结缕草属植物4个种的10份材料进行了种质鉴定，结果发现Xgwm系列SSR引物可以有效地用于结缕草属植物不同种源间的鉴定及遗传多样性研究。其中有3对引物Xgwm459-6A、Xgwml49-4B和Xgwml35-1A因具有特异性条带或条带的缺失可以很明显地将大穗结缕草Z010与其他材料区分开来，在抗寒性和青绿期两极端类型材料的研究中发现，引物Xgwm484．2D和Xgwm44-7D均在抗寒性弱的部分材料和青绿期长的部分材料中扩增出一条抗寒性强和青绿期短的材料中没有的特异带，且两对引物中具有特异带的材料具有较高的一致性，初步认为这两标记可能与结缕草属植物的抗寒性或青绿期相关。

简介：以莴苣为材料研究了影响SRAP标记PCR结果的因素，包括Mg^2＋、dNTP、引物、Taq酶的浓度以及退火温度等，建立了适用于莴苣属蔬菜SRAP分析的PCR反应体系：在20μl反应体系中，模板DNA为50ng，Mg^2＋浓度为2．0mmol／L，dNTP浓度为0．2mmol／L，引物浓度为0．75μmol／L，Taq酶用量为1U。适宜的扩增程序为94℃5min；94℃1min，35℃1min，72℃1min，5个循环；94℃1min，51℃lmin，72℃1min，30个循环；72℃7min。对体系的验证结果表明本研究建立的莴苣SRAP体系重复性好、分辨率高、多态性丰富，在莴苣属蔬菜种盾资源评价、分子标记辅助选择言种等骞方面躲有专耍作用。

简介：大白菜是重要的蔬菜作物,准确鉴定大白菜品种对于大白菜种质资源管理、新品种测试、种子质量检测等具有重要意义。本研究从已定位到大白菜10个连锁群的205个SSR标记中,筛选出30个在连锁群上分布均匀、PCR扩增稳定、带型简单的标记,用于大白菜品种DNA指纹鉴定。对入选的引物用4种荧光染料进行了标记,利用基于毛细管电泳荧光检测的DNA分析仪对SSR扩增产物进行检测。通过比较分析2种不同型号的3台DNA分析仪的扩增片段检测数据,明确了不同DNA分析仪的检测数据间一般存在明显的系统误差。系统误差的大小取决于引物,一般在1～4bp之间。使用扩增产物的片段长度对各SSR位点的不同等位变异进行命名。通过使用一组参照品种,消除了不同批次、不同DNA分析仪型号间的系统误差,保证了检测数据的可重复性和可再现性。在此基础上,对184份大白菜品种进行了DNA分子数据采集。

简介：实时荧光定量PCR是目前基因表达量差异分析的首选方法之一。虽然其操作简单,但如何保证其定量结果的可信度一直是个难题,特别是针对只有20多个碱基的miRNA的定量分析。本研究以水稻miR408在不同组织中的表达差异为实例,系统地优化和阐述了有关荧光定量的新标准及要求。结果表明,引物的浓度对于荧光定量PCR体系的优化至关重要。

简介：采用GUS基因瞬时表达检测方法，通过正交试验以AS浓度、侵染菌液OD值、侵染时间、共培养时间和恢复培养时间5个因素在4个水平上进行分析，优化了农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系，并在此基础上进行了抗逆基因GmPK的遗传转化。结果表明，采用共培养培养基中添加100μmol／LAs、侵染菌液OD600值0．9、侵染15h、共培养5d和恢复培养3d的转化条件最佳，GUS阳性率达74．59％，经PCR及RT—PCR进一步验证获得了转基因阳性植株。利用优化的最佳条件进行抗逆基因GmPK的转化，炼苗移栽成活的再生植株经PCR及PCR—Southernblotting验证，初步证明外源基因已经整合至大豆基因组，转化率为0．6％。

简介：

简介：烟草种质资源的繁种更新是烟草中期库保种的重要任务之一。为保持其在保存过程中的遗传完整性，从烟草的遗传特性出发，对繁育过程中可能产生的遗传漂变、遗传漂移以及混杂等诸多因素进行了讨论；较为系统地总结了烟草种质资源长期研究所形成的繁种更新理论与技术，并就进一步研究提出设想。

简介：本文采用作者首创的双周期BrdU二次标记法研究了蚕豆根尖细胞染色体的复制带,得到了分布在整条染色体上的清晰稳定的多条带纹.这是复制带首次在植物染色体上取得的具有实用意义的带型.为进一步制定植物染色体的标准带型和研究植物染色体的复制方式提供了一条途径.

简介：实时荧光定量PCR技术自问世以来,因其具有高度的特异性和灵敏性、可定量、污染少等特点而得到了广泛的应用,此技术用于曲霉的研究也有近十年的历史。本文对近年来实时荧光定量PCR技术在曲霉病诊断中的应用情况进行综述。

简介：葡萄砧木具有抗葡萄根瘤蚜和线虫等土传虫害、抗寒、抗旱、耐盐碱等优良特性,可调控葡萄生长和品质,利用葡萄抗逆砧木进行嫁接栽培已成为葡萄产业发展的必然趋势。因此,开展葡萄砧木改良研究具有十分重要的意义。随着生物技术的发展,DNA分子标记技术已广泛应用于葡萄砧木改良研究,本文对近10年分子标记技术在葡萄砧木品种鉴定、系谱分析、遗传图谱构建等方面的研究应用进行了综述,并指明未来葡萄砧木的研究方向。

简介：由于关系到转基因植物的产业化前景，安全型转基因植物培育越来越受到公众的关注。在植物遗传转化体系中，绝大多数选择标记基因来源于细菌，对人类健康和环境安全存在潜在风险，因此无选择标记转基因植物培育受到科研工作者的高度重视。本文综述了安全型转基因植物的培育途径，包括共转化系统、位点特异性重组系统、转座子系统、同源重组系统、不依赖于组织培养的简易转化技术及再生相关基因利用等技术，探讨了各种途径的优缺点，以期推动安全型转基因植物培育和转基因植物产业化进程。

简介：皮肤黏膜微生态是指寄居在人体体表和与外界相通腔道的微生物群落与人体相互依存相互影响，形成在皮肤黏膜结构功能中发挥重要作用的微生态环境。微生态可对人体的疾病、健康产生不可忽视的影响，因此围绕该领域的研究不容忽视。以往的微生态研究通常基于传统的培养方法，存在诸多无法克服的缺陷和不足。随着PCR技术在生命科学研究中的广泛应用，PCR相关的各种分子技术以其各自的特点在不同的研究领域发挥着重要作用。

简介：为探索近红外光谱技术在大豆氨基酸测试中的应用,寻找一种快速的检测方法,以167份大豆[Glycinemax（L.）Merr.]种子为材料,采用傅里叶变换近红外光谱技术（FT-NIRS）对经高效液相色谱法（HPLC）分析的18种氨基酸含量进行模拟。结果显示：天冬氨酸（R2CV=0.85）、谷氨酸（R2CV=0.86）、丝氨酸（R2CV=0.82）、甘氨酸（R2CV=0.89）、酪氨酸（R2CV=0.83）、苯丙氨酸（R2CV=0.78）、异亮氨酸（R2CV=0.86）和色氨酸（R2CV=0.81）及15种氨基酸总和（R2CV=0.82）可利用FT-NIRS准确预测;苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和胱氨酸检测模型有一定的参考价值,可用来进行相对含量的估测;而对组氨酸、赖氨酸、脯氨酸和蛋氨酸的预测不准确。本研究进一步证明,利用FT-NIRS技术预测大豆主要氨基酸组分是稳定可行的。

简介：目的评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Matrix-AssistedLaserDesorptionIonization-TimeOfFlightMassSpectrometry,MALDI-TOF-MS）技术对酵母样真菌鉴定的临床应用价值。方法将2015年6月-2016年6月临床检出的142株酵母样真菌标本同时采用MALDI-TOF-MS技术和传统真菌培养方法进行鉴定,记录结果并对结果进行对比分析。结果两种方法对于常见的白念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和新生隐球菌的鉴定率很高（100%）,符合率较高（100%）;对于少见的葡萄牙念珠菌、解脂念珠菌、产朊念珠菌,两种方法的符合率较低,分别为25.00%、00.00%、00.00%。结论MALDI-TOF-MS技术对酵母样真菌的鉴定率较高,操作简便快速,是传统真菌培养鉴定的有力补充,可将其推广应用于酵母样真菌的早期快速鉴定。

简介：目的应用反向线点杂交技术（reverselineblothybridization,RLB）快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌。方法收集我院真菌和真菌病研究中心保存的5种曲霉菌（烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉）和7种毛霉目真菌（冻土毛霉菌、总状毛霉菌、卷枝毛霉菌、少根根霉、小孢根霉、微小根毛霉、伞状犁头霉）,共计98株菌株。利用真菌通用引物ITS1和ITS4对菌株进行PCR扩增,用12个真菌种特异性探针与扩增后产物进行反向线点杂交。将RLB结果与真菌传统形态学鉴定结果、ITS区DNA测序结果进行比较。结果RLB可以正确鉴定98株实验菌株,与形态学方法和ITS区测序方法鉴定结果100%一致,种特异性探针之间未见交叉杂交,显示出该方法的高度敏感性和特异性。8株阴性对照菌株（白念珠菌、茄病镰刀菌、尖端赛多孢、马尔尼菲青霉、疣状瓶霉、棒曲霉、日本曲霉以及雅致小克银汉霉）,使用RLB方法无法鉴定。通过烟曲霉基因组DNA浓度10倍倍比稀释法验证RLB的敏感性为1.8×10-3ng/μL。结论RLB技术为实验室早期快速诊断、鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌提供参考。

简介：本文介绍了植物染色体原位杂交技术,以及该技术在稻属特定DNA序列定位、基因组间关系、外源染色体鉴定等研究中的应用.

简介：目的建立检测常见丝状真菌感染病原菌的PCR-RFLP和多重PCR方法。方法建立以PCR技术为基础的限制片段长度多态性（RFLP）方法,首先用真菌通用引物扩增丝状真菌的ITS区,然后用限制性核酸内切酶对PCR产物进行酶切。用4种丝状真菌的特异性引物建立多重PCR体系,用该体系检测单模板、双模板和三模板的扩增情况,并测定该体系的特异性和敏感性。结果用PCR-RFLP技术能够鉴别5种常见丝状真菌,多重PCR能够根据扩增片段的不同鉴别菌种,在合适的反应条件下,对单模板、双模板和三模板均能扩增出目的片段。结论PCR-RFLP和多重PCR技术能够快速鉴定丝状真菌感染病原菌,有临床应用的良好前景。

简介：利用ISSR分子标记技术对59份玉米自交系和1份大刍草材料进行遗传多样性分析.21对ISSR引物共扩增出475条不同位置的带,平均22.6条;多态性带469条,平均22.3条,百分率高达98.7%;不同引物的多态性信息指数(PIC)在0.84～0.94之间.60份材料的遗传相似系数在0.23～0.48之间.经聚类分析,可将这些材料分成两大组,共9个亚组,并且在一定程度上与血缘和系谱是一致的,也存在一些例外.结果表明,ISSR标记尽管可以用于进行遗传多样性分析,但并不是最好的分子标记类型.综合考虑不同的分子标记类型的优缺点,认为ISSR标记在遗传研究较少的作物上应用潜力较大.