简介：摘要目的探讨食管癌中铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)的表达及其对细胞增殖的影响和机制。方法选取食管癌组织和癌旁组织各32例，利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和免疫组织化学法检测SOD1表达。将食管癌细胞系KYSE510随机分为3组：对照组、腺相关病毒(AAV)-绿色荧光蛋白(GFP)组和AAV-SOD1组。AAV-GFP组和AAV-SOD1组细胞分别转染AAV-GFP和AAV-SOD1重组病毒载体，对照组则加磷酸盐缓冲液(PBS)处理。利用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、二氢乙锭(DHE)探针检测活性氧簇(ROS)产生、Western blot检测Wnt5a和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达。两组间比较采用t检验，3组间比较采用单因素方差分析并采用Tukey法进行两两比较。结果与癌旁组织(1.00±0.33)比较，食管癌组织中SOD1 mRNA表达升高(3.76±0.51，t＝-25.595，P<0.01)。食管癌中SOD1蛋白表达水平(1.93±0.35)也高于癌旁组织(1.00±0.28，t＝-11.734，P<0.01)。转染24、48、72 h后，AAV-SOD1组细胞活性(0.165±0.016、0.283±0.023、0.391±0.036)明显高于对照组(0.133±0.017、0.213±0.028、0.326±0.038)和AAV-GFP组(0.129±0.015、0.209±0.024、0.316±0.032，P<0.01)。转染48 h后，AAV-SOD1组细胞ROS水平(0.757±0.062)明显低于对照组(1.000±0.079)和AAV-GFP组(1.048±0.108，P<0.01)，而SOD1、Wnt5a和β-catenin蛋白表达水平则明显高于对照组和AAV-GFP组(P<0.01)。结论SOD1的表达在食管癌中升高，过表达SOD1通过抑制ROS和调节Wnt信号通路活化诱导细胞增殖。

简介：摘要目的观察长链非编码RNA(lncRNA) HOX转录物反义RNA(HOTAIR)通过磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用体外培养人食管鳞癌细胞株(购自中国细胞资源种子库)，分别用磷酸盐缓冲液(PBS)和CRISPR/Cas9 KO HOTAIR病毒或CRISPR/Cas9 KO HOTAIR病毒＋PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1处理，得到对照组(NC组)，CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组和CRISPR/Cas9 KO HOTAIR＋IGF-1组。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA HOTAIR和Akt mRNA水平；蛋白质印迹法(Western blot)法测定磷酸化Akt(p-Akt)、t-Akt和Tubulin蛋白的表达量；噻唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖情况，最后通过Tanswell测各组细胞迁移。采用双尾t检验。结果通过RT-PCR检测IncRNA HOTAIR在正常食管组织组(1.001±0.115)和食管鳞癌组织组(4.167±0.491)，两者差异有统计学意义(t＝8.654，P<0.01)；与NC组(1.001±0.144)比较，CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.051±0.014)的lncRNA HOTAIR表达水平显著降低(t＝6.554，P<0.01)，差异有统计学意义；与NC组(1.033±0.060)比较，CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.220±0.058)的p-Akt或p-Akt/t-Akt值显著降低(t＝10.054，P<0.01)，差异有统计学意义，而CRISPR/Cas9 KO HOTAIR＋IGF-1组(0.400±0.029)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.220±0.058)比较，p-Akt或p-Akt/t-Akt值显著升高(t＝1.412，P<0.05)，差异有统计学意义；通过敲除HOTAIR基因对的Akt mRNA检测：NC组(1.033±0.044)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.936±0.064)比较，两者差异无统计学意义(t＝0.936，P>0.05)；CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.936±0.064)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR ＋IGF-1组(1.036±0.102)比较，两者差异无统计学意义；通过MTT检测细胞的增殖，在72 h比较细胞增殖，NC组(6.700±0.289)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(2.517±0.306)比较，两者差异有统计学意义(t＝0.458，P<0.01)；CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(2.517±0.306)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR＋IGF-1组(4.200±0.265)比较，两者差异有统计学意义(t＝0.966，P<0.05)。通过Transwell检测细胞的迁移，NC组(1.000±0.029)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.330±0.049)比较，两者差异有统计学意义(t＝14.798，P<0.01)；CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.330±0.049)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR＋IGF-1(0.608±0.068)组比较，两者差异有统计学意义(t＝0.876，P<0.05)。结论敲除HOTAIR基因(KO HOTAIR)通过降低p-Akt水平，降低p-Akt/t-Akt值而抑制PI3K/Akt信号通路，降低细胞增殖，抑制细胞迁移。而PI3K/Akt的激活剂IGF-1可以阻止HOTAIR基因敲除产生的影响。