简介：摘要目的基于正电子发射断层显像（PET-CT）和转录组学对痰菌阴性肺结核病变组织的活动性生物标志物筛选并进行初步临床验证。方法回顾性收集2017年1月1日至2019年12月31日在上海市公共卫生临床中心胸外科手术治疗的9例痰菌阴性肺结核患者作为发现组，其中男4例，女5例，年龄20~57岁，平均36岁，术前均行PET-CT扫描，术后将切除的标本按照术前PET-CT表现分为氟代脱氧葡萄糖（FDG）代谢增高区域［标准摄取值（SUV）max>3］和FDG代谢基本正常区域（SUVmax≤3）。样本处理后先对不同区域组织进行总RNA的提取，然后行全基因转录组测序。对两组数据进行生物信息学分析，发现两个区域全基因转录组数据差异的表达谱，并筛选出候选生物标志物。回顾性收集2019年1月1日至2021年1月1日上海市公共卫生临床中心收治的80例痰菌阴性肺结核患者作为验证组，其中男37例，女43例，年龄20~62岁，平均39岁，分为SUV增高组（40例）和CT影像无病灶组（40例），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定患者外周血浆中候选生物标志物的蛋白水平。利用受试者工作特征（ROC）曲线对生物标志物进行效果评估。使用student t检验来判断两组之间蛋白水平差异是否具有统计学意义。结果生物信息学分析发现，C1QB、CCL19、CCL5和HLA-DMB的表达水平与痰菌阴性肺结核病变组织的代谢活性相关。通过验证组进一步筛选验证，证实SUV增高组患者外周血浆中C1QB蛋白水平高于CT影像无病灶组，差异有统计学意义［（3.55±0.34）mg/L比（2.75±0.21）mg/L，t=4.12，P<0.001］。ROC曲线显示，C1QB蛋白水平的曲线下面积为0.731，具有潜在的临床价值。结论C1QB蛋白水平可用于评估痰菌阴性肺结核患者病变的活动性，是一种潜在的生物标志物。

简介：摘要目的研究DNA甲基化在结核分枝杆菌（MTB）裂解物诱导CD4+T细胞白细胞介素6受体（IL-6R）表达下调中的作用及机制。方法本研究属于前瞻性研究。收集并分选2019—2020年深圳市第三人民医院10名健康人（对照组）和10例结核病患者（TB组）外周血单个核细胞（PBMC）中CD4+T细胞，亚硫酸氢盐测序法分析IL-6R启动子区和3′非翻译区（UTR）区CpG岛甲基化变化；RT-qPCR和Western blotting分别检测IL-6R和DNA甲基转移酶（DNMT）表达；进一步通过MTB裂解物刺激anti-CD3/CD28抗体活化的对照组PBMC和Jurkat E6-1细胞，检测IL-6R不同区域CpG岛甲基化和IL-6R、DNMT表达的变化；双荧光素酶报告基因系统检测IL-6R 3′UTR区甲基化状态对其转录活性的影响；两组间采用非配对t检验，三组及以上多组运用one-way ANOVA分析。结果在对照组和TB 组外周血CD4+T细胞中，TB组中IL-6R表达低于对照组，而DNMT1和DNMT3B则高于对照组；且与对照组比，IL-6R启动子CpG岛甲基化水平差异无统计学意义；3′ UTR区CpG岛甲基化率分别为54.3%±4.7%和69.5%±3.4%，差异有统计学意义（P<0.001）；在体外，MTB裂解物刺激活化对照组PBMC后，IL-6R表达低于未刺激的，而DNMT1和DNMT 3B表达高于未刺激的；同时CD4+T细胞中IL-6R 3′ UTR区CpG岛甲基化率由58.9%±11.6%增加至79.4%±10.9%，差异有统计学意义（P<0.001）；同样地，MTB刺激活化Jurkat E6-1细胞后的结果与对照组PBMC相一致。进一步发现DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（5-aza）与MTB裂解物共处理后IL-6R 的表达均高于MTB 裂解物单独刺激的；DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（5-aza）与MTB裂解物共处理后IL-6R 3′ UTR区CpG岛甲基化水平低于MTB 裂解物单独刺激的，并且完全非甲基化修饰的IL-6R 3′UTR报告基因的转录活性高于完全甲基化修饰的IL-6R 3′ UTR区CpG岛。结论MTB裂解物刺激通过诱导CD4+T细胞IL-6R 3′UTR区CpG岛高甲基化抑制IL-6R转录活性进而下调其表达；MTB诱导CD4+T细胞IL-6R 3′UTR区CpG岛高甲基化可能与DNMT1、DNMT3B表达增加有关。