简介:摘要目的探讨寡脱氧核苷酸 (ODN) MT01对大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSCs) 形态、增殖及成骨分化的影响。方法4周龄清洁级SD雄性大鼠5只,以全骨髓贴壁法培养SD大鼠BMSCs,通过观察不同代次的细胞形态、流式细胞仪检测表面相关标志物和成骨分化潜能,对所提取的干细胞进行鉴定。设立PBS组(对照组)和不同浓度 (0.5、1.0、2.0、4.0 μg/ml) ODN MT01组进行对照研究,每组实验重复3次。通过DAPI和鬼笔环肽荧光染色观察各组BMSCs细胞核及骨架的形态变化;通过CCK-8法检测不同时间各组BMSCs的增殖活性;成骨诱导培养基培养7 d和21 d, 分别行碱性磷酸酶染色及其活性检测和茜素红染色鉴定各组BMSCs的成骨分化程度。组间两两比较采用 t 检验,多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果随着代次增加,BMSCs纯度越来越高,第3代细胞整体呈鱼群样分布。流式细胞仪分析结果显示,细胞高表达CD29 (99.8%)、CD44 (96.1%),低表达CD11b (1.03%)、CD45 (1.74%)。成骨诱导7 d后碱性磷酸酶染色及21 d后茜素红染色均为阳性。细胞核及骨架染色显示,ODN MT01浓度为4.0 μg/ml时会导致BMSCs皱缩并降低伸展性。CCK-8结果显示,培养4 d时对照组吸光度值为0.446±0.018,1.0、2.0 μg/ml ODN MT01组分别为0.505±0.019、0.528±0.014,与对照组比较差异有统计学意义 (t=2.954、4.083,P=0.033、0.008),培养7 d时对照组吸光度值为0.514±0.027,1.0、2.0 μg/ml ODN MT01组分别为0.607±0.007、0.636±0.023,与对照组比较差异有统计学意义 (t=4.664、6.091,P=0.009、0.008),BMSCs增殖能力较对照组明显升高,而4.0 μg/ml ODN MT01 (0.427±0.013) 对BMSCs增殖能力具有抑制作用 (t=4.332,P=0.015);诱导BMSCs成骨分化过程中随着ODN MT01浓度的升高,蓝色团块和矿化结节均显著增加,培养7 d后的碱性磷酸酶活性升高趋势与ALP染色结果相类似,对照组碱性磷酸酶活性为1.207±0.023,0.5、1.0、2.0、4.0 μg/ml ODN MT01组分别为1.747±0.095、2.200±0.136、3.560±0.088、3.490±0.144,与对照组比较差异均有统计学意义 (t=4.313、7.934、18.800、18.240,P=0.005、0.001、<0.001、<0.001),而2.0、4.0 μg/ml组的诱导效果相比基本无差异 (t=0.562,P=0.590)。结论在不影响BMSCs形态的情况下,浓度为2.0 μg/ml的ODN MT01可显著促进BMSCs的增殖和成骨分化。
简介:摘要随着高考改革的推进和新课标的实施,促进学生全面、自主、和谐地发展日渐成为基础教育的主题。高考生物的考试体系也正慢慢地变化以适应之。本文就近几年江西省高考生物试题着手,联系新课程标准、新教材,分析了江西高考生物的动态变化,进而研究了高中生物的命题趋势。
简介:摘要: 幼儿园 的基本活动形式 就是游戏 , 而游戏中包含着大量的动作 。动作进行的过程中,自然也就蕴含了身体素质的发展,即幼儿的动作和身体发展是蕴含在一日活动的各环节之中。 幼 儿园的 学生 年龄 都很 小, 在 这 个时期 的孩子 培养他们 基本 肢体协调 的关键期, 他们 开始学习多种动作的协调,出现自主性的协调运动,如跑、跳、扔等等, 而足球作为幼儿游戏中常见的运动种类,我们更应该普及并优化它的开展方式。 对于幼儿来说,动作与运动能力的发展应指向全面化、生活化,即让幼儿的动作经验更丰富,游戏方法更多元,而不是一味盲从,追求更高、更远的竞技水平目标。