简介：目的研制能同时检测6种口岸重要虫媒病毒的微孔膜芯片。方法针对包括1—4型登革病毒、乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒和裂谷热病毒等6种虫媒病毒，选择合适的保守基因，设计特异性的PCR引物（5’端标记生物素）和检测探针，通过参数优化建立单管多重RT—PCR扩增体系；然后按每个阵列5X5的格式，并确保点样区域为96孔板的微孔大小，将探针喷点到处理后的尼龙膜上，通过条件优化建立稳定的PCR产物与固化探针的杂交体系；采用碱性磷酸酯酶标记链亲和素和化学显色底物NBT／BCIP来检测特异性的PCR杂交产物。选取2012年1—6月份从口岸输入的疑似登革热发热病例的临床血清标本，提取RNA后，直接采用本研究建立的微孔膜芯片进行未知虫媒病毒的快速检测。结果用1～4型登革病毒、乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和基孔肯雅病毒等7种毒株、1种黄热病毒疫苗株和1种裂谷热病毒核酸体外转录的RNA模板验证已建立的微孔膜芯片，获得比较特异和稳定的实验结果。应用该研究建立的方法，从3份疑似登革热发热病例的临床血清标本中检出了1例登革1型病毒和2例登革2型病毒，与实时荧光PCR检测结果相符。结论该研究建立的6种虫媒病毒微孔膜芯片检测方法，具有快速、准确、自动化和高通量等特点，为快速应对口岸输入性发热病例提供了非常有价值的检测手段，也为进一步开发更多指标的病原体检测方法提供良好的示范作用。
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