简介:摘要目的构建表达甲型H5N1禽流感病毒(H5N1 avian influenza A virus,H5N1 AIAV)NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒,为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)编码基因,并将改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株(vaccinia virus Tiantan,VTT)于Vero细胞中发生同源重组后,筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒(rVTT-HA/NA),并对其进行鉴定。结果反转录PCR扩增的HA和NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp,与预期相同。DNA测序证实,改造的HA和NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明,HA和NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示,rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性,血凝滴度为1∶32。结论重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。
简介:摘要目的建立优化的人用H5N1禽流感病毒疫苗生产的工艺。方法在不同的稀释倍数、收获时间及灭活剂添加量下,通过测量收获液的病毒滴度和血凝效价,来确定病毒的最佳生产条件,并对离心法和凝胶过滤层析法的纯化效果进行对比。结果103~104半数鸡胚感染量(50% egg infective dose,EID50)病毒接种鸡胚,收获的鸡胚尿囊液的病毒滴度和血凝效价最高,分别为10-8.3EID50和1∶480;在56~72 h血凝效价最高。甲醛浓度1∶10 000灭活144 h为灭活最佳条件。两种纯化方法得到的样品纯度和卵清蛋白的去除率相近,但离心纯化法和凝胶过滤层析纯化法病毒回收率有较大的差异,分别为19%和70%。结论成功建立了高产毒的鸡胚基质H5N1禽流感病毒培养、灭活及纯化工艺。
简介:摘要目的探讨改良Doi分型指导腕关节镜下辅助复位的临床应用价值。方法自2014年至2018年我科行桡骨远端关节内骨折关节镜下镜检及辅助复位患者共79例,均先行切开复位内固定,然后关节镜检查骨折复位情况。对首次复位后关节面出现>1 mm台阶的骨折类型,依据前期研究的"改良Doi分型"进行分类,在关节镜下对移位的骨折块进行复位,找出首次复位后容易出现骨折移位的类型。结果术前79例患者的分型:两部分水平型11例,两部分垂直型13例,两部分背侧边缘型2例,两部分尺背侧型18例,两部分尺掌侧型1例,三部分型12例,四部分型22例。术中关节镜探查发现首次复位后21例出现关节面存在>1 mm的台阶,分别为两部分水平型2例、两部分尺背侧型7例、三部分骨折4例、四部分骨折8例。结论改良Doi分型中,两部分、三部分及四部分型骨折中有尺背侧骨块,在首次复位后有超过30%的概率出现>1 mm的移位,需要关节镜辅助复位。
简介:摘要目的探讨桡骨远端关节内骨折Doi分型临床应用可行性。方法自2014年8月至2018年8月,我们切开复位接骨板内固定治疗桡骨远端关节内骨折共计79例,依据Doi分型术前对全部的病例进行CT平扫及三维重建评估,同时采用桡骨远端关节面六部分分区法确定骨折累及关节面范围及骨折块数量,并验证Doi分型,最终确定Doi分型是否能满足临床应用的需求。结果79例桡骨远端关节内骨折患者中有60例使用Doi分型标准可准确地进行分型,另有19例患者尚不能使用Doi分型进行准确分型。根据桡骨远端关节面六部分分区法判定骨折累及关节面范围及骨折块数量,该19例无法用Doi分型的骨折类型分别为"两部分尺背侧型"18例和"两部分尺掌侧型"1例。桡骨远端关节面六部分中,乙状切迹区是关节内骨折最易受累区。结论Doi分型方便关节镜下使用,但缺少两个亚型;我们增加两个亚型,完善Doi分型,更利于关节内骨折类型的准确判断,并指导治疗方案的选择。