简介：摘要目的了解传染性单核细胞增多症(IM)患儿血清抗EB病毒(EBV)抗体谱类型，分析抗EBV衣壳抗原(VCA)免疫球蛋白(IgG)抗体亲合力检测在诊断IM中的价值。方法回顾性分析2016年5月至2019年5月在首都医科大学附属北京儿童医院诊断为IM的150例住院患儿的血清抗EBV抗体谱结果及血浆EBV核酸检测结果，抗EBV抗体谱包括抗VCA IgG和IgM，抗早期抗原(EA)IgA，抗EBV核抗原(EBNA)IgG和VCA IgG抗体亲合力。抗EBV抗体谱的检测方法为酶联免疫吸附法，血浆EBV核酸检测使用实时荧光定量PCR方法。结果150例IM患儿中抗EBV抗体谱大致可分为2种类型：1.抗VCA-IgM/IgG阳性、抗EBNA-IgG阴性和抗VCA-IgG低亲合力抗体阳性130例(86.7%)，其中抗EA-IgA阳性50例；2.抗VCA-IgM阴性，抗VCA-IgG阳性、抗EBNA-IgG阴性和抗VCA-IgG低亲合力抗体阳性18例(12.0%)，其中EA-IgA阳性5例。132例患儿进行了血浆EBV DNA检测，阳性率37.9%(50/132例)。结论儿童IM患者血清抗EBV抗体谱呈现多种类型，12.0%的IM患儿住院时抗VCA-IgM阴性，依靠抗VCA-IgG抗体亲合力检测可明确诊断。

简介：摘要目的对一种六重呼吸道病毒real-time PCR试剂在儿童急性下呼吸道感染病毒病原检测中的应用效果进行评价。方法采用多重荧光探针real-time PCR法，对下呼吸道感染患儿的300份鼻咽拭子进行常见6种呼吸道病毒检测(甲型/乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感Ⅰ型和副流感Ⅲ型病毒)，并应用液相悬浮芯片试剂进行对比检测；另外对136份免疫荧光法抗原检测阳性的下呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物标本进行验证分析。结果300份鼻咽拭子中，该六重荧光探针real-time PCR试剂检出阳性标本173例，液相芯片法检出阳性标本159例，该real-time PCR试剂检出率高于液相芯片法。此外，在136份抗原检测阳性标本中，该试剂还检测出22例抗原法未检到的2种或2种以上病毒病原混合感染样本。结论该多重呼吸道病毒real-time PCR试剂在儿童下呼吸道病毒病原检测中具有较高的灵敏度和特异性，在儿童下呼吸道感染的临床诊疗方面具有良好的应用价值。

简介：无

简介：摘要目的探讨儿童社区获得性肺炎的病毒血清特异性抗体检测与呼吸道病毒核酸检测结果的一致性，以指导其临床应用。方法109例经鼻咽拭子标本实时荧光定量PCR检测诊断为病毒感染的社区获得性肺炎患儿，采集其急性期和恢复期血清标本，采用间接免疫荧光法检测呼吸道常见病毒(呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒)特异性IgM抗体，比较病毒血清特异性抗体检测与呼吸道病毒核酸检测结果的一致性。结果109例呼吸道病毒核酸检测阳性的社区获得性肺炎患儿中，共14例对应病毒急性期血清特异性IgM阳性，占12.8%；综合急性期和恢复期血清病毒特异性抗体检测结果，17例对应病毒血清特异性IgM抗体阳性，占15.6%。一致性分析显示呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒急性期血清特异性IgM抗体检查结果和呼吸道标本核酸检测结果相比，Kappa值分别为-0.033、-0.003、0.053、-0.024、-0.053；综合急性期和恢复期血清病毒特异性抗体检测结果，呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒总的血清特异性IgM检查结果和呼吸道标本核酸检测结果相比，Kappa值分别为0.040、-0.053、0.065、-0.030、-0.018，Kappa值均小于0.4，说明两种方法的检测结果一致性差。结论儿童社区获得性肺炎患者血清免疫学病毒特异性IgM抗体检测与呼吸道标本病毒核酸检测结果的一致性差，提示血清免疫学病毒特异性抗体检测不适宜儿童社区获得性肺炎的病毒病原诊断。

简介：摘要目的探讨人腺病毒7型(human adenovirus type 7，HAdV-7)感染对于炎症小体激活的影响及作用机制。方法采用免疫荧光检测HAdV-7对于THP-1分化的巨噬细胞的感染；应用ELISA方法检测HAdV-7感染对于IL-1β的激活；实时荧光定量PCR检测病毒感染对于NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1等mRNA表达的影响；蛋白质免疫印迹实验(western blot，WB)检测病毒感染后细胞内NLRP3、pro-IL-1β的表达及上清中caspase-1和IL-1β蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示HAdV-7可感染THP-1分化的巨噬细胞，WB显示HAdV-7感染诱导细胞内pro-IL-1β蛋白表达上调，ELISA检测表明HAdV-7感染可诱导IL-1β的分泌表达(MOI＝0.5，P＝0.0008)。使用Ac-YVDK-cmk抑制caspase-1表达后，HAdV-7感染上清中IL-1β的表达被明显抑制(P＝0.0025)；HAdV-7感染caspase-1缺陷的THP-1分化的巨噬细胞，IL-1β的表达同样被显著抑制(P＝0.0191)。荧光定量PCR检测HAdV-7感染可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3 mRNA表达上调(NLRP3：P＝0.0004；pro-IL-1β：P＝0.0007)，同时WB显示HAdV-7可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3蛋白表达上调；使用NLRP3特异性抑制剂MCC950处理细胞，可抑制HAdV-7感染的细胞上清中IL-1β的表达(P＝0.0027); HAdV-7感染NLRP3缺陷的THP-1分化的巨噬细胞，IL-1β的表达被明显抑制(P＝0.0189)。分别使用TLR2、TLR4、TLR7/9信号传导抑制剂，抑制HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞，结果显示抑制TLR4信号传导，细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调(P＝0.0122)；使用ROS抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂，或抑制K＋外流，分别处理HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞，结果显示抑制组织蛋白酶B(P＝0.0292)，或抑制K＋外流时(KCl, P＝0.0022；Glibenclamide, P＝0.0275)，细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调。结论HAdV-7感染THP-1细胞激活NLRP3炎症小体，NLRP3炎症小体激活的第一信号通过Toll样受体4(TLR4)信号传导，第二信号主要通过半通道模型介导K＋外流的和溶酶体破坏模型释放组织蛋白酶B的激活NLRP3炎症小体。

简介：摘要急性坏死性脑病(ANE)是一种全球分布的罕见并且独特的急性脑病。通常以病毒感染相关的高热症状起病，随后迅速恶化，出现抽搐、意识障碍，甚至昏迷。ANE的神经放射学特征是累及双侧丘脑等部位的多灶性、对称性脑部病变。目前尚无针对ANE的特异性治疗方法，预后较差，大多伴随着不同程度的神经系统后遗症，甚至死亡。本文总结了儿童中这种罕见但致命疾病的流行病学特点、诊断和预后的研究进展。

简介：摘要急性坏死性脑病(ANE)是一种全球分布的罕见并且独特的急性脑病。通常以病毒感染相关的高热症状起病，随后迅速恶化，出现抽搐、意识障碍，甚至昏迷。ANE的神经放射学特征是累及双侧丘脑等部位的多灶性、对称性脑部病变。目前尚无针对ANE的特异性治疗方法，预后较差，大多伴随着不同程度的神经系统后遗症，甚至死亡。本文总结了儿童中这种罕见但致命疾病的流行病学特点、诊断和预后的研究进展。

简介：摘要目的基于血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase，HN)基因分析我国流行人副流感病毒3型(human parainfluenza virus 3, HPIV3)的基因变异规律和进化特征。方法采用多重荧光PCR方法对2007—2020年5个省市(北京、浙江、安徽、河南、湖南)急性呼吸道感染病例的咽拭子标本进行常见病原体核酸筛查，对HPIV3阳性标本进行HN基因序列测定，与GenBank数据库的国外和我国10个省的HPIV3流行代表株HN基因序列进行比对，应用多种生物信息学方法开展分子进化分析。结果本研究期间从5个省市共获得49株HPIV3的HN基因序列，核苷酸同源性在96.6%~100%之间，其中48株为C3基因亚型，1株为C5基因亚型。系统进化分析显示，我国12个省市在2003—2020年间存在C1、C3和C5基因亚型的毒株共流行，毒株间核苷酸和氨基酸同源性分别为95.4%~99.8%和97.9%~100%，其中C3是我国的优势流行基因亚型，分属于C3a、C3b、C3c、C3e和C3f进化分支，以C3f的传播范围和流行时间最为广泛。对C3基因亚型的进化分析显示，其最近共同祖先形成时间(tMRCA)可追溯到1990年，有效群体规模在2002—2010年间逐渐扩张而后趋于平稳；C3各进化分支HPIV3的HN基因进化速率在3.69×10-4~5.82×10-4替换/位点/年之间；C3基因亚型毒株HN蛋白共享N308、N351、N485和N523潜在N-糖基化位点，选择压力以负向选择为主。结论C3基因亚型是我国的本土优势HPIV3流行型别，形成了广泛传播和持续流行态势，并在流行过程中形成多个进化分支共同循环。

简介：摘要目的原核表达人腺病毒（HAdV）7型DNA结合蛋白（DBP），制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该抗体效价；使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法（IFA）检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体，表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%，间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000，Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性，间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%（19/38）和63.2%（24/38）。结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体，获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。

简介：摘要目的评价赛沛Xpert Xpress Flu/RSV Assay(后简称Xpert)在儿童流感病毒和呼吸道合胞病毒感染实验室检测的效果。方法2018年10月—2019年2月，在北京儿童医院门诊采集急性呼吸道感染儿童的鼻咽拭子，所有样本均采用Xpert和测序方法进行检测，不一致结果样本使用第三方检测方法进行验证，比较Xpert和测序方法的灵敏度和特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果本研究共分析388份儿童急性呼吸道感染病例的鼻咽拭子样本的Xpert和测序法方法的检测结果。两种方法检测对FluA、FluB和RSV的结果具有较高的一致率，分别为：FluA 93.81% (364/388)、FluB 94.85% (368/388)和RSV 91.75% (356/388)。Xpert检测FluA、FluB和RSV相比测序方法具有较高的灵敏度，分别为99.21%(125/126)vs. 92.86%(117/126)、100.00%(109/109)vs. 84.40%(92/109)和100.00%(52/52)vs. 40.38%(21/52)。Xpert检测FluA、FluB和RSV的特异度均低于测序方法，95.42%(250/262)vs. 99.24%(260/262)、99.28%(277/279)vs. 99.64%(278/279)和99.70%(335/336)vs. 100.00%(336/336)。Xpert检测FluA、FluB和RSV的阳性预测值均低于测序方法，分别为91.30%(126/138)vs. 98.33%(118/120)、98.18%(108/110)vs. 98.92%(92/93)和98.11%(52/53)vs. 100.00%(21/21)。Xpert检测FluA、FluB和RSV的阴性预测值均高于测序方法，99.60%(251/252)vs. 96.67%(261/270)、99.64%(279/280)vs. 94.27%(280/297)和100.00%(337/337)vs. 91.60%(338/369)。结论赛沛Xpert Xpress Flu/RSV Assay是一种快速、准确、可靠的可以适用于儿童检测流感病毒和RSV的分子诊断方法。