简介：摘要目的建立可用于确诊先天性维生素K依赖性凝血因子缺乏症1(vitamin K-dependent coagulation factor deficiency 1，VKCFD1)疾病的细胞体系。方法在稳定表达报告基因FIX-Gla-PC的HEK293细胞中，应用CRISPR/Cas9技术敲除GGCX基因；通过ELISA、DNA测序、Western印迹等方法鉴定GGCX基因敲除的单克隆细胞。用快速点变异的方法构建致病性GGCX变异体质粒；用ELISA方法检测GGCX变异对报告基因的影响。结果首先用ELISA方法筛选到两株报告基因无活性的单克隆细胞；之后DNA测序结果和Western印迹验证GGCX基因发生了编辑和敲除；最后通过转染野生型GGCX基因，可以恢复报告基因的活性，提示成功筛选到两株GGCX基因敲除的单克隆细胞。在筛选到的细胞株中转染已知可导致VKCFD1的GGCX变异体，发现报告基因活性在致病性变异体中显著降低。结论成功构建了检测GGCX活性的细胞体系，该体系可以用于诊断GGCX变异导致的VKCFD1。
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