简介：摘要目的探究肺泡表面活性蛋白A(surfactant protein A，SP-A)能否通过调控滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell，Tfh)的分化参与调节哮喘病理过程。方法6～8周的雌性野生型(wild-type，WT)及SP-A基因敲除(Sp-a-/-)型C57BL/6J小鼠，利用鸡卵白蛋白(ovalbumin，OVA)和氢氧化铝免疫构建哮喘模型(WT哮喘小鼠：8只，Sp-a-/-哮喘小鼠：8只)，并分别设立磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)处理的对照组(WT对照小鼠：6只，Sp-a-/-对照小鼠：4只)。HE染色观察小鼠肺部病理改变，流式细胞术检测脾脏和纵隔淋巴结中Tfh细胞及其亚群的组成，Tfh亚群根据其胞内干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白细胞介素(interleukin，IL)-17和IL-4的表达情况，分别定义为IFN-γ＋Tfh、IL-17＋Tfh和IL-4＋Tfh细胞。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)用于检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)E的水平。将T-B细胞共培养，检测培养体系中IgE抗体的水平。在体外，给予人肺泡表面活性蛋白A(human SP-A，hSP-A)处理并设立对照组，培养5 d后检测体系中Tfh亚群的分布情况。结果OVA激发后小鼠BALF中和肺组织内有大量炎症细胞浸润，WT及Sp-a-/-哮喘小鼠BALF中炎症细胞总数显著高于其相对应对照组小鼠[(11.38±1.43)×104比(6.40±0.68)×104，(14.38±1.52)×104比(6.25±0.48)×104，t值分别为2.61和3.64，P值均<0.05]，差异具有统计学意义。另外，OVA激发后，WT和Sp-a-/-哮喘小鼠BALF中IgE的水平明显高于其相应的对照组小鼠[(16.85±2.50)pg/mL比(4.94±2.01)pg/mL，(25.52±3.17)pg/mL比(8.05±2.90)pg/mL，t值分别为3.63和3.58，P值均<0.05)]，且Sp-a-/-哮喘小鼠BALF中IgE抗体的水平明显高于WT哮喘小鼠(t＝2.20，P<0.05)，差异具有统计学意义。进一步研究显示，Tfh亚群组成在哮喘模型的WT和Sp-a-/-小鼠中存在不同，表现为Sp-a-/-哮喘小鼠IL-4＋Tfh细胞比例高于WT哮喘小鼠，IFN-γ＋Tfh细胞比例降低，但差异并不具有统计学意义(P>0.05)。Tfh细胞的亚群组成发生变化，其中IL-4＋Tfh比例与肺泡灌洗液中IgE水平呈正相关(r＝0.50，P<0.05)，而IFN-γ＋Tfh比例与肺泡灌洗液中IgE水平呈负相关(r＝-0.56，P<0.05)。脾脏中IFN-γ＋Tfh/IL-4＋Tfh的比值在Sp-a-/-哮喘小鼠中显著低于WT小鼠(t＝2.31，P<0.05)，且与肺泡灌洗液中IgE呈负相关(r＝-0.55，P<0.05)。T-B细胞共培养实验发现，Sp-a-/-小鼠脾脏来源Tfh细胞具有更强的辅助B细胞合成IgE抗体的能力(t＝3.18，P<0.05)。后续的体外T细胞刺激实验证实，hSP-A处理可以上调培养体系中IFN-γ＋Tfh细胞比例与IFN-γ＋Tfh/IL-4＋Tfh的比值(t值分别为6.34和3.16，P值均<0.05)，但并未明显改变IL-4＋Tfh细胞比例(P>0.05)。结论异常的Tfh细胞亚群分布与哮喘的发生相关，SP-A可能通过稳定Tfh细胞亚群的分布，从而缓解哮喘气道炎症反应。