简介：摘要目的观察骨髓间充质干细胞（BMSC）来源的外泌体上miR-183、视网膜脱氢酶11（RDH11）的表达，初步探讨两者靶向关系以及对视网膜色素上皮（RPE）细胞的影响。方法分离培养C57BL/6(C57）小鼠BMSC，鉴定BMSC来源的外泌体。将BMSC分为空白组、模拟空白对照组（mimic-NC组）、miR-183模拟组（miR-183-mimic组）。参照文献方法培养C57小鼠、视网膜变性10（rd10）小鼠RPE细胞。来自rd10小鼠的RPE细胞转染BMSC外泌体并共培养后分为对照组、外泌体组、mimic-NC-外泌体组（mimic-NC-exo组）、miR-183-mimic-外泌体组（miR-183-mimic-exo组）。采用实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测C57小鼠、rd10小鼠以及各组RPE细胞中miR-183、RDH11 mRNA和蛋白相对表达量。生物信息学网站及双荧光素酶报告分析miR-183与RDH11的靶向关系。细胞计数试剂盒8检测BMSC外泌体上miR-183对RPE细胞增生的影响；原位末端标记法检测RPE细胞凋亡情况。多组间比较采用单因素方差分析。结果与C57小鼠比较，rd10小鼠RPE中miR-183相对表达量下调，RDH11 mRNA相对表达量上调，差异均有统计学意义（t=5.230、8.548，P=0.006、0.001）。与空白组、mimic-NC组比较，miR-183-mimic组外泌体中miR-183 mRNA相对表达量显著上升（F=60.130，P<0.05）。共培养24 h时，外泌体进入RPE细胞。与mimic-NC-exo组比较，miR-183-mimic-exo组RPE细胞中miR-183 mRNA相对表达量显著升高（t=7.311，P=0.002），细胞增生能力增强（F=10.949，P＝0.012）、凋亡数量减少（t=4.571，P=0.002），差异均有统计学意义。生物信息学网站及双荧光素酶报告证实miR-183与RDH11具有靶向关系。与mimic-NC组比较，miR-183-mimic组外泌体中RDH11 mRNA及蛋白相对表达量均降低，差异有统计学意义（t=5.361、6.591，P=0.006、0.003）。共培养后，与对照组比较，外泌体组RPE细胞中RDH11 mRNA及蛋白相对表达量差异无统计学意义（t=0.169、1.134，P=0.874、0.320）；与mimic-NC-exo组比较，miR-183-mimic-exo组RPE细胞中RDH11 mRNA及蛋白相对表达量均降低，差异有统计学意义（t=5.554、5.546，P=0.005、0.005）。结论上调BMSC来源的外泌体miR-183通过靶向抑制RDH11的表达促进RPE细胞体外增生，减少细胞凋亡数量。

简介：摘要目的观察实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型大鼠CD4+T细胞中miR-142- 5p及叉头转录蛋白O亚族3（FOXO3）的表达，初步探讨两者靶向关系以及对EAU的影响。方法健康雄性Lewis大鼠10只随机分为模型组、对照组。模型组大鼠以过继免疫方式诱导EAU动物模型。免疫后20 d，取对照组、模型组大鼠眼球和引流淋巴结提取CD4+T细胞，并分为对照组、模型组、mimic-阴性对照（NC）组、miR-142-5p-mimic组、小干扰（si）-NC组、si-FOXO3组进行体外实验。miR-142-5p-mimic组、si-FOXO3组分别转染miR- 142-5p-mimic、si-FOXO3。健康雄性Lewis大鼠25只随机分为模型组、转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组，分别注射上述体外实验组细胞。免疫后4、8、12、16、20 d行裂隙灯显微镜检查并进行EAU评分；免疫后20 d，苏木精-伊红染色行组织病理学分级。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠CD4+T细胞和眼组织中miR-142-5p、FOXO3 mRNA相对表达量及细胞培养上清液中辅助性T细胞17（Th17）标志物白细胞介素（IL）-17、IL-22、维甲酸相关孤儿受体γ（RORγ）mRNA相对表达量。生物信息学网站及双荧光素酶预测miR-142-5p与FOXO3的靶向关系。组间比较采用单因素方差分析或t检验。结果模型组大鼠均出现不同程度EAU症状，随时间延长，其症状加重。与对照组比较，模型组大鼠CD4+T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量升高，FOXO3 mRNA相对表达量下降，差异均有统计学意义（t=7.374、10.423，P=0.002、0.001）。与mimic-NC组比较，miR-142-5p-mimic组大鼠CD4+T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量上升，差异有统计学意义（t=6.540，P=0.003 ）。与模型组、mimic-NC组、si-NC组比较，miR-142- 5p-mimic组、si-FOXO3组大鼠CD4+T细胞培养上清液中IL-17、IL-22、RORγ mRNA相对表达量均显著增加，差异有统计学意义（F=26.110、6.292、5.269、55.660、10.490、11.430，P<0.05）。与转染mimic-NC组比较，转染miR-142-5p-mimic组大鼠眼组织中miR-142-5p mRNA相对表达量显著上升，差异有统计学意义（t=6.690，P<0.05 ）；与转染si-NC组比较，转染si-FOXO3组大鼠眼组织中FOXO3 mRNA相对表达量显著下降，差异有统计学意义（t=17.751，P<0.05）。转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组大鼠免疫后随时间延长，EAU评分均呈上升趋势。转染miR-142-5p-mimic组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染mimic-NC组升高，差异有统计学意义（t=5.633、6.286，P<0.05）。转染si- FOXO3组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染si-NC组升高，差异有统计学意义（t=6.852、6.635，P<0.05）。FOXO3与miR-142-5p具有靶向关系。结论EAU大鼠CD4+T细胞中，miR-142- 5p表达上调，FOXO3表达下调；miR-142-5p靶向调控FOXO3表达促进Th17细胞相关炎性因子发展。