简介：摘要目的建立武乡病毒(wuxiang virus, WUXV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载WUXV的全部基因序列，使用MEGA-X完成多序列比对分析，选择针对S段基因高保守区设计的引物和探针，分别对检测反应的特异性、灵敏性和稳定性进行评价。结果建立的方法可以特异性地检测WUXV，并且与多种虫媒病毒无交叉反应；反应的灵敏度较高，最低检测下限为1 pfu/ml；同一样品重复检测循环阈值(Ct)的批间变异系数均小于1.00%；用本研究建立的TaqMan RT-PCR检测30批白蛉核酸样本，其中7批出现WUXV阳性扩增曲线。结论本研究建立了灵敏度高、特异性强、重复性好的TaqMan RT-PCR方法可用于WUXV的大批量样本筛查。

简介：摘要目的建立一种灵敏且特异的实时荧光定量RT-PCR方法，用于快速检测盖塔病毒(getah virus, GETV)。方法从GenBank数据库下载GETV基因序列，使用Clustal X完成序列比对，针对高保守区段设计特异性引物和探针；以GETV核酸为标准品建立标准曲线，分别对检测反应的灵敏度、特异性和稳定性进行评价。结果本方法能特异地检测GETV，与多种虫媒病毒无交叉反应；灵敏度为1.0×10 pfu/ml，批内和批间变异系数均小于1%。从湖南、河北、福建、重庆采集的196批蚊虫中检出1批GETV阳性。结论建立了灵敏度高，特异性强的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法用于GETV筛查。

简介：摘要目的明确山西省五个地区虫媒病毒种类及其分布特征，对采集的蚊虫样本进行病毒的分离与鉴定。方法于2020年7~9月采集当地的蚊虫标本，利用实时荧光定量PCR法检测蚊虫标本中的8种虫媒病毒，通过细胞培养对其进行病毒分离，使用分子生物学和生物信息学方法对病毒分离物进行鉴定和分析。结果在121批蚊虫样本中，检测到1批乙型脑炎病毒阳性，2批库蚊黄病毒阳性以及8批南定病毒阳性。分离到7株病毒分离物，编号为：SX-YJ-Cxp-4、SX-YJ-Ars-2、SX-YJ-Cxp-1、SX-LY-Cxp-10、SX-GP-Ars-5、SX-GP-Cxp-2、SX-GP-Cxp-4，鉴定均为南定病毒，对其中一株进行全基因组测序，结果显示：山西南定病毒分离株与云南南定病毒分离株属于同一进化分支。结论首次在山西省分离到南定病毒。

简介：摘要目的建立一种灵敏、特异的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，用于快速、准确地检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)。方法收集GenBank数据库中全部TIBOV基因序列，利用Clustal X 2.1软件进行比对，根据分析结果选择TIBOV VP4基因保守区域设计特异性引物、探针；以体外转录的RNA为标准品，建立检测TIBOV的TaqMan RT-PCR方法，绘制荧光定量标准曲线；对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价。结果引物与探针具有良好的特异性，对多种虫媒病毒无交叉反应。检测反应灵敏度为1.0×102拷贝/反应，在1.0×102～8拷贝/反应模板范围内具有良好的扩增曲线，同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%。对西藏自治区、云南省、湖南省和广东省采集的蚊虫样本进行筛查，结果均为阴性。TIBOV模拟样本检出率为100%。结论该方法灵敏度高、特异性强，可用于TIBOV的常规监测。