简介：摘要目的建立外周血白细胞、骨髓有核细胞和巨核细胞形态学分类计数的参考区间。方法选取2012年4月至2020年6月河北燕达陆道培医院参与筛查造血干细胞移植的健康供者4 221名，年龄36（3~72）岁，其中男2 520名，女1 701名。按照年龄分为4组：儿童组：≤14岁［334名，年龄11（3~14）岁］；青年组：>14岁且<45岁组［2 855名，年龄33（15~44）岁］；中年组：≥45岁且<60岁组［929名，年龄49（45~59）岁］；老年组≥60岁［103名，年龄62（60~72）岁］。此外，同一年龄组根据不同性别分为2组。儿童组又根据造血特点将其分为儿童1组［48名，年龄6（3~7）岁］和儿童2组［286名，年龄11（8~14）岁］。按照临床血细胞形态学常规检验方法，对外周血白细胞（分类计数100个白细胞）、骨髓有核细胞（计数200个有核细胞）及巨核细胞（细胞数/4.5 cm2）进行分类计数。比较不同年龄组和同年龄不同性别组间细胞计数结果的差异，对差异有统计学意义或临床意义的不同组分别建立形态学分类计数参考区间。结果儿童与成人组之间、成人组不同性别间细胞计数结果差异均有统计学意义（均P<0.05），因此对儿童组、成人不同性别组分别建立参考区间。儿童1组外周血分叶核细胞和淋巴细胞形态学计数参考区间分别为46.65（43.97~49.32）%和44.00（10.60~65.10）%，儿童2组分别为50.73（49.50~51.96）%和39.55（38.36~40.74）%，成人组分别为57.00（39.00~75.23）%和33.00（17.00~52.00）%。儿童1组骨髓中性分叶核粒细胞、晚幼红细胞、成熟淋巴细胞形态学计数参考区间分别为11.54（10.68~12.41）%、14.20（13.19~15.21）%和23.99（22.06~25.92）%，儿童2组分别为12.50（7.00~21.50）%、15.00（9.50~25.50）%和21.02（20.24~21.81）%，成人男性组分别为13.50（7.50~21.00）%、16.50（10.50~26.00）%和15.50（7.50~26.00）%，成人女性组分别为14.50（8.00~24.50）%、14.50（9.00~23.00）%和17.50（8.50~29.00）%。儿童1组和2组粒红比参考区间均为1.86∶1（1.14∶1~3.23∶1），成人男性组为1.96∶1（1.12∶1~3.19∶1），成人女性组为2.22∶1（1.30∶1~3.69∶1）。儿童组骨髓颗粒型巨核细胞和产板型巨核细胞参考区间分别为138（25~567）、86（13~328）个/4.5 cm2，成人组分别为92（13~338）、38（3~162）个/4.5 cm2。结论建立了外周血白细胞、骨髓有核细胞和巨核细胞的形态学分类计数的参考区间，有助于提高临床血细胞形态学检验在疾病筛查、诊断和监测中的应用水平。

简介：摘要目的观察嵌合抗原受体（CAR）-T细胞免疫治疗桥接异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）患者的免疫重建表现。方法回顾性分析2018年8月至2021年12月期间在北京陆道培医院接受CAR-T细胞桥接allo-HSCT治疗的所有急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者临床病历资料，年龄14（7，30）岁，其中男39例，女22例。CAR-T细胞免疫治疗 32例，非CAR-T细胞免疫治疗 29例。随访时间561（235，784）d。用多色流式检测患者移植前及移植后1、2、3、6、8、10、12个月外周血各淋巴细胞亚群即总淋巴细胞、T淋巴细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞、Treg细胞计数，以评估患者在移植后免疫重建表现。结果移植前血清球蛋白：CAR-T组IgA水平0.18（0.06，0.49）g/L低于非CAR-T组1.03（0.63，1.56）g/L患者（U=103.5，P<0.001）。CAR-T组IgG水平5.54（4.04，7.09）g/L低于非CAR-T组6.78（5.27，9.26）g/L（U=1 298.5，P=0.017），CAR-T组IgM水平0.18（0.05，0.30）g/L低于非CAR-T组0.40（0.26，0.71）g/L（U=166.0，P<0.001）。CAR-T组移植前外周血免疫细胞总淋巴细胞计数833.00（335.00，1 727.50）个/μl，低于非CAR-T组患者1 052.00（545.75，1 812.50）个/μl（U=404.0，P<0.001）。移植前CAR-T组T淋巴细胞绝对计数686.00（233.00，1 307.00）个/μl，低于非CAR-T组患者860.00（391.00，1 419.75）个/μl（U=406.0，P<0.001）。CAR-T组辅助性T淋巴细胞绝对计数146.00（40.50，327.50）个/μl，低于非CAR-T组患者162.50（66.00，384.75）个/μl，（U=494.0，P=0.002）。CAR-T组细胞毒性T淋巴细胞绝对计数343.00（56.50，924.00）个/μl，低于非CAR-T组患者478.00（143.50，992.25）个/μl（U=483.5，P=0.001）。CAR-T组B淋巴细胞绝对计数 22.00（6.00，186.00）个/μl，低于非CAR-T组患者33.00（8.00，220.00）个/μl（U=498.0，P=0.002）。而2组患者移植后监测时间点上述各免疫细胞亚群细胞绝对计数差异均无统计学意义（P>0.05）。对比2组患者临床特征，CAR-T组患者移植前病史981.00（368.50，1 514.75）d比非CAR-T组323.00（167.50，450.50）d长（U=263.0，P=0.004），CAR-T组患者预处理方案中兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白（ATG）用量5.00（5.00，7.50）mg/kg比非CAR-T组患者7.00（5.00，7.50）mg/kg低（U=288.5，P=0.018），CAR-T组移植物CD34+回输剂量5.91（4.23，6.02）×106/kg比非CAR-T组患者高 4.51（4.00，5.93）×106/kg（U=291.0，P=0.012），CAR-T组移植后环孢素应用时间167.00（119.25，299.50）d，比非CAR-T组患者197.00（102.50，450.50）d短（U=421.0，P=0.001）。结论对于移植前免疫功能偏低的CAR-T患者，可通过降低预处理ATG剂量、增加移植物CD34+输注剂量、移植后尽早停用环孢素等方式，使其与非CAR-T患者达到相似的免疫重建状态。

简介：摘要嵌合抗原受体（CAR）-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域最瞩目的成就之一，流式细胞术（FCM）在CAR-T细胞的设计构建、患者入组、CAR-T细胞产品的性能检测、治疗后疗效评价、免疫功能评价、复发机制研究与后续治疗方案的选择等各个环节都起到重要的作用。为了进一步推广与规范FCM在CAR-T细胞免疫治疗相关实验室检测中的应用，《中华检验医学杂志》组织了“流式细胞分析在CAR-T细胞免疫治疗中的应用和研究进展”专题报道，多篇文章分别涵盖FCM在CAR-T细胞免疫治疗中应用的多个方面，包括专家共识、继续教育、专家述评、微小残留病检测、免疫功能和细胞因子检测等，以期促进FCM在CAR-T细胞免疫治疗中应用的规范化，为临床应用提供更大的帮助。

简介：摘要目的探讨多色流式细胞术（MFC）监测微小残留病变（MRD）在 CD19嵌合抗原受体T细胞（CD19-CAR-T 细胞）治疗后桥接异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗难治、复发急性B淋巴细胞白血病（r/r B-ALL）患者过程中的意义和价值。方法收集2019年1月至7月河北燕达陆道培医院收治的r/r B-ALL患者37例，年龄15（6，19）岁，其中男24例，女13例，均为经CD19-CAR-T细胞免疫治疗桥接allo-HSCT治疗的患者。采用多色流式细胞技术以胞浆CD79a抗体设B细胞门监测患者在CART治疗前第0天、治疗后第15天、第28天及移植后骨髓、脑脊液样本、组织样本的MRD值评估肿瘤细胞残存以及肿瘤累及位置，监测CD19阳性B细胞在移植前恢复情况及CD19阳性B细胞恢复距离CAR-T细胞回输天数评估CAR-T细胞实际杀伤效果，同时进行患者各时间点外周血CAR-T细胞计数等。采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验分析单因素累积生存差异。结果（1）37例患者中8例死亡，29例存活。5例患者移植后复发，其中复发患者4例死亡，1例存活。（2）死亡组患者在CAR-T细胞免疫治疗后到桥接移植前MFC-MRD阴性缓解率为5/8，低于存活组28/29（χ2=7.540，P=0.006）；回输第15天阴性缓解率为3/8，低于存活组24/29（χ2=6.512，P=0.011）；回输第28天阴性缓解率为3/8，低于存活组26/29（χ2=10.065，P=0.002）。而死亡组伴髓外MFC-MRD阳性肿瘤浸润率为（7/8）高于存活组（14/29）（χ2=3.931，P=0.047）。CAR-T细胞免疫治疗后，死亡组CD19阳性细胞恢复时间即CAR-T细胞可对CD19阳性细胞杀伤时间42.00（30.00，49.00）d短于生存组55.00（41.50，73.50）d（Z=0.022，P=0.020）。结论利用多色流式细胞术检测B-ALL患者微小残留病变发现，在CD19-CAR-T细胞免疫治疗后到桥接allo-HSCT前、回输第15天、回输第28天等时间点，阳性结果均提示预后不良。这一结果为临床进行对症治疗提供一定指导意义。