简介:摘要目的探讨紫红獐牙菜酮提取物抑制脊髓损伤后炎性反应及凋亡机制。方法PC-12细胞购自美国典型培养物保藏中心。采用脂多糖(LPS)处理PC-12细胞建立脊髓损伤细胞模型(LPS组),未经处理细胞为NC组;不同浓度紫红獐牙菜酮提取物处理LPS组细胞;将抗微小核糖核酸(miR)-NC和抗miR-136-5p转染至LPS细胞(标记为抗miR-NC+LPS组、抗miR-136-5p+LPS组);将miR-NC、miR-136-5p转染至60 μg/ml紫红獐牙菜酮提取物处理的LPS组细胞(标记为60 μg/ml紫红獐牙菜酮提取物+miR-NC+LPS组、60 μg/ml紫红獐牙菜酮提取物+miR-136-5p+LPS组)。溴化-3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测剪切的半胱天冬酶-3(cleaved Caspase-3)、磷酸化p65(p-p65)及磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达;酶联免疫吸附法法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-136-5p表达。两组间比较行t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK检验。结果15 mg/ml紫红獐牙菜酮提取物+LPS组、30 mg/ml紫红獐牙菜酮提取物+LPS组及60 mg/ml紫红獐牙菜酮提取物+LPS组细胞活性显著高于LPS组(0.67±0.06、0.96±0.09、1.05±0.10比0.54±0.05),凋亡率[(16.13±1.25)%、(10.23±0.91)%、(6.89±0.63)%比(19.43±1.61)%]、cleaved Caspase-3蛋白表达水平(0.71±0.06、0.56±0.05、0.43±0.04比0.87±0.07)、IL-1β[(131.02±11.63)、(95.36±9.63)、(72.69±6.94) pg/ml比(169.32±13.52) pg/ml]、IL-6[(203.81±18.51)、(151.87±13.21)、(115.93±10.06) pg/ml比(243.61±22.25) pg/ml]、TNF-α[(1.82±0.04)、(1.43±0.12)、(1.14±0.09) pg/ml比(2.13±0.19) pg/ml]及miR-136-5p(2.21±0.17、1.61±0.14、1.23±0.11比2.67±0.24)表达显著低于LPS组,差异有统计学意义(F=83.393、288.901、125.546、173.231、131.432、116.412、167.637,P<0.05)。抗miR-136-5p+LPS组细胞活性显著高于抗miR-NC+LPS组(1.02±0.10比0.56±0.03),凋亡率[(6.35±0.59)%比(18.46±1.57)%]、cleaved Caspase-3(0.43±0.04比0.88±0.07)、IL-1β[(65.39±6.11) pg/ml比(170.02±14.15) pg/ml]、IL-6[(98.61±9.24) pg/ml比(241.02±19.47) pg/ml]、TNF-α[(1.01±0.09) pg/ml比(2.18±0.17) pg/ml]及miR-136-5p(0.46±0.04比1.00±0.11)表达显著低于抗miR-NC+LPS组,差异有统计学意义(t=13.841、12.504、21.661、16.745、20.366、19.824、18.248,P<0.05)。60 μg/ml紫红獐牙菜酮提取物+miR-136-5p+LPS组细胞p-p65和p-IκBα表达显著高于60 μg/ml紫红獐牙菜酮提取物+LPS组和60 μg/ml紫红獐牙菜酮提取物+miR-NC+LPS组(p-p65分别0.85±0.09比0.40±0.04、0.39±0.08,p-IκBα分别0.73±0.08比0.33±0.03、0.32±0.08),差异有统计学意义(F=106.301、103.892,P<0.05)。结论紫红獐牙菜酮提取物可通过下调miR-136-5p表达抑制脊髓损伤后炎性反应及细胞凋亡。