简介：摘要肝细胞癌（以下简称肝癌）是临床上最常见的肝脏原发性恶性肿瘤，其恶性程度高、易复发转移，患者预后极差。近年来，血小板在促进肝癌恶性进展中的作用受到广泛关注：一方面，血小板通过肿瘤微环境直接促进肝癌细胞增殖和侵袭；另一方面，血小板通过协助肿瘤细胞躲避免疫监视等途径促进肝癌细胞发生远处转移。此外，血小板特异性分泌的生长因子及促血管生成因子也直接或间接参与肝癌细胞增殖、侵袭以及肿瘤周围血管新生。另外，在大多数肝癌患者合并肝硬化的背景下，由于门静脉高压、脾功能亢进导致血小板减少是否会促进肝癌恶性进展仍无定论。基于血小板在肝癌中的作用，血小板及其相关评分在肝癌诊断和预后评估中的价值也成为研究的热点。笔者详细阐述血小板在肝癌恶性进展中的作用机制，以及血小板作为肝癌诊断和预后评估工具的最新研究进展，这对优化肝癌治疗方案和探讨新的肝癌治疗策略具有重要意义。

简介：摘要目的探讨NEMO结合域肽（NBDP）对急性呼吸窘迫综合征（ARDS）小鼠肺组织炎症和细胞凋亡的影响及其机制。方法采用随机数字表法将36只雄性BALB/c小鼠分为生理盐水（NS）对照组、ARDS模型组、NBDP阴性对照组及6、12、18 μg NBDP预处理组，每组6只。雾化吸入脂多糖（LPS）50 μL制备ARDS小鼠模型；NS对照组吸入等量NS。在雾化吸入LPS前30 min，NBDP阴性对照组吸入非功能性NBDP类似物；NBDP预处理组分别吸入6、12、18 μg NBDP 50 μL。吸入LPS 6 h后处死小鼠取肺组织，观察肺组织病理损伤及水肿程度；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织中核转录因子-κB（NF-κB）信号通路蛋白〔NF-κB抑制蛋白（IκB）激酶α/β（IKKα/β）、IκBα和NF-κB p65〕的磷酸化（p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65）水平及凋亡蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达。收集支气管肺泡灌洗液（BALF），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测髓过氧化物酶（MPO）、白细胞介素（IL-1β、IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症指标的水平。结果光镜下显示，ARDS模型组存在明显水肿、出血，肺泡结构破坏，透明膜形成等，符合ARDS肺组织病理学特征，说明ARDS模型制备成功。ELISA显示，ARDS模型组BALF中MPO、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均明显高于NS对照组；NBDP阴性对照组上述炎症指标与ARDS模型组差异无统计学意义；NBDP预处理组MPO、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均明显低于ARDS模型组，并呈一定剂量依赖性，以18 μg NBDP作用更加显著，与ARDS模型组比较差异有统计学意义〔MPO（ng/L）：393.32±19.35比985.87±101.50，IL-1β（ng/L）：43.05±5.11比97.68±10.88，IL-8（ng/L）：84.64±2.32比204.00±17.37，TNF-α（ng/L）：229.13±17.03比546.73±62.72，均P<0.05〕。Western blotting显示，ARDS模型组p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65及caspase-3蛋白表达均较NS对照组明显升高；NBDP阴性对照组NF-κB信号通路蛋白及凋亡蛋白表达与ARDS模型组差异无统计学意义；NBDP预处理组p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65和caspase-3蛋白表达均较ARDS模型组明显降低，且呈一定剂量依赖性，以18 μg NBDP作用更加显著，与ARDS模型组比较差异有统计学意义〔p-IKKα/β蛋白（p-IKKα/β/β-actin）：0.15±0.02比0.42±0.04，p-IκBα蛋白（p-IκBα/β-actin）：0.10±0.01比0.93±0.30，p-p65蛋白（p-p65/β-actin）：0.22±0.05比1.37±0.21，均P<0.05〕。结论NBDP可剂量依赖性抑制ARDS肺组织炎症反应和细胞凋亡，其机制与干扰NF-κB信号通路转导有关。

简介：摘要目的探讨黄连素对脂多糖（LPS）刺激下大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）表达及分泌促凝和纤溶抑制相关因子的影响。方法体外培养大鼠AECⅡ细胞株RLE-6TN，取对数生长期细胞，用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测黄连素对细胞的毒性作用，根据半数抑制浓度（IC50）确定药物浓度范围。将对数生长期细胞分为5组：空白对照组使用DMEM培养基常规培养；LPS组在培养基中加入5 mg/L的LPS刺激细胞；黄连素预处理组先分别加入20、50、80 μmol/L黄连素预处理1 h后，再加入5 mg/L的LPS共培养。LPS刺激24 h后收集细胞，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）及实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞组织因子（TF）、组织因子途径抑制物（TFPI）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的蛋白和mRNA表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中活化蛋白C（APC）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）、凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）及抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）的含量。结果根据抑制率曲线计算得出黄连素对RLE-6TN细胞的IC50为81.16 μmol/L，故选择20、50、80 μmol/L作为黄连素的干预浓度。与空白对照组相比，LPS刺激24 h后RLE-6TN细胞表达及分泌促凝和纤溶抑制相关因子异常，表现为TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达水平均明显升高，TFPI的蛋白及mRNA表达水平明显降低；同时细胞上清液中APC、ATⅢ含量均明显降低，而PⅢP、TAT含量均明显升高。给予黄连素预处理后，LPS刺激诱导的RLE-6TN细胞表达及分泌促凝和纤溶抑制相关因子异常情况得到纠正，并呈现一定的剂量依赖性，以80 μmol/L时作用更为显著；与LPS组相比，黄连素80 μmol/L预处理组细胞中TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达水平均明显降低〔TF蛋白（TF/GAPDH）：0.45±0.02比0.55±0.03，TF mRNA（2-ΔΔCt）：0.39±0.08比1.48±0.11，PAI-1蛋白（PAI-1/GAPDH）：0.37±0.02比0.64±0.04，PAI-1 mRNA（2-ΔΔCt）：1.14±0.29比4.18±0.44，均P<0.01〕，TFPI蛋白及mRNA表达水平明显升高〔TFPI蛋白（TFPI/GAPDH）：0.53±0.02比0.45±0.02，TFPI mRNA（2-ΔΔCt）：0.94±0.08比0.40±0.05，均P<0.01〕；同时细胞上清液中APC、ATⅢ含量明显升高〔APC（μg/L）：1 358.5±26.0比994.2±23.1，ATⅢ（μg/L）：118.0±7.4比84.4±2.7，均P<0.01〕，而PⅢP和TAT含量则均明显降低〔PⅢP（μg/L）：11.2±0.4比18.6±0.9，TAT（ng/L）：222.1±2.8比287.6±7.0，均P<0.01〕。结论黄连素可以剂量依赖性抑制LPS刺激下大鼠AECⅡ细胞促凝及纤溶抑制相关因子表达和分泌，促进抗凝因子表达和分泌，有望成为有效防治急性呼吸窘迫综合征（ARDS）肺泡过度促凝和纤溶抑制的新靶点。

简介：摘要目的明确穿心莲内酯（AD）对脂多糖（LPS）刺激下大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）表达促凝和纤溶抑制相关因子的影响。方法将对数生长期的大鼠AECⅡ细胞RLE-6TN分为正常对照（NC）组、LPS组及6.25、12.5、25 mg/L AD组（AD 6.25组、AD 12.5组、AD 25组）5组。NC组用RPMI 1640常规培养基培养；LPS组在RPMI 1640常规培养基中加入5 mg/L的LPS进行刺激；不同剂量AD组细胞分别用6.25、12.5、25 mg/L的AD处理1 h后给予LPS刺激培养。于LPS刺激细胞24 h后收集细胞及细胞培养上清液，用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）分别检测细胞中组织因子（TF）、组织因子途径抑制剂（TFPI）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的蛋白及mRNA表达；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）、凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）、活化蛋白C（APC）水平。结果与NC组相比，LPS组TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达显著升高，TFPI蛋白及mRNA表达显著降低；同时细胞上清液中PⅢP、TAT水平明显升高，AT-Ⅲ、APC水平明显降低。与LPS组相比，AD 6.25组、AD 12.5组、AD 25组TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达均明显降低〔TF/GAPDH：0.86±0.08、0.45±0.04、0.44±0.04比1.32±0.10，TF mRNA（2-ΔΔCt）：2.59±0.25、2.27±0.05、1.95±0.04比4.60±0.26，PAI-1/GAPDH：2.11±0.07、1.45±0.04、0.86±0.09比2.56±0.09，PAI-1 mRNA（2-ΔΔCt）：3.50±0.22、2.23±0.29、1.84±0.09比6.60±0.27，均P<0.05〕，TFPI蛋白及mRNA表达明显升高〔TFPI/GAPDH：0.78±0.05、0.81±0.03、0.84±0.07比0.36±0.02，TFPI mRNA（2-ΔΔCt）：0.46±0.09、0.69±0.07、0.91±0.08比0.44±0.06，均P<0.05〕，细胞上清液中PⅢP、TAT水平明显降低，AT-Ⅲ、APC水平明显增加〔PⅢP（μg/L）：13.59±0.23、12.66±0.23、10.59±0.30比15.82±0.29，TAT（ng/L）：211.57±6.41、205.69±4.04、200.56±9.85比288.67±9.84，AT-Ⅲ（μg/L）：102.95±3.86、123.92±2.63、128.67±1.67比92.93±3.36，APC（μg/L）：1 188.95±14.99、1 366.12±39.93、1 451.15±29.69比1 145.55±21.07，均P<0.05〕；随着AD剂量的增加，上述促进及抑制作用越加明显，AD 25组TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达降低、TFPI mRNA表达升高、上清液中PⅢP水平降低和AT-Ⅲ、APC水平增加与AD 6.25组比较差异具有统计学意义，且PAI-1蛋白表达降低及上清液中PⅢP水平降低与AD 12.5组比较差异也具有统计学意义。结论AD在6.25～25 mg/L的剂量范围内，能剂量依赖性地抑制LPS刺激下AECⅡ细胞RLE-6TN表达及分泌促凝和纤溶抑制相关因子，促进抗凝因子的分泌，以25 mg/L作用最明显。