简介：摘要目的观察前列腺癌微环境中癌相关成纤维细胞(CAFs)对细胞缝隙连接通讯(GJIC)的影响。方法取前列腺癌组织分离培养及鉴定CAFs，分别将(0、0.25、0.50、0.75、1.00 g/L)浓度的CAFs培养液与处于对数生长期的前列腺癌PC-3细胞(购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)共同培养，采用荧光漂白恢复技术检测各组前列腺癌PC-3细胞缝隙连接(GJ)功能，蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞间隙连接蛋白43(Cx43)蛋白的表达。组间比较采用方差分析。结果成功分离培养CAFs，前列腺癌PC-3细胞与不同浓度CAFs(0.00、0.25、0.50、0.75、1.00 g/L)共培养后，细胞内荧光恢复程度逐渐减弱[(49.40±5.42)%、(45.36±3.23)%、(36.57±3.95)%、(29.18±5.51)%、(21.81±4.58)%，F＝18.067，P<0.05]，细胞GJIC水平逐渐减弱，呈明显的剂量-效应依赖关系，差异有统计学意义(t＝1.109、3.313、4.531、6.734，P<0.05)。同时，各组CAFs中的Cx43蛋白的表达水平分别为0.723±0.065、0.641±0.084、0.425±0.078、0.314±0.067、0.267±0.059。随着共培养CAFs浓度的增加，细胞内Cx43蛋白表达水平反而逐渐降低，差异有统计学意义(t＝1.337、5.084、7.589、8.997，P<0.05)。结论CAFs可下调前列腺癌PC-3细胞Cx43蛋白的表达水平，抑制前列腺癌PC3细胞的细胞间缝隙连接功能。

简介：摘要目的分析基于功能残气量（FRC）指导最佳呼气末正压（PEEP）在急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者肺复张过程中的应用，探讨FRC与跨肺压的相关性以及二者对预后的预测价值。方法选择2018年3月至2019年5月锦州医科大学附属第一医院重症医学科收治的78例ARDS机械通气患者，并按随机数字表法分为试验组（41例）和对照组（37例），所有患者在充分镇静后均予渐进式增加PEEP进行肺复张，其中试验组通过监测FRC设置最佳PEEP，对照组则通过最大氧合法设置最佳PEEP。比较两组肺复张前及肺复张后30 min和2 h动态顺应性（Cdyn）、氧合指数（PaO2/FiO2）、机械功（MP）的差异；采用Pearson法分析FRC与跨肺压的相关性；采用受试者工作特征曲线（ROC）评估FRC和跨肺压对ARDS患者28 d病死率的预测价值。结果试验组肺复张后最佳PEEP为（16.24±1.57）cmH2O（1 cmH2O＝0.098 kPa），对照组最佳PEEP为（14.11±1.15）cmH2O，两组比较差异有统计学意义（t＝5.678，P＝0.000）。Pearson相关分析显示，ARDS患者FRC与跨肺压存在显著相关性（r＝0.759，P＝0.000）。试验组肺复张后30 min和2 h的Cdyn、PaO2/FiO2均明显高于对照组〔Cdyn（mL/cmH2O）：61.16±3.55比58.54±5.25，58.59±2.82比56.86±3.40；PaO2/FiO2（mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa）：245.27±14.86比239.00±5.34，192.25±5.11比188.86±5.07〕，MP均明显低于对照组（J/min：16.32±1.11比17.05±1.22，15.22±1.25比17.03±1.50），差异均有统计学意义（均P<0.05）。ROC曲线分析显示，FRC和跨肺压对ARDS患者28 d病死率均有预测价值，其ROC曲线下面积（AUC）分别为0.868、0.828（均P<0.01）。结论ARDS患者在肺复张过程中监测FRC可指导最佳PEEP；FRC与跨肺压具有显著相关性，并且二者对ARDS患者28 d病死率均具有预测价值。

简介：摘要目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源外泌体微小RNA(miR)-20a对前列腺癌细胞间通讯连接(GJIC)、侵袭和转移能力的影响及其机制。方法构建CAFs来源近红外荧光蛋白(IRFPs)标记外泌体，以不同浓度(0、10、100、200 mg/L)与PC-3细胞共培养。蛋白质印迹法检测PC-3细胞中CX43蛋白的相对表达水平；荧光漂白恢复技术测定PC-3细胞间缝隙连接功能；Transwell小室侵袭和迁移实验检测PC-3侵袭能力。构建高表达和低表达miR-20a的CAFs，分别与PC-3细胞共培养，检测缝隙链接蛋白43(Connexin 43, CX43)表达、细胞缝隙连接功能、细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证PC-3细胞中miR-20a与CX43基因是否直接结合。用Student’t检验分析组间差异。结果PC-3细胞的CX43表达水平及细胞缝隙连接功能均随外泌体浓度增加而降低(0.715±0.058、0.544±0.039、0.313±0.028和0.196±0.020，F＝19.031，P<0.05)，差异有统计学意义。Transwell小室检测结果表明，CAFs来源外泌体促进PC-3细胞迁移[各组每视野穿膜细胞数分别为(176.0±9.2)、(485.0±12.8)、(159.5±9.7)和(198.0±10.5)个，F＝11.475，P<0.01]和侵袭[各组每视野穿膜细胞数分别为(150.0±8.4)、(443.0±21.7)、(182.0±11.2)和(153.5.0±10.1)个，F＝16.306，P<0.01]，差异有统计学意义；增强细胞缝隙连接能抑制此效应(F＝14.052，P<0.01；F＝14.804，P<0.01)。高表达miR-20a组的PC-3细胞的CX43表达水平(0.126±0.062比0.834±0.103，t＝9.430，P<0.05)、荧光恢复率[(25.02±7.85)%比(46.65±6.98)%，t＝5.782，P<0.05]均显著低于低表达miR-20a组，但细胞的迁移[(502.5±18.6)个比(128.5.0±9.4)个，t＝9.120，P<0.05]和侵袭能力(458.0±16.8比194.5±9.2，t＝6.286，P<0.05)均显著高于表达miR-20a组，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告实验结果显示，野生型CX43的PC-3细胞中，转染miR-20a的细胞荧光活性显著低于miR-NC组(0.46±0.08比0.99±0.14，t＝10.208，P<0.05)，差异有统计学意义；而突变型CX43的PC-3细胞中，miR-20a组与miR-NC组细胞荧光活性差异无统计学意义(0.94±0.06比0.97±0.08，t＝0.142，P>0.05)。结论CAFs来源外泌体miR-20a通过直接作用CX43基因，下调PC-3细胞CX43的表达，从而显著降低细胞间通讯连接功能，增强前列腺癌细胞的增殖、侵袭和转移能力。