简介：摘要目的对比持续负压伤口疗法(NPWT)与常规打包加压包扎在难固定部位创面中厚皮移植术中的临床效果。方法2017年9月—2019年8月，空军军医大学第一附属医院收治符合入选标准的难固定部位需行中厚皮移植术患者129例，纳入本回顾性队列研究。根据中厚皮移植术后难固定部位是否采用了NPWT将患者分为NPWT组67例[男41例、女26例，年龄(32±6)岁]和常规加压包扎组62例[男37例、女25例，年龄(30±5)岁]。2组患者难固定部位清创移植中厚皮后，常规加压包扎组患者创面采用干纱布填塞后，绷带常规加压包扎；NPWT组患者创面干纱布填塞后放置引流泡沫或引流管，半透膜粘贴密闭，行持续负压吸引，压力范围-16.6～-9.9 kPa。NPWT组于术后5 d、常规加压包扎组于术后7 d首次换药时打开包扎，观察并计算皮片成活面积和比例、血肿面积和比例、皮片常见并发症发生率；另统计术后换药次数和住院天数。对数据行两独立样本t检验、Cochran & Cox近似t检验、χ2检验、Fisher确切概率法检验。结果(1)首次换药时，NPWT组患者的皮片成活面积为(420±94)cm2，明显大于常规加压包扎组的(322±97)cm2(t′＝12.33，P<0.01)；NPWT组患者的皮片成活面积比例为(97.0±2.3)%，明显高于常规加压包扎组的(74.4±4.8)%(t′＝50.11，P<0.01)。(2)首次换药时，常规加压包扎组患者的皮片血肿面积为(31.7±10.1)cm2，明显大于NPWT组的(3.2±0.7)cm2(t′＝23.04，P<0.01)；常规加压包扎组患者的皮片血肿面积比例为(7.3±2.3)%，明显高于NPWT组的(0.7±0.3)%(t′＝76.21，P<0.01)。(3)首次换药时，NPWT组患者中皮片移动1例、无皮片边缘撕裂病例，皮片并发症发生率为1.5%(1/67)；常规加压包扎组患者中皮片移动4例、皮片边缘撕裂2例，皮片并发症发生率为9.7%(6/62)。NPWT组患者皮片并发症发生率明显低于常规加压包扎组(P<0.05)。(4)NPWT组患者术后换药次数明显少于常规加压包扎组(t＝7.93，P<0.01)，术后住院天数明显少于常规加压包扎组(t＝11.71，P<0.01)。结论在难固定部位中厚皮移植术中，持续NPWT能有效促进创面愈合，提高皮片成活率，减少植皮术后并发症的发生，并缩短住院时间。

简介：摘要目的探讨人脂肪间充质干细胞（ADSC）外泌体对小鼠RAW264.7细胞介导的炎症反应和小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法采用实验研究方法。取2020年6—9月于空军军医大学第一附属医院行腹部手术的3例女性患者（10~25岁）废弃脂肪组织，采用Ⅰ型胶原酶消化法提取ADSC，采用流式细胞术进行鉴定。使用差速超高速离心法提取人ADSC外泌体，采用透射电子显微镜观察形态，纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径，蛋白质印迹法检测CD9、CD63、肿瘤易感基因101（TSG101）和β肌动蛋白的蛋白表达。将人ADSC外泌体与RAW264.7细胞共培养12 h后，观察RAW264.7细胞对人ADSC外泌体的吞噬情况。将RAW264.7细胞分为采用磷酸盐缓冲液（PBS）刺激适宜时间的PBS组及内毒素/脂多糖（LPS）刺激相应时间点的LPS刺激2 h组、LPS刺激4 h组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组，每组3孔，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法检测白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-6及IL-10的mRNA表达。将RAW264.7细胞分为PBS组、单纯LPS组、LPS+ADSC外泌体组，每组3孔，按前一实验筛选的时间进行相应刺激，采用实时荧光定量RT-PCR法检测IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、转化生长因子β（TGF-β）及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Arg1）的蛋白表达。取24只8周龄雄性BALB/c小鼠，采用随机数字表法分为ADSC外泌体组和PBS组，每组12只，在背部造成1 cm×1 cm的全层皮肤缺损创面。伤后即刻，2组小鼠创面分别进行相应的处理。伤后1 d，采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-1β和TNF-α的浓度，采用实时荧光定量RT-PCR法检测创面组织IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA表达。伤后3、6、9、12、15 d观察创面愈合情况，并计算创面未愈合率；伤后15 d，行苏木精-伊红染色和Masson染色，分别检测创面皮肤附件缺损长度及胶原容积分数（CVF）；免疫组织化学法检测创面CD31表达及血管新生情况；免疫荧光法检测创面Ki67阳性细胞比、iNOS和Arg1双阳性细胞比、iNOS阳性细胞和Arg1阳性细胞的比值及两者的荧光强度。动物实验中样本数均为6。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验。结果培养12 h，细胞呈典型梭形结构，经流式细胞术鉴定为ADSC。外泌体呈囊泡状，粒径29~178 nm，表达CD9、CD63及TSG101而不表达β肌动蛋白。共培养12 h后，人ADSC外泌体成功被RAW264.7细胞吞入细胞质。LPS刺激2 h组、LPS刺激4 h组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达均明显高于PBS组（t值分别为39.10、14.55、28.80、4.74，48.80、22.97、13.25、36.34，23.12、18.71、29.19、41.08，11.68、18.06、8.54、43.45，62.31、22.52、21.51、37.13，P<0.01），选择各种炎症因子表达均高表达的刺激12 h作为后续实验时间点。刺激12 h后，单纯LPS组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达均明显高于PBS组（t值分别为44.20、51.26、14.71、8.54，P<0.01）；LPS+ADSC外泌体组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达均明显低于单纯LPS组（t值分别为22.89、25.51、8.03，P<0.01），而IL-10、TGF-β和VEGF mRNA表达均明显高于单纯LPS组（t值分别9.89、13.12、7.14，P<0.01）。刺激12 h后，单纯LPS组RAW264.7细胞iNOS的蛋白表达明显高于PBS组和LPS+ADSC外泌体组（t值分别为11.20、5.06，P<0.05或P<0.01），Arg1蛋白表达明显低于LPS+ADSC外泌体组（t=15.01，P<0.01）。伤后1 d，ADSC外泌体组小鼠血清中IL-1β和TNF-α浓度及创面组织中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达均明显低于PBS组（t值分别为15.44、12.24，9.24、7.12、10.62，P<0.01）。伤后3、6、9、12、15 d，ADSC外泌体组小鼠创面未愈合率分别为（73.2±4.1）%、（53.8±3.8）%、（42.1±5.1）%、（24.1±2.8）%、0，均分别明显低于PBS组的（82.5±3.8）%、（71.2±4.6）%、（52.9±4.1）%、（41.5±3.6）%、（14.8±2.5）%（t值分别为4.77、8.93、5.54、7.63、7.59，P<0.01）。伤后15 d，PBS组小鼠创面皮肤附件缺损长度明显长于ADSC外泌体组（t=9.50，P<0.01），CVF明显低于ADSC外泌体组（t=9.15，P<0.01）。伤后15 d，ADSC外泌体组小鼠创面组织CD31阳性表达和新生血管数（t=12.99，P<0.01）明显多于PBS组，Ki67阳性细胞比明显高于PBS组（t=7.52，P<0.01）。伤后15 d，PBS组小鼠创面组织iNOS和Arg1双阳性细胞比为（12.33±1.97）%，明显高于ADSC外泌体组的（1.78±0.29）%（t=13.04，P<0.01），且iNOS荧光强度明显强于ADSC外泌体组，Arg1荧光强度明显强于ADSC外泌体组，iNOS阳性细胞和Arg1阳性细胞的比值明显高于ADSC外泌体组（t=35.16，P<0.01）。结论人ADSC外泌体可以减轻小鼠RAW264.7细胞的炎症反应，在小鼠全层皮肤缺损创面中减少巨噬细胞浸润和促炎性细胞因子分泌，增加抗炎细胞因子分泌，促进新生血管形成，增强创面细胞增殖，加速创面愈合。

简介：摘要目的研究压力对增生性瘢痕(HTS)形成及转化生长因子β1(TGF-β1)/Sma和Mad同源物蛋白(Smad)信号通路的影响。方法健康成年新西兰大白兔12只(空军军医大学动物实验中心提供)，用直径为1 cm的圆形打孔器在每侧兔耳腹侧标记出4个圆形创面，用手术小圆刀沿标记线切开皮肤全层至兔耳软骨膜，分离软骨膜及全层皮肤，刮除创面残留组织，暴露创面，术后第28天观察瘢痕形成情况。兔耳HTS模型构建成功后进行分组，采用自身对照研究，兔左耳设为实验组，右耳为对照组，用抽签法于每侧兔耳选取2个HTS模型作为研究对象，每组24个。实验组：使用4-0尼龙丝线将直径为1.5 cm的圆形钕铁硼磁铁垫上压力垫片缝合至兔耳软骨上，使用Flexiforce压力传感器测量压力大小并每周进行调整，将压力控制在20~25 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa),每天持续时间≥23 h；对照组：不做处理。在施加压力后第40天观察兔耳瘢痕大体形态，并切取组织行HE、Masson染色进行组织学研究，计算瘢痕增生指数(SEI)、成纤维细胞数、角质层厚度；采用荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA相对表达量；采用蛋白质印迹法检测TGF-β1、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA蛋白相对表达量及Smad3磷酸化蛋白(p-Smad3)相对表达量(p-Smad3与Smad3蛋白表达量的比值)。使用Excel 2019、GraphPad Prim 8.0软件进行数据统计分析，计量资料均符合正态分布，以±s表示，2组间比较采用配对样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果12只兔共形成96个创面，有27个创面无明显增生，其余69个创面形成突出皮肤表面、质地坚硬、暗红色的瘢痕增生样组织块，瘢痕形成率为71.9%(69/96)。施加压力后第40天，与对照组相比，实验组瘢痕外观凸起明显降低，硬度变软，颜色稍浅；HE染色和Masson染色结果显示，实验组中角质层厚度、SEI和成纤维细胞数分别为(69.33±6.03) μm、1.30±0.08、(236.30±14.64)个/视野，均显著低于对照组的(114.00±10.15) μm、1.72±0.05、(320.30±14.57)个/视野(均P<0.01)，真皮层未见丰富的毛细血管、炎性细胞和成纤维细胞，胶原纤维排列有序，且较稀疏。荧光定量PCR检测结果表明，实验组TGF-β1、Smad3、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量分别为0.48±0.08、0.58±0.05、0.04±0.01、0.15±0.02、0.31±0.03，均低于对照组的1.00±0.07、1.00±0.05、1.00±0.08、1.00±0.10、1.00±0.06(均P<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示，实验组TGF-β1、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA蛋白相对表达量及Smad3磷酸化蛋白相对表达量分别为0.65±0.03、0.07±0.01、0.43±0.03、0.53±0.03、0.54±0.03，均低于对照组的1.02±0.06、0.93±0.05、0.92±0.03、0.82±0.03、0.92±0.03(均P<0.01)。结论压力疗法可明显抑制瘢痕的增生，改善HTS组织结构，有利于胶原纤维蛋白的正常排列，减少胶原蛋白的过度沉积；压力疗法可能通过调控TGF-β1/Smad信号通路来抑制瘢痕的增生。

简介：摘要目的探讨Krüppel样因子4（KLF4）在巨噬细胞炎症反应中的表达特点与作用及其对脓毒症小鼠炎症反应与脏器损伤的作用，为烧创伤脓毒症的靶向治疗奠定理论基础。方法采用实验研究方法。取小鼠RAW264.7巨噬细胞与从10只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠中提取的原代腹腔巨噬细胞（PM）进行实验。采用内毒素/脂多糖（LPS）分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0（未处理）、1、2、4、6、8、12、24 h构建巨噬细胞炎症反应模型，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法检测白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、CC趋化因子配体2（CCL2）与肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA表达，据此确定后续部分实验LPS处理时间。用LPS处理RAW264.7巨噬细胞0、8 h，采用免疫荧光法检测KLF4的定位与蛋白表达；利用高通量测序技术平台对细胞进行转录组测序，采用DESeq2软件筛选2种处理时间细胞间的差异表达基因（DEG）。采用LPS分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0、1、2、4、6、8、12、24 h，分别用实时荧光定量RT-PCR法与蛋白质印迹法检测KLF4的mRNA与蛋白表达。将RAW264.7巨噬细胞按随机数字表法分为阴性对照组与KLF4过表达组，分别转染对应质粒后用LPS处理0、8 h，采用实时荧光定量RT-PCR法检测KLF4、IL-1β、IL-6、CCL2与TNF-α的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测KLF4蛋白表达。前述实验样本数均为3。将40只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为KLF4过表达组和阴性对照组（每组20只），分别注射相应转染注射液后构建盲肠结扎穿孔脓毒症模型。采用随机数字表法从2组小鼠中各选取12只，观察建模后72 h内生存情况。于建模后8 h取2组分别剩余的8只小鼠，先行眼球取血，采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-1β、IL-6水平，采用干化学法检测血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平；后取心脏、肺脏、肝脏组织，行苏木精-伊红染色后观察损伤情况。对数据行独立样本t检验、Cochran&Cox近似t检验、单因素方差分析、Dunnett检验、Brown-Forsythe和Welch单因素方差分析、Dunnett T3检验、log-rank（Mantel-Cox）检验。结果与LPS处理0 h比较，LPS处理6 h与8 h RAW264.7巨噬细胞中IL-1β mRNA表达、LPS处理4~12 h RAW264.7巨噬细胞中IL-6 mRNA表达、LPS处理8 h和12 h RAW264.7巨噬细胞中CCL2 mRNA表达以及LPS处理4~8 h RAW264.7巨噬细胞中TNF-α mRNA表达均显著上调（P<0.05或P<0.01），LPS处理4~8 h PM中IL-1β与CCL2 mRNA表达、LPS处理2~24 h PM中IL-6 mRNA表达以及LPS处理2~12 h PM中TNF-α mRNA表达均显著上调（P<0.05或P<0.01）。选取8 h作为后续部分实验的LPS处理时间。KLF4主要定位在RAW264.7巨噬细胞的细胞核中。与LPS处理0 h比较，LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4蛋白表达明显减少；LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中有1 470个差异表达显著的DEG，包括转录表达显著下调的KLF4［错误发现率<0.05，log2（差异倍数）=-2.47］。与LPS处理0 h比较，LPS处理6~24 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4 mRNA表达、LPS处理1~24 h RAW264.7巨噬细胞与PM中KLF4蛋白表达以及LPS处理4~24 h PM中KLF4的mRNA表达均明显降低（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照组比较，KLF4过表达组LPS处理0、8 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4的mRNA（t'值分别为17.03、8.61，P<0.05或P<0.01）与蛋白表达均明显升高，LPS处理0 h RAW264.7巨噬细胞中IL-6、CCL2的mRNA表达均明显升高（t值分别为6.29、3.40，P<0.05或P<0.01），LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中IL-1β、IL-6、CCL2、TNF-α的mRNA表达均显著下降（t值分别为10.52、9.60、4.58、8.58，P<0.01）。KLF4过表达组小鼠建模后72 h内生存比例明显高于阴性对照组（χ2=4.01，P<0.05）。建模后8 h，KLF4过表达组小鼠血清中IL-1β、IL-6与ALT、AST水平分别为（161±63）、（476±161）pg/mL与（144±24）、（264±93）U/L，明显低于阴性对照组的（257±58）、（654±129）pg/mL与（196±27）、（407±84）U/L（t值分别为3.16、2.44与4.04、3.24，P<0.05或P<0.01）。建模后8 h，与阴性对照组比较，KLF4过表达组小鼠心脏、肺脏、肝脏的组织结构紊乱减轻，炎性渗出明显减少，脏器实质细胞病理样改变明显减轻。结论KLF4在LPS诱导的巨噬细胞炎症反应中表达显著下降，显著抑制巨噬细胞炎症反应；KLF4显著提高脓毒症小鼠生存率并缓解炎症反应与脓毒症相关脏器损伤。

简介：摘要目的探讨背阔肌肌瓣在电烧伤后肩周肌力重建中的临床应用效果。方法2014年3月—2020年9月，空军军医大学第一附属医院收治13例伴有肩周严重损伤的电烧伤患者，其中男11例、女2例，年龄19~55岁，对其进行回顾性观察性研究。受伤肢体为左上肢8例、右上肢5例，均为Ⅲ~Ⅳ度焦痂创面，其中伴有肱二头肌缺损6例、三角肌缺损3例、肱三头肌缺损2例、肩周多条肌肉复合缺损2例。手术分2个阶段进行，Ⅰ期行肩周电烧伤创面清创探查，在保证全身状况稳定的前提下，尽可能保留局部组织、保存肢体。最后1次清创后创面面积为10 cm×6 cm~40 cm×15 cm，肌肉缺损面积为8 cm×4 cm~19 cm×12 cm，7例患者伴有肱骨外露。Ⅱ期根据残留肢体缺损程度，采用背阔肌肌瓣行肩周肌力重建，背阔肌肌瓣切取面积为15 cm×6 cm~20 cm×18 cm，剩余创面采用自体头部刃厚皮修复，肌瓣供区直接拉拢缝合。观察术后肌瓣成活和创面封闭情况及随访时供受区外观。末次随访时，采用中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准评定肩关节功能；参照肩关节简明测试评分系统，自制问卷调查患者对肩部外观及功能恢复的满意度。结果术后13例患者肩周肌瓣全部成活；2例患者皮片移植区域残余创面，其中1例患者经换药处理后愈合，1例患者换药后再次行自体头部刃厚皮移植后愈合。所有患者均获随访，时间6~18个月，患者肩周肌瓣外形饱满、不臃肿，修复区域萎缩性瘢痕质地柔软，与周围正常皮肤组织接近。肌瓣供区遗留线性缝合瘢痕，不影响整体外观。末次随访时，肩关节主动外展活动度60~90°，上举120~180°，肌力恢复Ⅳ级以上8例、Ⅲ级5例；肩关节功能评定为优8例、良5例；10例患者对肩周外观及功能恢复非常满意，3例患者对肩周外观及功能恢复满意。结论背阔肌肌瓣的应用为肩周电烧伤后肌力重建提供了一种较佳选择，术区外形好，上肢功能预后较佳。

简介：摘要目的比较游离髂骨瓣结合足底内侧皮瓣和游离股前外侧皮瓣结合腓骨瓣重建前足胫侧列缺损的疗效。方法2013年1月至2016年12月，西安·兵器工业五二一医院手外二科共收治前足胫侧列缺损患者22例，其中11例采用游离髂骨瓣结合足底内侧皮瓣修复，设为观察组；另外11例采用股前外侧皮瓣结合腓骨瓣修复，设为对照组。一期手术2组均为清创后采用克氏针或钢板螺钉固定骨折及脱位，创面采用负压封闭引流装置覆盖。二期重建前足胫侧列缺损时，观察组采用游离髂骨瓣结合足底内侧皮瓣进行修复，对照组采用游离股前外侧皮瓣结合腓骨瓣进行修复。观察皮瓣是否成活、是否有血管危象和感染发生；通过定期门诊复查、微信、电话等方式对患者进行随访，术后24个月根据美国矫形足踝协会评分标准对2组患者足功能恢复情况进行评分比较，其中优：90～100分；良：75～89分；可：50～74分；差：50分以下，计算患者足功能恢复优良率；根据英国医学研究会提出的感觉功能恢复分级标准，分别在术后6、12、24个月对2组皮瓣感觉功能恢复情况进行评分比较。数据比较采用Wilcoxon符号秩和检验。结果所有患者均获随访，平均随访时间31个月。术后所有皮瓣均成活。对照组1例分别于术后1、2 d出现静脉危象，经手术探查后缓解。观察组1例出现皮瓣伤口浅表感染，经换药、静脉滴注抗生素后缓解。术后24个月足功能恢复情况，观察组：优3例，良7例，可1例，优良率90.9%；对照组：优1例，良3例，可7例，优良率36.4%。观察组足功能恢复优良率高于对照组，差异有统计学意义(Z＝－2.598，P＝0.024)。术后6、12、24个月，观察组皮瓣感觉功能恢复评分分别为8.0(4.0, 8.0)、12.0(12.0, 16.0)和16.0(16.0, 16.0)分；对照组皮瓣感觉功能恢复评分分别为4.0(4.0, 4.0)、12.0(8.0, 12.0)和12.0(12.0, 12.0)分。相同时间点比较，观察组皮瓣感觉功能恢复评分均高于对照组，差异均有统计学意义(Z＝－2.165、－2.280、－3.031，P＝0.030、0.023、0.002)。结论带血管的髂骨瓣及腓骨瓣为足部骨质缺损提供理想供骨；足底内侧皮瓣为修复前足足底皮肤软组织缺损提供良好的供区，修复后足部负重及行走功能恢复良好、外观满意、皮瓣感觉功能恢复良好，足底皮肤耐磨。股前外侧皮瓣修复足部皮肤软组织缺损虽能覆盖创面，但术后外观差，感觉恢复较差，易滑移及破溃。