简介：摘要目的观察胶质瘤微环境中发生恶性转化的肿瘤相关巨噬细胞（TAM）脂代谢特征，分析抑制其脂代谢重塑后生物学表型变化及调控机制。方法实验采用12只6~8周雄性Balb/c小鼠。巨噬细胞（Mφ）来源于小鼠骨髓，恶性转化巨噬细胞（tMφ1和tMφ2）为胶质瘤干细胞与巨噬细胞体内外互相作用模型所克隆。检测Mφ、tMφ1和tMφ2内脂滴形成和胆固醇含量，qRT-PCR检测脂代谢关键酶固醇调节元件结合蛋白（SREBP）、脂肪酸合成酶（FASN）和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMG-CoA）的表达水平，并与正常Mφ比较。分析脂代谢抑制药物辛伐他汀（SIM）对相关细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及胞内胆固醇含量的变化。构建SIM处理前后恶性转化TAM中miRNA的差异表达谱，生物信息学分析筛选并验证与脂代谢重塑相关的miR449a及其靶基因分拣微管连接蛋白17（SNX17）。qRT-PCR和Western 印迹分析上调miR-449a对SNX17表达水平影响，检测上调miR449a对恶性转化TAM生物学表型及胆固醇含量的影响，并检测敲减SNX17后低密度脂蛋白受体（LDLR）表达变化及其对恶性转化TAM胆固醇含量的影响。结果tMφ1和tMφ2内脂滴数量明显多于Mφ，胆固醇相对含量分别为3.89±0.68、3.56±0.53，显著高于Mφ（1.01±0.21）（P<0.001），脂代谢酶SREBP（4.78±0.60、2.84±0.41）、FASN（4.65±0.70、3.01±0.45）和HMG-CoA（5.74±0.55、2.97±0.34）相对表达量高于Mφ（1.01±0.19、1.02±0.21和0.99±0.18）（均P<0.001）。SIM作用后tMφ1和tMφ2细胞增殖率分别由（47.06±5.88）%、（45.29±5.64）%下降至（23.53±4.70）%、（18.74±5.76）%（均P<0.05）；迁移细胞数分别由（1 025±138）个、（350±47）个下降至（205±63）个、（99±25）个（均P<0.001），侵袭细胞数分别由（919±45）个、（527±34）个下降至（220±23）个、（114±21）个（均P<0.001），胞内胆固醇相对含量分别由1.01±0.14、1.02±0.09下降至0.52±0.08、0.58±0.07（均P<0.05）。SIM作用tMφ1后筛选出miR-449a，生信分析并验证其靶基因为SNX17。过表达miR-449a后SNX17表达下调，细胞增殖率、迁移和侵袭数明显减少，胞内胆固醇含量降低；敲减SNX17后LDLR表达下调，胞内胆固醇水平亦相应下降（均P<0.05）。结论胶质瘤干细胞重构的高度免疫抑制性微环境中恶性转化TAM脂代谢水平显著增高。miR-449a通过靶向SNX17调控LDLR从而重塑恶性转化TAM的脂代谢，进而抑制其增殖、迁移和侵袭能力，精准干预miR-449a/SNX17/LDLR轴可为通过代谢干预逆转胶质瘤干细胞重构的以TAM为主的高度利瘤性免疫微环境治疗提供实验依据。

简介：摘要目的探讨胶质瘤干细胞(GSCs)微环境中恶变巨噬细胞(tMΦ)的脂代谢特征及其相关分子调控机制，为靶向tMΦ的精准治疗提供实验依据。方法实验采用巨噬细胞(MΦ)、tMΦ细胞株(包括tMΦ1、tMΦ2)，通过检测细胞内的三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的水平分析tMΦ的脂代谢特征，采用蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测调控脂代谢的关键分子钙调蛋白(CaM)、载脂蛋白E(ApoE)、激素敏感性三酰甘油脂肪酶(HSL)、肝X受体(LXR)的表达水平。构建tMΦ的差异表达长链非编码RNA(lncRNA)表达谱，选择HOXC-AS3为研究对象。建立HOXC-AS3过表达和低表达的tMΦ细胞株。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测上调、沉默HOXC-AS3后tMΦ内CaM的表达水平。通过克隆形成实验观察HOXC-AS3沉默后tMΦ的集落形成能力，以Transwell实验检测其侵袭能力，通过建立在体移植瘤小鼠模型观察其致瘤能力。对与HOXC-AS3脂代谢相关的结合蛋白进行蛋白组学分析，应用RNA免疫共沉淀实验验证二者是否可形成复合体，进一步通过qRT-PCR、Western blot实验分析HOXC-AS3对其结合蛋白的调控作用。结果tMΦ中的TC、TG含量及CaM、ApoE、HSL、LXR蛋白的表达水平均高于正常MΦ(均P<0.01)。LncRNA表达谱结果提示，与正常MΦ相比，HOXC-AS3在tMΦ1、tMΦ2中均呈高表达。克隆形成实验结果表明，沉默HOXC-AS3后的tMΦ1、tMΦ2(sh-HOXC-AS3组)的克隆数目明显少于空转染对照组(sh-NC组)(均P<0.01)；Transwell实验结果表明，sh-HOXC-AS3组tMΦ1、tMΦ2的穿膜细胞数少于sh-NC组(均P<0.01)；致瘤实验结果表明，sh-HOXC-AS3组小鼠的移植瘤体积均小于sh-NC组(均P<0.01)。qRT-PCR结果提示，过表达HOXC-AS3可上调tMΦ中CaM的表达，而沉默HOXC-AS3可下调tMΦ中CaM的表达(均P<0.01)。蛋白组学分析结果提示，与HOXC-AS3相关性最高的脂代谢相关蛋白为hnRNPA1。RNA免疫共沉淀结果证实，hnRNPA1与HOXC-AS3可形成复合体，沉默hnRNPA1后tMΦ内的CaM表达下调(均P<0.01)，而沉默tMΦ内的HOXC-AS3后，hnRNPA1基因和蛋白水平的变化均无统计学意义(均P>0.05)。结论tMΦ中的脂代谢合成水平高于正常MΦ，其机制可能为HOXC-AS3通过与hnRNPA1的结合，从而影响脂代谢分子CaM的表达，进而调控tMΦ的脂代谢重塑。靶向HOXC-AS3可抑制tMΦ在GSCs微环境的增殖和侵袭，HOXC-AS3可能为提高脑胶质瘤免疫治疗效果的潜在靶点。

简介：摘要目的探讨胶质瘤干细胞(GSCs)微环境中恶变巨噬细胞(tMΦ)的脂代谢特征及其相关分子调控机制，为靶向tMΦ的精准治疗提供实验依据。方法实验采用巨噬细胞(MΦ)、tMΦ细胞株(包括tMΦ1、tMΦ2)，通过检测细胞内的三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的水平分析tMΦ的脂代谢特征，采用蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测调控脂代谢的关键分子钙调蛋白(CaM)、载脂蛋白E(ApoE)、激素敏感性三酰甘油脂肪酶(HSL)、肝X受体(LXR)的表达水平。构建tMΦ的差异表达长链非编码RNA(lncRNA)表达谱，选择HOXC-AS3为研究对象。建立HOXC-AS3过表达和低表达的tMΦ细胞株。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测上调、沉默HOXC-AS3后tMΦ内CaM的表达水平。通过克隆形成实验观察HOXC-AS3沉默后tMΦ的集落形成能力，以Transwell实验检测其侵袭能力，通过建立在体移植瘤小鼠模型观察其致瘤能力。对与HOXC-AS3脂代谢相关的结合蛋白进行蛋白组学分析，应用RNA免疫共沉淀实验验证二者是否可形成复合体，进一步通过qRT-PCR、Western blot实验分析HOXC-AS3对其结合蛋白的调控作用。结果tMΦ中的TC、TG含量及CaM、ApoE、HSL、LXR蛋白的表达水平均高于正常MΦ(均P<0.01)。LncRNA表达谱结果提示，与正常MΦ相比，HOXC-AS3在tMΦ1、tMΦ2中均呈高表达。克隆形成实验结果表明，沉默HOXC-AS3后的tMΦ1、tMΦ2(sh-HOXC-AS3组)的克隆数目明显少于空转染对照组(sh-NC组)(均P<0.01)；Transwell实验结果表明，sh-HOXC-AS3组tMΦ1、tMΦ2的穿膜细胞数少于sh-NC组(均P<0.01)；致瘤实验结果表明，sh-HOXC-AS3组小鼠的移植瘤体积均小于sh-NC组(均P<0.01)。qRT-PCR结果提示，过表达HOXC-AS3可上调tMΦ中CaM的表达，而沉默HOXC-AS3可下调tMΦ中CaM的表达(均P<0.01)。蛋白组学分析结果提示，与HOXC-AS3相关性最高的脂代谢相关蛋白为hnRNPA1。RNA免疫共沉淀结果证实，hnRNPA1与HOXC-AS3可形成复合体，沉默hnRNPA1后tMΦ内的CaM表达下调(均P<0.01)，而沉默tMΦ内的HOXC-AS3后，hnRNPA1基因和蛋白水平的变化均无统计学意义(均P>0.05)。结论tMΦ中的脂代谢合成水平高于正常MΦ，其机制可能为HOXC-AS3通过与hnRNPA1的结合，从而影响脂代谢分子CaM的表达，进而调控tMΦ的脂代谢重塑。靶向HOXC-AS3可抑制tMΦ在GSCs微环境的增殖和侵袭，HOXC-AS3可能为提高脑胶质瘤免疫治疗效果的潜在靶点。