简介：摘要 目的：探讨改良的新生乳鼠原代海马神经细胞体外培养方法，建立稳定方便的神经细胞体外培养方法，探索 KA在体外对海马神经细胞存活率的影响。方法：采用新生 24h以内的 SD乳鼠，分离海马后，不用机械剪碎组织块，直接用胰蛋白酶进行消化后，用含血清的 DMEM+B27培养液制成细胞悬液进行接种，接种 24h换用无血清 Neurobasal+B27持续培养。选用海马神经细胞特异抗体 MAP2通过免疫荧光法鉴定细胞纯度。用 MTT测相对存活率，研究 KA在体外对海马神经细胞的致死效果。结果：接种 24h后细胞完全贴壁，并长出突起，之后突起延长交错成网络， 7~8天神经细胞达到成熟顶峰，之后逐渐老化， 21天后老化已非常明显。海马神经细胞纯度达 96%以上。 KA在体外同样能有效诱导海马神经细胞死亡， 4、 8h时间对比效果明显， 2、 12、 24h差异不大。结论：改良的方法能稳定便捷地在体外培养神经细胞，细胞纯度好，可用于神经疾病体外研究。 KA受体在体外同样能被 KA激活，诱导细胞死亡，相关后续研究可进行体外实验，最佳研究时间在给药后 4~8h。
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