简介:摘要目的探究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)小鼠卵母细胞中miR-320-3p低表达对胚胎发育潜能的影响,并初步探讨相关分子机制。方法脱氢表雄酮皮下注射法构建40只PCOS小鼠模型,40只对照组小鼠注射等量油剂。通过发情周期变化和卵巢组织苏木素-伊红染色,评估模型构建效果,超数排卵获取模型鼠的MII期卵母细胞,胞质内注射miR-320-3p模拟物(miR-320-3p mimics)或阴性对照物(negative control,NC),分为对照+NC组、PCOS+NC组、PCOS+miR-320-3p mimics组。①通过qRT-PCR方法检测三组小鼠MⅡ期卵母细胞中miR-320-3p的表达;②三组MⅡ期卵母细胞行卵胞质内单精子注射,收集双原核(two pronuclei,2PN)受精卵进行体外培养,于受精后48 h、84 h记录4-细胞期胚胎和囊胚的数量。③三组囊胚分别进行滋养外胚层分子标志物CDX2染色和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记法细胞凋亡检测,统计各组总细胞数、滋养外胚层(trophectoderm,TE)细胞数、内细胞团(inner cell mass,ICM)细胞数和凋亡细胞数;④通过qRT-PCR方法检测三组4-细胞胚胎中miR-320-3p的靶基因(Ulk1、Pbx3、Kdm5b、Satb2)及发育相关基因(Pou5f1、Myc、Klf4、Ago2、Dppa3、Wdr5)的表达变化。结果①qRT-PCR显示,与对照+NC组相比,PCOS+NC组小鼠卵母细胞中miR-320-3p表达相对下调,差异具有统计学意义(P=0.009);PCOS+miR-320-3p mimics组中miR-320-3p表达量显著多于PCOS+NC组(P=0.002);对照+NC组与PCOS+miR-320-3p mimics组组间差异无统计学意义(P=0.146)。②对照+NC组、PCOS+NC组、PCOS+miR-320-3p mimics组的4-细胞率组间差异均无统计意义(均P>0.05);三组囊胚形成率分别是75.89%(85/112)、59.22%(61/103)、72.64%(77/106),与对照+NC组相比,PCOS+NC组囊胚率显著降低(P=0.009);与PCOS+NC组相比,PCOS+miR-320-3p mimics组囊胚率显著升高(P=0.041)。③对照+NC组、PCOS+NC组、PCOS+miR-320-3p mimics组囊胚的总细胞数分别是85.81±9.26、67.29±7.07、82.71±8.40,TE细胞数分别是69.19±7.01、52.38±6.34、65.38±8.30,ICM细胞数分别是17.62±3.60、14.90±2.39、17.29±3.90,凋亡细胞数分别是8.64±2.80、11.73±2.07、9.55±2.81,凋亡率分别是9.64%±2.78%、16.68%±2.81%、11.18%±2.61%。对照+NC组囊胚的总细胞数、TE及ICM细胞数均显著多于PCOS+NC组(P<0.001、P<0.001、P=0.011),凋亡细胞数、凋亡率均显著低于PCOS+NC组(均P<0.001);PCOS+miR-320-3p mimics组总细胞数、TE及ICM细胞数也均显著多于PCOS+NC组(P<0.001、P<0.001、P=0.025),凋亡细胞数、凋亡率均显著低于PCOS+NC组(P=0.007、P<0.001)。对照+NC组与PCOS+miR-320-3p mimics组组间囊胚的总细胞数、TE及ICM细胞、凋亡细胞数、凋亡率差异均无统计学意义(均P>0.05),三组TE/ICM的比值组间差异无统计学意义(P>0.05)。④与对照+NC组相比,Ulk1、Pbx3、Myc、Dppa3在PCOS+NC组4-细胞胚胎中相对表达下调(P=0.012、P=0.002、P<0.001、P=0.001),Kdm5b、Satb2相对表达上调(P<0.001、P<0.001);与PCOS+miR-320-3p mimics组相比,Ulk1、Pbx3、Myc、Dppa3在PCOS+NC组4-细胞胚胎中相对表达下调(P=0.005、P=0.001、P=0.001、P=0.004),Kdm5b、Satb2相对表达上调(P<0.001、P=0.001),对照+NC组与PCOS+miR-320-3p mimics组组间差异均无统计学意义(均P>0.05);与对照+NC组相比,Wdr5在PCOS+NC组和PCOS+miR-320-3p mimics组中相对表达均上调(P=0.001、P=0.003),PCOS+NC组与PCOS+miR-320-3p mimics组中差异无统计学意义(P>0.05)。Pou5f1、Klf4、Ago2在三组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论PCOS小鼠卵母细胞中miR-320-3p低表达影响胚胎植入前的囊胚形成率和囊胚质量,PCOS卵母细胞中补偿miR-320-3p能够改善胚胎发育潜能,提高胚胎质量。
简介:摘要:目的 观察良性阵发性位置性眩晕患者干预中应用大量饮水结合手法复位的效果。方法 随机选取我院就诊于2021年9月/2022年5月(开始/结束)84例良性阵发性位置性眩晕患者为研究观察对象,将患者依据随机数字表法分对照组(手法复位+常规治疗)、实验组(手法复位+常规治疗+大量饮水),观察两组患者治疗有效率、眩晕残障程度评定量表(DHD)评分情况。结果 治疗后:实验组治疗有效率高于对照组,实验组DHD评分低于对照组,有统计意义(P<0.05)。结论 良性阵发性位置性眩晕患者采用大量饮水结合手法复位干预效果理想,可以提高治疗有效率,改善患者病症,可推广应用。
简介:摘要目的探究柴胡疏肝散(Chaihu-Shugan San,CSS)对慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)致抑郁小鼠行为及神经再生功能的影响。方法将30只清洁级健康雄性C57BL/6成年小鼠按照随机数字表法分为空白组(Con组)、模型组(CUMS组)、柴胡疏肝散组(CSS组),每组10只。CUMS组和CSS组小鼠采用CUMS法建立抑郁模型,造模同时分别给予蒸馏水和CSS(2.7 g/kg)灌胃,Con组小鼠只给予等体积蒸馏水灌胃,不进行CUMS刺激。干预结束后,采用体质量增量、糖水偏爱实验、强迫游泳实验和悬尾实验检测小鼠抑郁样行为。采用免疫荧光染色法检测海马齿状回新生神经元数量。qRT-PCR法检测小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)、纺锤体与动粒相关复合物2(spindle and kinetochore-associated protein 2,SKA2)mRNA表达水平。采用SPSS 22.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey检验。结果(1)三组小鼠在造模后的体质量增量差异有统计学意义(F=8.859,P<0.05),CUMS组小鼠的体质量增量低于Con组和CSS组(均P<0.05)。三组小鼠在行为学测试中的糖水偏爱率、悬尾不动时间和游泳不动时间均差异有统计学意义(F=10.544,12.957,8.095,均P<0.05)。CUMS组小鼠的糖水偏爱率低于Con组[(87.46±2.78)%,(93.90±3.31)%,P<0.05],CSS组小鼠的糖水偏爱率[(91.65±2.61)%]则高于CUMS组(P<0.05)。CUMS组小鼠悬尾不动时间[(198.00±27.57)s]和游泳不动时间[(322.20±46.98)s]均高于Con组[悬尾不动时间(138.80±38.50)s,游泳不动时间(238.50±50.51)s,均P<0.05]。CSS组小鼠的悬尾不动时间[(139.00±21.29)s]和游泳不动时间[(265.20±44.90)s]均低于CUMS组(均P<0.05)。(2)免疫荧光染色结果显示,三组小鼠海马齿状回BrdU与NeuN双标的细胞数量差异有统计学意义(F=9.486,P<0.05)。CUMS组小鼠双标染色细胞数量[(31.66±3.21)个/视野]低于Con组[(63.66±15.17)个/视野]和CSS组[(58.00±6.00)个/视野](均P<0.05)。(3)qRT-PCR结果显示,三组小鼠海马齿状回BDNF、FGF2和SKA2的mRNA水平均差异有统计学意义(F=14.522,9.337,8.701,均P<0.05)。CUMS组小鼠海马齿状回BDNF mRNA(0.79±0.06)、FGF2 mRNA(0.74±0.18)和SKA2 mRNA(0.52±0.32)的相对表达量均低于Con组[BDNF mRNA(1.03±0.10),FGF2 mRNA(1.04±0.11),SKA2 mRNA(1.05±0.37),均P<0.05]。与CUMS组相比,CSS组BDNF mRNA(1.07±0.80)、FGF2 mRNA(1.30±0.29)、SKA2 mRNA(1.40±0.55)相对表达水平均较高(均P<0.05)。结论柴胡疏肝散能缓解抑郁模型小鼠的抑郁症状,其机制可能与提高海马区BDNF、FGF2、SKA2 mRNA的表达并促进神经干细胞增殖有关。