简介:摘要目的原核表达糖尿病创面来源大肠杆菌谷氧还蛋白(Grx)GrxB,制备GrxB多克隆抗体。方法根据美国国家生物技术信息中心(NCBI)公布的大肠杆菌K12标准株grxB基因序列(Gene ID:946926)设计扩增引物,以本科室前期分离到的一株糖尿病创面大肠杆菌基因组(煮沸裂解法获得)为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出grxB全长663 bp,使用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后连接至表达载体pET-30a。将重组质粒pET-30a-grxB转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GrxB蛋白,使用N2+镍离子层析柱对蛋白进行纯化。纯化后的重组GrxB蛋白免疫BALB/c小鼠,完成免疫程序后使用蛋白质印迹法(Western blot)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对多克隆抗体的特异性和效价进行测定。两组间比较采用t检验。结果经测序,扩增出的grxB序列与K12标准株的完全一致,并成功表达出可溶性重组GrxB蛋白,大小为31.2 kDa,与预测大小一致。血清51 200倍稀释后,免疫组效价显著高于磷酸盐缓冲液(PBS)组(1.146±0.066比0.12±0.011,t=15.000,P<0.05),免疫组血清与重组GrxB蛋白和大肠杆菌全菌均具有良好的特异性反应。结论成功表达可溶性重组GrxB蛋白,并获得高滴度多克隆抗体。
简介:摘要:我国近年来交通事业不断创新发展,成为我国国民经济增长的重要基础,也是我国基础设施建设的关键,为了有效管控公路工程施工质量,应在公路工程建设过程中,加强全过程管理。同时,还应在公路工程项目实施过程中,应不断强化检测技术,运用现代化技术手段提高检测效率和效果,有效控制公路工程施工环节各类技术缺陷,为人们交通出行提供优质道路环境。因此,公路工程试验检测工作中,应加强对施工原材料、公路工程施工技术、检测技术进行客观分析,对公路工程施工各环节易出现的重点环节应有针对性的试验检测,针对检测过程中存在的质量问题应按照类别分类并展开讨论确定解决方案,规避公路工程施工项目各类安全隐患,符合行业对公路工程领域相关参数要求。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)-DUXAP9/DUXAP10表达与肝细胞癌(肝癌)肝切除患者预后的关系。方法标本来源于2012年1月至2015年12月在盱眙县人民医院行肝切除的63例肝癌患者。患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。其中男35例,女28例;年龄20~70岁,中位年龄52岁。采用lncRNAs基因谱芯片筛选异常表达基因,实时荧光定量PCR检测基因表达水平。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存分析比较采用Log-rank检验。肝癌肝切除患者预后影响因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果lncRNAs基因谱芯片结果显示,256条lncRNAs异常表达,162条表达上调,94条下调。进一步筛选出2个异常表达基因lncRNA-DUXAP9和lncRNA-DUXAP10(fold change=6.35,4.53;P<0.05)。生存分析显示,lncRNA-DUXAP9/DUXAP10表达与肝癌肝切除患者总体生存和无瘤生存相关(χ2=1.817,1.693和2.163,1.961;P<0.05)。Cox多因素分析显示,lncRNA-DUXAP9/DUXAP10表达为肝癌肝切除患者预后的独立危险因素(HR=2.524,1.316;P<0.05)。结论lncRNA-DUXAP9/DUXAP10在肝癌中高表达,其高表达为肝癌肝切除患者预后的独立危险因素。