简介：摘要目的制备含有L452R和T478K突变位点的新型冠状病毒受体结合域（RBD）-破伤风类毒素蛋白（TT），表达后蛋白免疫小鼠以了解突变体蛋白的免疫原性。方法设计2对新型冠状病毒引物对RBD中的L452R和T478K进行突变，并将TT肽的核苷酸片段嵌入RBD中；利用大肠埃希菌表达系统表达蛋白，借助离子柱层析技术纯化出目的蛋白，复性获得空间构象后通过ELISA、高效液相和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）等进行检定；免疫小鼠后ELISPOT检测其细胞免疫水平；用竞争法ELISA和活病毒中和试验评估其中和抗体对新型冠状病毒流行突变株的抑制能力。结果成功构建了新型冠状病毒RBD的L452R和T478K突变蛋白，蛋白相对分子质量为26 390。小鼠免疫后产生了特异性的细胞免疫，突变蛋白组刺激后产生的分泌IFN-γ的效应T细胞为（21.43±11.71）个斑点形成细胞/5×105个细胞,高于对照组（3.38±2.56）个斑点形成细胞/5×105个细胞，差异有统计学意义（t= 4.17, P=0.003）；同时产生了针对新型冠状病毒德尔塔、奥密克戎（BA.1）流行株的高滴度中和抗体，中和滴度几何平均数分别为3 012.28和1 086.12。结论本研究所构建的L452R和T478K突变蛋白对流行的新型冠状病毒德尔塔、奥密克戎（BA.1）流行株有效，为开发重组广谱的新型冠状病毒疫苗提供依据。
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