简介：摘要目的探讨环状RNA HECTD1(circ-HECTD1)是否通过调控miR-98-5p/酪氨酸蛋白激酶A4(EPHA4)的表达参与氧糖剥夺(OGD)诱导的神经元损伤。方法体外分离培养小鼠原代皮层神经元，采用双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测神经元中circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4之间的靶向关系，并将神经元随机分为对照组（正常条件下培养24 h）与OGD 6 h、12 h、24 h组（予OGD处理6 h、12 h、24 h）以及OGD+Vector组与OGD+circ-HECTD1组、OGD+小干扰RNA(siRNA）阴性对照（si-NC）组与OGD+siRNA circ-HECTD1(si-circ-HECTD1)组、OGD+微小RNA(miRNA）模拟物阴性对照（miR-NC）组与OGD+miR-98-5p模拟物（miR-98-5p mimic）组、OGD+miRNA抑制物阴性对照（anti-miR-NC）组与OGD+miR-98-5p抑制物（anti-miR-98-5p）组、OGD+miR-98-5p mimic+pcDNA组与OGD+miR-98-5p mimic+EPHA4组、OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组，分别转染pCD5-ciR空载体、pCD5-ciR-circ-HECTD1过表达载体、si-NC、si-circ-HECTD1、miR-NC、miR-98-5p mimic、anti-miR-NC、anti-miR-98-5p至神经元，以及共转染miR-98-5p mimic和pcDNA3.1空载体、miR-98-5p mimic和pcDNA3.1-EPHA4过表达载体、si-circ-HECTD1和anti-miR-NC、si-circ-HECTD1和anti-miR-98-5p至神经元，OGD处理24 h后，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR）法检测circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4 mRNA表达，采用Western blotting实验检测EPHA4蛋白表达，采用MTT法检测细胞增殖活性，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，采用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量，采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA)活性。结果(1)circ-HECTD1能够与miR-98-5p靶向结合，miR-98-5p能够与EPHA4 3'翻译区靶向结合。(2)与对照组比较，OGD 6 h、12 h、24 h组神经元中circ-HECTD1表达均明显升高，miR-98-5p表达均明显降低，EPHA4蛋白表达均明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与OGD+Vector组比较，OGD+circ-HECTD1组神经元中circ-HECTD1的表达明显升高，miR-98-5p的表达明显降低；与OGD+si-NC组比较，OGD+si-circ-HECTD1组神经元中miR-98-5p的表达明显升高，EPHA4 mRNA和蛋白的表达均明显降低；与OGD+miR-NC组比较，OGD+miR-98-5p mimic组神经元中miR-98-5p的表达明显升高，EPHA4蛋白的表达明显降低；与OGD+anti-miR-NC组比较，OGD+anti-miR-98-5p组神经元中miR-98-5p的表达明显降低，EPHA4蛋白的表达明显升高；与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组比较，OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组神经元中EPHA4 mRNA和蛋白的表达均明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)与对照组比较，OGD组神经元的细胞活力明显降低，细胞凋亡率明显升高，IL-1β、TNF-α含量明显升高，SOD活性明显降低，MDA活性明显升高；与OGD+si-NC组比较，OGD+si-circ-HECTD1组神经元的细胞活力明显升高，细胞凋亡率明显降低，IL-1β、TNF-α含量明显降低，SOD活性明显升高，MDA活性明显降低；与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组比较，OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组神经元的细胞活力明显降低，细胞凋亡率明显升高，IL-1β、TNF-α含量明显升高，SOD活性明显降低，MDA活性明显升高；与OGD+miR-NC组比较，OGD+miR-98-5p mimic组神经元的细胞活力明显升高，细胞凋亡率明显降低，IL-1β、TNF-α含量明显降低，SOD活性明显升高，MDA活性明显降低；与OGD+miR-98-5p mimic+pcDNA组比较，OGD+miR-98-5p mimic+EPHA4组神经元的细胞活力明显降低，细胞凋亡率明显升高，IL-1β、TNF-α含量明显升高，SOD活性明显降低，MDA活性明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论敲低circ-HECTD1后可通过靶向调控miR-98-5p/EPHA4的表达，从而改善OGD诱导的神经元损伤。