简介：摘要目的评价胞外-5′-核苷酸酶(CD73)在小鼠肝缺血再灌注损伤内源性保护机制中的作用及其与转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD家族成员3(Smad3)信号通路的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠24只，8~10周龄，体重20~23 g，采用随机数字表法分为3组(n＝8)：假手术组(S组)只游离肝门，不阻断；肝缺血再灌注组(IR组)阻断肝门30 min后恢复灌注制备小鼠肝缺血再灌注损伤模型；肝缺血再灌注+CD73特异性抑制剂组(APCP组)腹腔注射CD73特异性抑制剂APCP 40 mg/kg，10 min后行缺血再灌注。于再灌注6 h时采集眶静脉血样，测定血清ALT和AST浓度，随后处死小鼠取肝组织，采用Western blot法检测CD73、TGF-β1和磷酸化Smad3(p-Smad3)表达，ELISA法检测IL-1β和TNF-α含量，可见分光光度计测定MDA含量和SOD活性，光镜下观察肝组织病理学结果。结果与S组比较，IR组和APCP组血清AST和ALT浓度、肝组织IL-1β、TNF-α和MDA含量升高，SOD活性降低，CD73、TGF-β1和p-Smad3表达上调(P<0.05)；与IR组比较，APCP组血清AST和ALT浓度、肝组织IL-1β、TNF-α和MDA含量升高，SOD活性降低，CD73、TGF-β1和p-Smad3表达下调(P<0.05)。APCP组肝组织病理学损伤较IR组加重。结论CD73参与了小鼠肝缺血再灌注损伤内源性保护机制的过程，可能与调控TGF-β1/Smad3信号通路有关。

简介：摘要目的评价肝缺血再灌注大鼠外泌体对小胶质细胞焦亡的影响。方法清洁级健康雄性SD大鼠20只，2~3周龄，体重20~50 g，采用随机数字表法分为2组(n＝10)：假手术组(S组)和肝缺血再灌注组(I/R组)。取S组及I/R组大鼠血清，使用超速离心法提取外泌体。将PKH26标记的外泌体与小胶质细胞共孵育6 h，采用免疫荧光法检测外泌体的摄取。将原代小胶质细胞以5×105个/ml的密度接种于6孔板，采用随机数字表法分为4组(n＝6)：对照组(C组)、107个/ml肝缺血再灌注外泌体组(107组)、108个/ml肝缺血再灌注外泌体组(108组)和109个/ml肝缺血再灌注外泌体组(109组)。依次给予相应浓度肝缺血再灌注外泌体共孵育6 h。采用Western blot法检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、裂解含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cleaved-caspase-1)和消皮素D(GSDMD)的表达。采用随机数字表法将原代小胶质细胞分为3组(n＝24)：对照组(C组)、假手术外泌体组(S-exosome组)和肝缺血再灌注外泌体组(I/R-exosome组)。S-exosome组和I/R-exosome组分别给予108个/ml的S组、I/R组外泌体孵育6 h。采用RT-PCR法检测NLRP3、ASC和GSDMD mRNA的表达，采用ELISA法检测上清液IL-18、IL-1β和TNF-α的浓度。结果肝缺血再灌注外泌体与小胶质细胞存在共定位。108个/ml和109个/ml肝缺血再灌注外泌体上调NLRP3、ASC、GSDMD和cleaved-caspase-1的表达(P<0.01)。与C组和S-exosome组比较，I/R-exosome组NLRP3、ASC和GSDMD mRNA的表达上调，上清液IL-18、IL-1β和TNF-α的浓度升高(P<0.01)。结论肝缺血再灌注大鼠外泌体可促进小胶质细胞焦亡。

简介：摘要目的评价肝缺血再灌注幼鼠脑损伤时血清外泌体与小胶质细胞焦亡的关系。方法清洁级健康雄性SD大鼠46只，2~3周龄，体重40~60 g，按照随机数字表法分为4组：假手术组(S组，n＝10)、缺血再灌注组(I/R组，n＝13)、假手术幼鼠血清外泌体处理组(S-Exosome组，n＝10)和缺血再灌注幼鼠血清外泌体处理组(I/R-Exosome组，n＝13)。I/R组建立70%肝缺血再灌注损伤模型。再灌注6 h后，取S组和I/R组幼鼠血清分别提取外泌体，S-Exosome组、I/R-Exosome组经尾静脉分别注射S组或I/R组血清外泌体混悬液100 μl。采用Western blot法测定S组和I/R组血清外泌体标记蛋白CD9、CD81表达水平。各组均于相应处理后6 h时取血清及海马组织标本，采用Western blot法检测海马NOD样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)、半胱天冬酶1前体(pro-caspase-1)、半胱天冬酶1剪切体(cleaved-caspase-1)和凋亡相关微粒蛋白(ASC)表达水平，免疫组织化学法检测海马组织GSDMD表达水平；采用ELISA法检测血清和海马组织IL-1β、IL-18、TNF-α以及血清S100β、NSE的水平；I/R-Exosome组取3只大鼠，经尾静脉注射PKH26红色荧光标记的血清外泌体，采用免疫荧光技术观察外泌体与小胶质细胞共定位情况。结果与S组比较，I/R组血清CD9和CD81表达上调，I/R组及I/R-Exosome组海马组织NLRP3、GSDMD、cleaved-caspase-1、ASC表达上调，血清及海马组织IL-18、IL-1β、TNF-α水平、血清S100β、NSE水平升高(P<0.05)，S-Exosome组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。I/R组及I/R-Exosome组GSDMD阳性表达明显增多，S组及S-Exosome组未见明显阳性表达；免疫荧光结果示外泌体与小胶质细胞共定位现象。结论幼鼠肝缺血再灌注诱发脑损伤的机制可能与血清外泌体介导小胶质细胞焦亡有关。

简介：摘要目的评价腹腔巨噬细胞NAD依赖性蛋白脱乙酰酶3(Sirt3)表达在右美托咪定抑制脓毒症小鼠炎症反应中的作用。方法SPF级健康雄性C57BL6小鼠64只，7周龄，体重约20 g。采用随机数字表法分为4组(n＝16)：假手术组(S组)、脓毒症组(Sep组)、右美托咪定组(DEX组)和右美托咪定+Sirt3抑制剂3-TYP组(TYP组)。采用盲肠结扎穿孔的方法制备小鼠脓毒症模型，DEX组于制备模型前1 h时腹腔注射生理盐水0.25 ml，30 min后腹腔注射右美托咪定50 μg/kg(生理盐水稀释至0.25 ml)；TYP组于制备模型前1 h时腹腔注射3-TYP 5 mg/kg(生理盐水稀释至0.25 ml)，30 min后腹腔注射右美托咪定50 μg/kg。S组和Sep组于制备模型前1 h和30 min分别腹腔注射等量生理盐水。S组仅进行开腹、取出盲肠操作，不结扎穿孔。于术后24 h时腹腔灌洗，提取腹腔巨噬细胞贴壁培养，采用qRT-PCR法检测巨噬细胞Sirt3、IL-1β和TNF-α mRNA表达，Western blot法检测Sirt3的表达，ELISA法测定腹腔灌洗液IL-1β和TNF-α浓度，观察各组小鼠10 d生存情况。结果与S组比较，Sep组、DEX组和TYP组腹腔巨噬细胞Sirt3及其mRNA表达下调，IL-1β和TNF-α mRNA表达上调，腹腔灌洗液IL-1β和TNF-α浓度升高，小鼠10 d生存率下降(P<0.05)；与Sep组比较，DEX组腹腔巨噬细胞Sirt3及其mRNA表达上调，IL-1β和TNF-α mRNA表达下调，腹腔灌洗液IL-1β和TNF-α浓度降低，小鼠10 d生存率升高(P<0.05)；与DEX组比较，TYP组腹腔巨噬细胞Sirt3及其mRNA、IL-1β和TNF-α mRNA表达上调，腹腔灌洗液IL-1β和TNF-α浓度升高，小鼠10 d生存率降低(P<0.05)。结论腹腔巨噬细胞Sirt3表达上调参与了右美托咪定抑制脓毒症小鼠炎症反应的过程。

简介：摘要目的评价小檗碱对小鼠非酒精性脂肪性肝病程序性坏死的影响及其与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/转录活化因子6(STAT6)通路的关系。方法将25只8周龄雄性C57BL/6N小鼠分为对照组、脂肪肝组、小檗碱治疗组(200 mg·kg-1·d-1)、AMPK抑制剂Compound C治疗组(0.2 mg·kg-1·d-1)、STAT6抑制剂AS1517499治疗组(10 mg·kg-1·d-1)。第12周末给小鼠称重并采集血清检测天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、三酰甘油、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平；留取肝脏组织称重并检测丙二醛和超氧化物歧化酶浓度，并予HE、Masson和油红O染色；Western印迹法检测程序性坏死蛋白受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)、磷酸化(p-)混合系列蛋白酶样结构域(MLKL)及通路蛋白AMPK、p-AMPK、p-STAT6的表达。结果与对照组相比，脂肪肝组肝质量、肝指数、AST、ALT、三酰甘油、TNF-α、IL-1β、氧化应激程度明显加重(P<0.05)，肝组织充满空泡样改变及炎性细胞浸润，可见广泛分布的红色脂滴和明显蓝色纤维，RIPK3及p-MLKL表达上调(P<0.05)，p-AMPK和p-STAT6水平降低(P<0.05)；与脂肪肝组相比，小檗碱干预可明显降低小鼠肝质量与肝指数，改善肝功能，降低血脂水平、促炎因子表达以及氧化应激水平，肝组织脂肪变性及纤维化程度明显减轻，RIPK3及p-MLKL表达下调(P<0.05)，p-AMPK和p-STAT6水平显著增加(P<0.05)；与小檗碱治疗组相比，给予AMPK和STAT6抑制剂处理均可抵消小檗碱对脂肪肝的保护效应，RIPK3及p-MLKL表达增加(P<0.05)。5组间AMPK总蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论小檗碱可激活AMPK/STAT6通路，抑制肝细胞程序性坏死，发挥对小鼠非酒精性脂肪性肝病的保护作用。

简介：摘要目的探讨小檗碱对小鼠代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）致肝细胞程序性坏死的影响及其相关分子机制。方法20只雄性C57BL/6N小鼠随机分为4组（每组n = 5）：对照（S）组、脂肪肝（H）组、小檗碱（B）组、核因子-E2相关因子（Nrf2）抑制剂全反式维甲酸组（ATRA，A组）。12周末检测各组血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）浓度，计算肝指数（肝质量/体质量比值）；进行肝组织HE、Masson和油红O染色，采用SAF评分评价肝损伤程度；Western blot法检测肝组织程序性坏死相关蛋白，即受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）、磷酸化混合系列蛋白酶样结构域（p-MLKL）及Nrf2表达水平。组间均数比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD-t检验。结果与S组相比，H组血清ALT、AST、LDH、TG、TC、TNF-α、IL-1β水平及肝指数显著升高；肝组织充满空泡样改变及炎性细胞浸润，油红O染色可见大量红色脂滴，Masson染色可见胶原纤维增生明显，SAF评分（6.60±0.55与0.80±0.45）显著增高。RIPK3及p-MLKL表达上调，Nrf2水平相对增加，差异均有统计学意义（P < 0.05）。与H组相比，小檗碱干预可明显降低小鼠肝脏生化指标与血脂指标水平、促炎介质表达、肝指数及SAF评分，RIPK3和p-MLKL也表达下调，而Nrf2水平进一步增加，差异均有统计学意义（P < 0.05）。与B组相比，给予Nrf2抑制剂处理可拮抗小檗碱对脂肪肝的保护效应，血清ALT、AST、LDH、TG、TC、TNF-α、IL-1β水平及肝指数显著升高，SAF评分升高，RIPK3和p-MLKL表达相对增加，差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论小檗碱可明显改善小鼠代谢相关脂肪性肝病损伤，其机制与激活Nrf2、抑制肝细胞程序性坏死有关。