简介：摘要目的探讨不同浓度人脂肪间充质干细胞(hADMSCs)来源类外泌体纳米囊泡(NVs)和外泌体(EXOs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)生物学功能的影响。方法(1)通过水动力抽脂方式，从2019年6月至2020年8月就诊于福建医科大学附属协和医院的10例女性大腿获取脂肪组织(年龄18~65岁)，通过酶解分离提取第4代hADMSCs，对其进行成脂、成骨诱导分化，流式细胞仪鉴定其表面蛋白标志物。(2)制备hADMSCs-NVs和hADMSCs-EXOs并电镜观察其形态，以粒径分析仪分析其表面蛋白标志物，通过纳米颗粒跟踪仪分析颗粒大小，通过蛋白定量和纳米颗粒跟踪仪分别检测1×106个hADMSCs产生的NVs和EXOs总蛋白含量和颗粒数。(3)设置对照组(加入等量基础培养基)、40、60、80 μg/ml NVs组和20、40、60 μg/ml EXOs组，分别通过CCK-8增殖实验、细胞划痕试验、血管形成实验检测各组HUVECs增殖、迁移、血管再生能力。采用Graphpad Prism 7.0进行统计分析，计量资料以±s表示，多组间比较应用重复测量方差分析，组间两两比较应用Tukey检验，P<0.05表示差异有统计学意义。结果(1)光学显微镜下观察到第4代hADMSCs形态呈细长纺锤状；成脂诱导21 d后，油红O染色可见细胞内透明的脂滴被染成红色；成骨诱导14 d后，碱性磷酸酶钙钴法染色可见大量棕黑色着色区；hADMSCs表面蛋白标志物CD90、CD29为阳性。(2)透射电镜下可见hADMSCs-NVs和EXOs结构相似，都呈盘状囊泡；NVs和EXOs表面蛋白标志物CD9、CD81、IgG表达量相似；NVs和EXOs两者的粒径大小大致相同，分别为(72.00±21.51)nm和(81.27±22.37)nm；1×106个hADMSCs产生的NVs总蛋白含量为(140.7±5.1) μg，是EXOs的[(1.3±0.3) μg] 100倍左右；NVs颗粒数[(644.5±17.1)×108个/ml]是EXOs[(7.1±0.1)×108个/ml]的90倍左右。(3)CCK-8增殖实验中，培养12、24、48 h各组HUVECs生长趋势较为一致，吸光度值比较差异有统计学意义(P<0.01)；培养48 h，60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组吸光度值均大于对照组(均P<0.01)，而两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕后8、24 h，各组划痕宽度改变不完全相同，差异有统计学意义(P<0.01)；划痕后24 h，60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组划痕宽度改变均大于对照组(均P<0.01)，而两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。血管形成实验中，各组血管分支点数量与血管长度不完全相同，差异有统计学意义(P<0.01)；60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组HUVECs形成的毛细血管分支点数量均多于对照组(均P<0.01)，而两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)；60 μg/ml NVs、40μg/ml EXOs组毛细血管长度均长于对照组(均P<0.01)，而两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论hADMSCs-NVs的形态、大小与EXOs相似，而总蛋白量却是EXOs的100倍左右；hADMSCs-NVs和EXOs对HUVECs生物学功能的作用相近，两者最适宜的浓度分别为60 μg/ml和40 μg/ml。