简介:摘要目的评价低温缺氧复氧时大鼠心肌成纤维细胞(RCF)对H9c2细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法体外培养的H9c2细胞,采用随机数字表法分为4组(n=12):对照组(C组)、低温缺氧复氧组(HHR组)、RCF共培养组(Co组)和RCF共培养+低温缺氧复氧组(Co+HHR组)。C组于37 ℃、5%CO2+95%空气条件下培养5 h。HHR组于4 ℃、5%CO2+95%N2条件下培养1 h,然后于37 ℃、5%CO2+95%空气条件下培养4 h。Co组和Co+HHR组将0.3×105个/孔H9c2细胞接种于Transwell©小室下层培养皿、0.6×105个/孔RCF接种于上层小室。Co组于37 ℃、5%CO2+ 95%空气条件下培养5 h;Co+HHR组于4 ℃、5%CO2+95%N2条件下培养1 h后,于37 ℃、5%CO2+95%空气条件下培养4 h。采用台盼蓝染色法测定H9c2细胞死亡率,免疫荧光法测定Cx43和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的表达水平,Western blot法测定Cx43、磷酸化Cx43、ERK1/2及磷酸化ERK1/2的表达水平。结果与C组相比,HHR组H9c2细胞死亡率升高,Cx43表达及磷酸化水平降低,ERK1/2表达及磷酸化水平升高(P<0.05),Co组H9c2细胞死亡率、Cx43及ERK1/2的表达与磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05);与Co组相比,Co+HHR组H9c2细胞死亡率升高,Cx43及ERK1/2的表达和磷酸化水平降低(P<0.05);与HHR组相比,Co+HHR组H9c2细胞死亡率升高,Cx43及ERK1/2的表达和磷酸化水平降低(P<0.05)。结论低温缺氧复氧时RCF可降低H9c2细胞Cx43的表达水平和活性,其机制可能与下调ERK1/2的表达、抑制ERK1/2的活性有关。