简介：摘要目的探讨长链非编码RNA((lncRNA)LBX2-AS1靶向调控微小RNA(miRNA，miR)-491-5p影响骨肉瘤细胞增殖及凋亡的分子机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测2017年10月至2018年12月郑州大学第一附属医院收集的骨肉瘤组织与瘤旁组织中LBX2-AS1、miR-491-5p的表达量。选取人骨肉瘤细胞U2OS为研究对象，按照数字表法随机分为4组：si-NC组(转染si-NC)、si-LBX2-AS1组(转染si-LBX2-AS1)、si-LBX2-AS1＋anti-miR-NC组(共转染si-LBX2-AS1与anti-miR-NC)、si-LBX2-AS1＋anti-miR-491-5p组(共转染si-LBX2-AS1与anti-miR-491-5p)，分别将si-NC、si-LBX2-AS1、si-LBX2-AS1与anti-miR-NC、si-LBX2-AS1与anti-miR-491-5p转染至U2OS细胞。噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率；应用流式细胞仪检测细胞周期；流式细胞术检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告实验验证LBX2-AS1与miR-491-5p的靶向关系；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达量。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果瘤旁组织与骨肉瘤组织组织中LBX2-AS1的表达量分别为(1.01±0.10)、(3.56±0.35)，miR-491-5p的表达量分别为(1.02±0.10)、(0.16±0.02)，与瘤旁组织比较，骨肉瘤组织中LBX2-AS1的表达水平显著升高(t＝35.027，P<0.05)，miR-491-5p的表达水平显著降低(t＝42.165，P<0.05)，差异均有统计学意义；si-NC组与si-LBX2-AS1组细胞存活率分别为(100.02±10.00)%、(55.67±5.54)%，G1期比例分别为(38.51±2.55)%、(52.27±4.68)%，S期比例分别为(30.10±2.14)%、(15.36±1.26)%，细胞凋亡率分别为(8.28±0.92)%、(24.11±2.37)%，与si-NC组比较，si-LBX2-AS1组细胞存活率显著降低(t＝11.638，P<0.05)，细胞周期G1期比例明显升高(t＝7.745，P<0.05)，S期比例明显降低(t＝17.806，P<0.05)，细胞凋亡率显著升高(t＝18.680，P<0.05)，Cyclin D1表达量显著降低(t＝20.871，P<0.05)，p21、Caspase-3表达量显著升高(t＝22.687，P<0.05；t＝20.871，P<0.05)，差异均有统计学意义；双荧光素酶报告实验证实LBX2-AS1能够靶向结合miR-491-5p；抑制miR-491-5p表达能减弱抑制LBX2-AS1表达对U2OS细胞增殖的抑制作用，还能减弱抑制LBX2-AS1表达对U2OS细胞凋亡的促进作用。结论lncRNA LBX2-AS1通过调控miR-491-5p从而促进骨肉瘤细胞增殖，抑制细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA CDKN2BAS(lncRNA CDKN2BAS)是否通过靶向微小RNA(miRNA，miR)-98-5p影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨细胞hFOB1.19(购自上海通派生物科技有限公司)与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1(购自美国典型菌种保藏中心)中CDKN2BAS、miR-98-5p的表达水平；按照随机数字表法随机分组为si-con组、si-CDKN2BAS组、miR-con组、miR-98-5p组、si-CDKN2BAS＋anti-miR-con组、si-CDKN2BAS ＋anti-miR-98-5p组，噻唑蓝(MTT)法检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞增殖活力的影响；流式细胞术检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞凋亡能力的影响；Transwell小室实验检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响；双荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS是否靶向miR-98-5p；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)的表达量。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果hFOB1.19细胞与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1中CDKN2BAS的表达水平分别为1.05±0.28、4.26±0.42、3.65±0.56、4.02±0.46、3.75±0.41，miR-98-5p的表达水平分别为0.98±0.06、0.41±0.05、0.64±0.07、0.57±0.06、0.47±0.05，与hFOB1.19细胞比，骨肉瘤细胞株中CDKN2BAS表达明显上调(F＝80.889，P<0.05)，miR-98-5p表达明显下调(F＝130.868，P<0.05)，差异均有统计学意义；沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞存活率分别为(68.57±8.63)%、(64.68±7.24)%，迁移细胞数分别为(98.43±11.51)、(93.46±12.54)个，侵袭细胞数分别为(47.93±6.84)、(38.64±6.69)个，沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞增殖活力明显降低(F＝37.873、60.131，P<0.05)，细胞迁移及侵袭能力明显减弱(F＝159.281、189.097，167.638、302.502，P<0.05)，Ki-67、MMP-2、MMP-9、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显降低(F＝101.455、161.465、196.590、149.229、157.759、55.555，P<0.05)，而细胞凋亡率明显升高(F＝260.694、270.939，P<0.05)，p21、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平明显升高(F＝88.672、448.342、202.034、118.338、121.661、290.273，P<0.05)，差异均有统计学意义；双荧光素酶报告实验证实CDKN2BAS靶向抑制miR-98-5p的表达；与si-CDKN2BAS＋anti-miR-con组比较，si-CDKN2BAS＋anti-miR-98-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显增强(t＝4.546、10.682、5.648，P<0.05)，细胞凋亡能力明显减弱(t＝6.996，P<0.05)，差异均有统计学意义。结论lncRNA CDKN2BAS通过靶向负调控miR-98-5p的表达影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-155对骨肉瘤细胞生长的影响及其作用机制。方法正常成骨细胞作为对照组，骨肉瘤细胞作为实验组。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测骨肉瘤细胞株(n＝4)中miRNA的表达量。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和蛋白质印迹法(Western blot)观察miRNA对骨肉瘤细胞增殖生存能力的影响和调节机制。两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。结果Real-time PCR结果显示，miR-155在骨肉瘤细胞株U2OS，Saos-2和MG-63中的表达量分别为5.10±0.32、6.82±0.48及10.12±0.39，显著高于其对照组正常成骨细胞hFOB1.19的表达量(1.01±0.13，t＝13.1000，P<0.01)，差异有统计学意义；CCK-8结果表明，与阴性对照组(0.37±0.02、0.58±0.02、0.80±0.04)比较，在转染miR-155后48、72、96 h，MG-63细胞的A值分别是0.49±0.03、0.77±0.03、0.93±0.02，其增殖能力明显增强(t＝11.200，P<0.05)，差异有统计学意义；流式细胞术检测结果表明，过表达miR-155组中MG-63的凋亡率为(0.90±0.13)%，明显低于阴性对照组中的凋亡率[(5.92±0.80)%，t＝17.900，P<0.05]，差异有统计学意义；此外，通过靶基因预测软件、结合Western blot显示miR-155可能通过转录后水平调节MAP3K10的表达。结论miR-155在骨肉瘤组织中高表达且可促进骨肉瘤细胞的增殖。

简介：摘要目的观察骨肉瘤中环状RNA circ_0052012表达和沉默环状RNA circ_0052012表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测2017年10月至2018年12月郑州大学第一附属医院确诊的31对骨肉瘤标本癌组织和癌旁正常组织circ_0052012表达水平。使用针对circ_0052012的小干扰RNA(siRNA)转染骨肉瘤细胞系MG63，将体外培养的MG63细胞分为空白组(未转染)、阴性对照组(转染阴性对照si-NC)和沉默组(转染si-circ)。采用细胞增殖实验和Transwell实验，检测沉默RNA circ_0052012表达对MG63细胞增殖和侵袭的影响。采用生物信息学方法预测circ_0052012与微小RNA(miRNA，miR)-7的结合位点，利用双荧光素酶报告实验、RT-qPCR技术和Pearson相关分析，验证circ_0052012对miR-7的靶向调控作用及其在骨肉瘤中表达水平的相关性。两组间数据比较采用t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果骨肉瘤组织中circ_0052012的表达水平显著高于对应癌旁正常组织，差异有统计学意义(2.452±1.061比1.007±0.644，t＝10.180，P<0.01)，且circ_0052012表达水平与骨肉瘤TNM分期、远处转移呈明显正相关(P<0.05)。在骨肉瘤细胞系MG63中，培养24、48、72 h后，circ_0052012沉默组细胞的增殖(0.297±0.012、0.607±0.074、0.797±0.067)均明显低于空白对照组(0.407±0.035、0.820±0.070、1.287±0.050)和阴性对照组(0.383±0.012、0.853±0.064、1.240±0.092)，差异有统计学意义(24 h，t＝-5.154、-9.192，P<0.01；48 h，t＝-3.635、-4.391，P<0.05；72 h，t＝-10.170、-6.778，P<0.01)。沉默组细胞的侵袭能力(39.400±6.066)也明显低于空白对照组(132.600±8.620)和阴性对照组(126.000±10.950)，差异有统计学意义(t＝-19.770、-15.460，P<0.01)。双荧光素酶报告实验证实circ_0052012与miR-7靶向结合，且在骨肉瘤组织中的表达呈明显负相关(r＝-0.661，P<0.05)。通过抑制miR-7，可部分逆转沉默circ_0052012对MG63细胞增殖和侵袭的抑制作用。结论在骨肉瘤细胞中，沉默circ_0052012可通过上调miR-7表达，抑制细胞的增殖和侵袭。

简介：摘要目的探究微小RNA-144(miR-144)在对2型糖尿病骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨能力的影响。方法构建2型糖尿病大鼠模型，并从中提取出BMSCs，在高糖骨诱导培养基下，将细胞分组为miR-144-mimic、mimic-NC、miR-144-inhibitor以及inhibitor-NC组，分别通过蛋白印迹法(Western blot)及荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组细胞中成骨相关基因Runt相关基因2(Runx2)、OCN、碱性磷酸酶(ALP)以及通路蛋白Smad1的蛋白及mRNA水平，采用生物信息学技术及双荧光素酶报告基因实验验证miR-144对Smad1的靶向调控作用，并通过ALP活性检测和茜素红染色评估miR-144对细胞成骨分化程度的影响。两组间用独立样本t检验，两组以上的比较采用方差分析。结果miR-144在miR-144 mimic组中表达水平(2.24±0.32)明显高于mimic-NC组(1.12±0.08)，两组间差异有统计学意义(t＝9.225，P<0.01)；而在miR-144 inhibitor表达水平(0.27±0.18)较inhibitor-NC组(0.96±0.10)明显下降，差异有统计学意义(t＝8.242，P<0.01)。在高糖骨诱导培养基培养7 d后，miR-144 mimic组细胞中Smad1、Runx2、OCN及ALP基因的mRNA水平及蛋白水平均明显低于mimic-NC组，差异有统计学意义(P均<0.05)；相反，在抑制miR-144表达的miR-144 inhibitor组中，Smad1、Runx2、OCN及ALP基因的mRNA水平均较inhibitor-NC组升高，差异有统计学意义(P均<0.01)。生物信息学技术及双荧光素酶报告基因实验表明，miR-144可以靶向抑制Smad1表达，ALP活性检测结果显示，miR-144 mimic组的吸光度值(0.452±0.132)低于mimic-NC组(1.052±0.180)，差异有统计学意义(t＝7.983，P<0.01)，而miR-144 inhibitor组的吸光度值(1.426±0.153)则明显高于inhibitor-NC组(1.024±0.084)，差异有统计学意义(t＝10.181，P<0.01)。茜素红染色结果显示，miR-144 mimic组的光度值(0.945±0.098)低于mimic-NC组(1.152±0.088)，差异有统计学意义(t＝2.823，P<0.05)，而miR-144 inhibitor组的吸光度值(2.836±0.121)则明显高于inhibitor-NC组(1.322±0.065)，差异有统计学意义(t＝12.037，P<0.01)。结论miR-144可能通过靶向结合Smad1对糖尿病大鼠BMSCs的成骨分化起抑制作用。