简介：摘要目的观察吞噬和运动蛋白3(ELMO3)在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系，探讨ELMO3对胰腺癌细胞增殖及迁移侵袭能力的影响。方法选取郑州大学附属洛阳中心医院病理科2011年3月至2019年2月存档的蜡块，免疫组织化学法测定ELMO3在49例胰腺癌及相应癌旁组织中表达，分析其与胰腺癌临床病理特征及预后间的关系。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测胰腺癌细胞株PANC-1、SW1990、BXPC-3及正常胰腺导管上皮细胞株HPDE6c-7中ELMO3 mRNA表达。胰腺癌细胞株PANC-1重组腺病毒转染ELMO3短发卡RNA(shRNA)沉默基因，RT-qPCR检测转染。细胞计数试剂盒(CCK-8)法及平板克隆实验检测PANC-1细胞增殖能力及克隆形成能力，细胞划痕试验及Transwell实验检测细胞体外迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测PANC-1细胞株中细胞核增殖抗原(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达。采用单因素方差分析，组内比较采用LSD-t检验，组间比较采用配对或成组χ2检验。结果ELMO3在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织(73.5%比26.5%，χ2＝6.773，P<0.05)，其阳性表达与胰腺癌患者性别、年龄及肿瘤部位无相关(χ性别2＝0.131，χ年龄2＝1.838，χ肿瘤部位2＝0.490，P值均>0.05)，而与胰腺癌TNM分期、分化程度及肿瘤大小明显相关(χTNM分期2＝4.410，χ分化程度2＝11.769，χ肿瘤大小2＝7.762，P值均<0.05)。ELMO3阳性表达的胰腺癌患者中位生存期(MST)明显低于阴性表达者(8.203个月比19.337个月，χ2＝10.253，P<0.05)。3种胰腺癌细胞株中ELMO3表达水平分别为21.33±0.67、17.65±0.31、16.28±0.47，均高于HPDE6c-7细胞株中的2.01±0.10(FPANC-1＝45.069，FSW1990＝22.824，FBXPC-3＝19.477，P值均<0.05)，转染后PANC-1细胞内ELMO3表达量显著下降，细胞增殖能力、克隆形成能力及迁移侵袭能力均明显下降(P值均<0.05)，且Ki-67、PCNA蛋白表达水平显著降低，而Caspase-3表达量却明显增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ELMO3在胰腺癌中表达上调，其高表达提示胰腺癌患者预后不良。沉默ELMO3可抑制胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭。

简介：摘要目的观察chr14∶101402109-101464448C在胰腺癌组织、血清中的表达，分析其与患者临床病理特征间的相关性，观察其对胰腺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测60例胰腺癌组织及血清中chr14∶101402109-101464448C表达，LSD-t检验分析其表达差异，χ2检验分析其与患者临床病理因素间的相关性。计算chr14∶101402109-101464448C诊断胰腺癌的敏感性、特异性和准确率。受试者工作特征(ROC)曲线分析其作为胰腺癌诊断分子标志物的效能。RT-qPCR法检测胰腺癌细胞株(BxPC-3、Capan-1、PANC-1、AsPC-1、HPAC)与正常胰腺导管上皮细胞株HPDE中chr14∶101402109-101464448C的表达，单因素方差分析其表达差异，分别构建chr14∶101402109-101464448C过表达组、对照组(pEX-NC组)的PANC-1细胞株及敲减组、对照组(si-NC组)的BxPC-3细胞株，RT-qPCR检测转染情况；噻唑蓝(MTT)法、平板克隆实验检测各细胞增殖及克隆形成；细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力，采用LSD-t检验或秩和检验进行统计分析。结果chr14∶101402109-101464448C在胰腺癌组织及血清中表达水平分别高于癌旁正常组织及健康者血清(12.88±0.29比1.01±0.20，9.79±0.11比0.99±0.11)，差异有统计学意义(t组织＝27.38，t血清＝64.84，均P<0.05)，其表达与患者年龄、性别、病理学类型、肿瘤部位无明显相关(χ年龄2＝0.221，χ性别2＝0.009，χ病理类型2＝0.044，χ肿瘤部位2＝0.192，均P>0.05)，但与肿瘤大小、CA19-9水平、肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移显著相关(χ肿瘤大小2＝4.706，χCA19-92＝9.706，χ分化程度2＝6.899，χ淋巴结转移2＝4.252，均P<0.05)。chr14∶101402109-101464448C检测胰腺癌的敏感度、特异性和准确率分别为78.3%(47/60)、70.0%(42/60)及81.7%(49/60)，均高于CA19-9(均P<0.05)，其作为诊断胰腺癌分子生物标志物的ROC曲线下面积为0.939[95%可信区间(CI)：0.893~0.985，P<0.01]。各胰腺癌细胞株中chr14∶101402109-101464448C表达水平均明显高于HPDE细胞株(5.97±0.12、5.77±0.20、5.08±0.14、5.71±0.09、5.70±0.10比1.00±0.06，FBxPC-3＝3.009，FCapan-1＝7.786，FPANC-1＝4.115，FAsPC-1＝1.072，FHPAC＝2.566，均P<0.05)。成功构建过表达的PANC-1细胞株(pEX-chr14∶101402109-101464448C)及敲减表达的BxPC-3细胞株(si-chr14∶101402109-101464448C)，前者的细胞增殖、克隆、侵袭及迁移能力均显著高于pEX-NC组(均P<0.05)，而后者却较si-NC组均显著降低(均P<0.05)。结论chr14∶101402109-101464448C在胰腺癌中高表达，且与患者临床病理特征相关，沉默chr14∶101402109-101464448C可抑制胰腺癌细胞增殖及侵袭转移。

简介：摘要目的观察细丝蛋白A(FLNa)在人原发性肝细胞癌中的表达，探究其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法采用免疫组织化学法及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测70例原发性肝癌及对应癌旁组织中FLNa表达，分析其与患者临床病理特征及预后间的相关性；RT-qPCR法检测不同肝癌细胞株(SMMC-7721、HepG2、HCCLM3、Huh7、PLC/PRF/5、Hep3B)与正常肝脏细胞株HL-7702中FLNa mRNA表达。慢病毒转染法构建过表达FLNa的Hep3B细胞株，RT-qPCR检测转染；噻唑蓝(MTT)法、平板克隆实验、Transwell实验检测细胞增殖、克隆及侵袭迁移能力变化；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白酶(p-p38MAPK)表达，采用单因素方差分析、χ2检验、LSD-t检验或秩和检验对上述所得数据进行统计分析。结果肝癌组织中FLNa阳性表达率低于癌旁组织(14.3%比81.4%，χ2＝9.725，P<0.05)，FLNa在肝癌组织中表达水平明显低于癌旁正常组织(3.13±1.02比22.01±2.38，t＝6.520，P<0.05)，其表达与肿瘤大小、TNM分期、肿瘤分化程度、脉管浸润及淋巴结转移有关(χ2肿瘤大小＝6.400，χ2分化程度＝10.850，χ2脉管浸润＝4.055，χ2淋巴结转移＝7.256，均P<0.05)，但与性别、年龄、肿瘤部位及AFP水平无明显相关(χ2性别＝0.000，χ2年龄＝0.010，χ2肿瘤部位＝0.038，χ2AFP＝3.276，均P>0.05)。FLNa阳性表达患者中位生存期显著高于阴性表达者(23.3个月比10.3个月，P<0.05)。各肝癌细胞株中FLNa表达量均低于HL-7702细胞株(1.95±0.45、1.90±0.58、1.89±0.72、1.99±0.10、1.90±0.49、1.81±0.17比14.08±2.52，FSMMC-7721＝4.120，FHepG2＝4.774，FHCCLM3＝4.655，FHuh7＝4.987，FPLC/PRF/5＝3.735，FHep3B＝5.094，均P<0.05)。过表达FLNa的Hep3B细胞增殖、克隆及侵袭迁移能力显著降低，ERK2、MMP-9、p-p38MAPK表达明显下降(均P<0.05)。结论FLNa在人原发性肝癌中低表达，过表达FLNa可通过抑制MAPK/ERK信号通路活化而抑制肝癌细胞恶性生物学行为。