简介：摘要近年来，大量研究提出中性粒细胞CD64可作为一项新的非特异性炎症检测指标，其在临床感染早期诊断、炎症反应严重程度判断和预后评估中的价值优于其他生物学标志物。现综述中性粒细胞CD64检测方法及其在感染性疾病诊断中的应用现状，并与其他炎症指标进行比较。

简介：摘要目的分析CD100对非小细胞肺癌(NSCLC)患者单核细胞杀伤功能的影响。方法入组2018年3—9月份在郑州中心医院就诊的35例NSCLC患者(NSCLC组)和13例健康对照者(对照组)。分离肺癌组外周血单个核细胞(PBMC)和肿瘤部位、非肿瘤部位的支气管肺泡灌洗液(BALF)及对照组PBMC，纯化PBMC和BALF中的单核细胞，流式细胞术检测单核细胞中膜结合型CD100(mCD100)和CD72表达。使用重组人CD100、抗CD72、重组人基质金属蛋白酶14 (MMP14)或抗CD100抗体刺激NSCLC组肿瘤部位纯化的单核细胞，与NCI-H1882细胞共培养后检测靶细胞死亡比例，培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、颗粒酶A、颗粒酶B表达，单核细胞中CD16表达。组间比较采用t检验或配对t检验。结果外周血CD14+mCD100+细胞比例、CD14+CD72+细胞比例、CD100平均荧光强度(MFI)、CD72 MFI在NSCLC组和对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)，NSCLC组肿瘤部位CD14+mCD100+细胞比例、CD14+CD72+细胞比例、CD100 MFI、CD72 MFI均显著高于非肿瘤部位(P<0.05)。NSCLC组和对照组外周血纯化的单核细胞诱导NCI-H1882细胞死亡比例的差异无统计学意义[(13.95±3.16)%比(13.22±2.40)%，P＝0.451]，但肿瘤部位纯化的单核细胞诱导NCI-H1882细胞死亡比例低于非肿瘤部位的单核细胞[(11.61±2.81)%比(14.19±3.57)%，P＝0.008 7]，肿瘤部位单核细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平均低于非肿瘤部位单核细胞(P<0.05)，单核细胞中CD16水平在两组间的差异无统计学意义(P＝0.666)。重组人CD100刺激肿瘤部位纯化的单核细胞后，其诱导NCI-H1882细胞死亡的比例高于无刺激细胞(P<0.000 1)，TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平亦高于无刺激细胞(P<0.05)，而抗CD72预处理的单核细胞再使用重组人CD100刺激，其诱导NCI-H1882细胞死亡比例和TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平均低于重组人CD100刺激的单核细胞(P<0.05)。重组人MMP14刺激肿瘤部位纯化的单核细胞后，CD14+mCD100+比例降低，可溶型CD100(sCD100)水平升高，其诱导NCI-H1882细胞死亡的比例和TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平高于无刺激单核细胞(P<0.05)。加入抗CD100后，sCD100水平低于MMP14刺激的单核细胞，其诱导NCI-H1882细胞死亡的比例和TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平低于MMP14刺激的单核细胞(P<0.05)。结论NSCLC患者肿瘤部位浸润单核细胞CD100脱落不全，导致单核细胞杀伤功能下降，MMP14可能通过促进mCD100脱落和sCD100生成提高肿瘤部位浸润单核细胞的杀伤功能。

简介：摘要目的探讨人自然杀伤（NK）细胞在CD137抗体作用下通过抗体依赖性细胞毒性作用（ADCC）介导对乳腺癌细胞的杀伤作用。方法NK细胞表型和细胞因子检测实验分组：阴性对照组（未用人CD137抗体处理的NK细胞）、CD137抗体处理组（10 μg/mL人CD137抗体处理4 h的NK细胞）；NK细胞毒性检测实验分组：根据体系中是否添加NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗分为8组。流式细胞术检测两组NK细胞表面CD16分子的表达情况，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测两组NK细胞培养上清液中干扰素（IFN）-γ和肿瘤坏死因子（TNF）-α的浓度，乳酸脱氢酶（LDH）法检测8组反应体系中表皮生长因子受体（EGFR）高表达乳腺癌细胞系MDA-MB-231和EGFR低表达乳腺癌细胞系MDA-MB-453的杀伤比例，并采用t检验或析因分析进行统计学分析。结果与阴性对照组比较，CD137抗体处理组CD16+NK细胞比例（79.57﹪ ±0.92﹪比90.43﹪±0.67﹪）、细胞因子IFN-γ浓度[（388.90±7.02） pg/ mL比（523.90±1.90）pg/ mL]和TNF-α浓度[（20.59±4.09）pg/mL比（47.22±2.14）pg/mL]均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）；MDA-MB-231细胞杀伤的三因素析因分析结果显示：NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗3个因素分别对MDA-MB-231细胞的杀伤都有作用（F = 5227.276、201.473、1792.242，P均< 0.001），3个因素两两之间的交互作用对MDA-MB-231细胞的杀伤也都有作用（F =183.903、1517.187、33.483，P均< 0.001），3个因素的二级交互作用差异有统计学意义（F = 41.505，P < 0.001）。结论人CD137抗体可增强NK细胞分泌细胞毒性因子IFN-γ和TNF-α的能力，同时可上调NK细胞表面CD16分子的表达，从而使得NK细胞可能通过西妥昔单抗介导的ADCC作用增强对表皮生长因子受体（EGFR）高表达乳腺癌细胞的杀伤作用。

简介：摘要目的分析人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染，以及共感染患者的CD8+T细胞耗竭状态。方法纳入2019年8月至2020年1月无锡市第五人民医院和太仓市第一人民医院所收治的HIV感染和(或)MTB感染患者87例，其中HIV感染18例，活动性结核(active tuberculosis, ATB)34例，潜伏性结核(latent tuberculosis, LTB)19例，HIV感染合并ATB 7例，HIV感染合并LTB 9例，同时纳入11名健康对照者。收集所有受试者的外周血，进行全血细胞表面染色和细胞内染色，使用流式细胞术检测CD8+T细胞上的活化分子CD62配体、CD44、CD127，转录因子脱中胚蛋白(eomesodermin, EOMES)、T细胞因子1(T cell factor 1, TCF-1)、T盒转录因子(T-box expressed in T cells, T-bet)、B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(B lymphocyte-induced maturation protein 1, Blimp-1)，抑制性受体程序性死亡蛋白-1(programmed death-1, PD-1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T-cell immunoglobulin and mucin domain 3, Tim-3)的表达情况。统计学分析采用曼-惠特尼U检验。结果HIV感染组活化分子CD62配体、CD44的平均荧光强度(mean fluorescence intensity，MFI)低于健康对照组，而抑制性受体Tim-3则高于健康对照组，差异均有统计学意义(U＝31.00、1.00、0.00，均P<0.010)；HIV感染合并LTB组CD62配体、CD44的MFI低于LTB组，而PD-1、Tim-3则高于LTB组，差异均有统计学意义(U＝4.00、26.00、6.00、3.00，均P<0.010)；HIV感染合并ATB组CD62配体、CD44、CD127的MFI低于ATB组，而PD-1、Tim-3则高于ATB组，差异均有统计学意义(U＝9.00、40.00、45.50、28.00、7.00，均P<0.010)。HIV感染组的终末效应CD8+T细胞表达水平高于健康对照组，而中枢记忆CD8+T细胞则低于健康对照组，差异均有统计学意义(U＝15.00、33.00，均P<0.010)；HIV感染合并LTB组的终末效应CD8+T细胞表达水平高于LTB组，而中枢记忆CD8+T细胞低于LTB组，差异均有统计学意义(U＝7.00、20.00，均P<0.010)；HIV感染合并ATB组的终末效应CD8+T细胞高于ATB组，而中枢记忆CD8+T细胞低于ATB组，差异均有统计学意义(均U＝7.00，P<0.001)。HIV感染组PD-1+Tim-3+T细胞的表达水平高于健康对照组，HIV感染合并LTB组PD-1+Tim-3+T细胞的表达水平高于LTB组，HIV感染合并ATB组PD-1+Tim-3+T细胞的表达水平高于ATB组，差异均有统计学意义(U＝21.00、6.00、5.50，均P<0.001)。HIV感染合并LTB组的转录因子EOMES和TCF-1的MFI低于HIV感染组，而T-bet的MFI则高于HIV感染组，差异均有统计学意义(U＝3.00、4.00、9.00，均P<0.001)；HIV感染合并ATB组的转录因子EOMES和TCF-1的MFI低于HIV感染组，而T-bet和Blimp-1的MFI则高于HIV感染组，差异均有统计学意义(U＝11.00、14.00、7.00、22.00，均P<0.050)。结论合并HIV感染的MTB感染患者其免疫功能更为低下，CD8+T细胞耗竭程度更高。此外，合并LTB和ATB感染的HIV感染者较单纯HIV感染者的CD8+T细胞耗竭程度更高。

简介：摘要目的探讨免疫抑制受体T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain，TIGIT)在硅沉着病合并结核分枝杆菌感染人群外周血单个核细胞上的表达及临床意义。方法2018年8月，纳入78例硅沉着病患者，均为浙江省三门县采石矿工人，分为硅沉着病合并活动性肺结核(active pulmonary tuberculosis，APTB)组(以下简称APTB组)、硅沉着病合并结核潜伏感染(latent tuberculosis infection，LTBI)组(以下简称LTBI组)和单纯硅沉着病无结核感染(non-tuberculosis infection，non-TB)组(以下简称non-TB组)。应用流式细胞术检测患者外周血单个核细胞中TIGIT、程序性死亡蛋白-1(programmed death-1，PD-1)和转录因子T-bet的表达水平。统计学分析采用曼-惠特尼U检验、皮尔逊相关性分析。结果78例患者中，APTB组8例，LTBI组24例，non-TB组46例。APTB组患者外周血CD8+T细胞上PD-1和TIGIT[29.45%(16.78%)和65.40%(12.12%)]的表达水平分别高于LTBI组[17.40%(11.17%)和48.30%(28.75%)，U＝23.500、43.500，P＝0.000 8、0.020 5]和non-TB组[15.95%(12.46%)和45.30%(19.75%)，U＝64.000、69.000，P＝0.002 3、0.003 8]，差异均有统计学意义；硅沉着病患者外周血CD8+T细胞上PD-1与TIGIT的表达呈正相关(r＝0.434 3，P<0.01)。APTB组患者外周血CD8+T细胞上PD-1+TIGIT+细胞亚群的表达[19.90%(22.67%)]高于non-TB组[11.55%(11.29%)]和LTBI组[11.55%(10.53%)]，PD-1-TIGIT-细胞亚群[30.60%(12.90%)]的表达低于non-TB组[48.90%(18.98%)]和LTBI组[47.20%(24.95%)]，差异均有统计学意义(U＝76.500、41.000、58.000、41.000，P＝0.007 1、0.015 4、0.001 3、0.015 4)。APTB组患者外周血CD8+T细胞上T-bet[29.45%(16.78%)]的表达高于non-TB组[15.95%(12.46%)]和LTBI组[17.40%(11.17%)]，差异均有统计学意义(U＝46.500、46.000，P＝0.000 3、0.028 3)。T-bet的表达与TIGIT的表达呈正相关(r＝0.456 7，P<0.01)。APTB组患者外周血PD-1+TIGIT+CD8+T细胞亚群上T-bet[65.40%(12.12%)]的表达水平分别高于LTBI组[48.30%(28.75%)]和non-TB组[45.30%(19.75%)]，差异均有统计学意义(U＝23.500、65.000，P＝0.000 8、0.002 6)。结论硅沉着病合并APTB患者外周血CD8+T细胞上高表达免疫抑制受体PD-1和TIGIT，提示患者外周血CD8+T细胞存在免疫耗竭现象，但T-bet的高表达又提示此耗竭细胞亚群具有一定的可逆转潜力。

简介：摘要目的探讨胸腔积液中白细胞介素-22(interleukin-22，IL-22)、γ干扰素和巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibition factor，MIF)检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法2018年4月至2019年5月于无锡市第五人民医院连续入选77例有胸腔积液的患者，其中结核性胸膜炎患者45例，恶性胸膜炎患者19例，类肺炎性患者13例。另选同期患者家属13名作为健康对照。应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测胸腔积液和血浆中IL-22、γ干扰素和MIF水平。统计学处理采用Mann-Whitney U检验，采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC曲线)下面积评价IL-22、γ干扰素和MIF水平对结核性胸膜炎的诊断价值。结果45例结核性胸膜炎患者胸腔积液中IL-22、γ干扰素、MIF和腺苷脱氨酶(adenosine deaminase, ADA)的中位数分别为396.8 ng/L、2 200.0 ng/L、241.3 μg/L和70.8 U/L，分别高于32例非结核性胸膜炎患者(含恶性胸膜炎患者19例，类肺炎性患者13例)的52.8 ng/L、232.3 ng/L、179.6 μg/L和17.0 U/L，差异均有统计学意义(U＝179.000、118.500、287.000、162.000，均P<0.05)。结核性胸膜炎患者血浆中IL-22和γ干扰素的中位数分别为20.0 ng/L和45.9 ng/L，分别高于健康对照者的14.3 ng/L和33.4 ng/L，而MIF水平为96.2 μg/L，低于健康对照者的159.5 μg/L，差异均有统计学意义(U＝74.000、13.000、73.000，均P<0.05)。胸腔积液中IL-22、γ干扰素和MIF诊断结核性胸膜炎的ROC曲线下面积分别为0.876、0.917和0.682，灵敏度分别为93.75%、100.00%和63.64%，特异度分别为82.22%、91.11%和65.85%。抗结核治疗2个月后结核性胸膜炎患者血浆中IL-22和γ干扰素的中位数分别为16.0 ng/L和33.9 ng/L，分别低于治疗前的20.0 ng/L和44.7 ng/L,差异均有统计学意义(U＝2.156、2.221，均P<0.05)。结论胸腔积液中γ干扰素和IL-22可用于诊断结核性胸膜炎，动态监测患者血浆中的IL-22水平可作为评价抗结核治疗效果的重要指标。

简介：摘要目的探讨糖蛋白A为主重复序列蛋白(glycoprotein A repetitions predominant，GARP)通过调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)参与调控结核病发病的作用，以期为结核病治疗提供新靶点。方法纳入2021年1月至9月复旦大学附属华山医院和无锡市第五人民医院收治的60例活动性肺结核患者，同时招募6例结核潜伏感染患者和16名健康对照者。应用流式细胞术检测入组对象外周血淋巴细胞中Treg的占比，以及Treg上GARP和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)的表达。统计学分析采用曼-惠特尼U检验。结果60例活动性肺结核患者中，23例未进行抗结核药物治疗，17例患者治疗<3个月，10例患者治疗3～<6个月，10例患者治疗≥6个月。活动性肺结核未治疗组CD4+CD25+叉头样转录因子3(forkhead box protein 3，Foxp3)+Treg占外周血淋巴细胞总数的7.50%(5.67%, 9.00%)，高于健康对照组的5.57%(5.03%，6.09%)，差异有统计学意义(U＝95.00, P＝0.010)。活动性肺结核未治疗组中，表达GARP的CD4+CD25+Foxp3+ Treg占CD4+CD25+Foxp3+ Treg总数的10.37%(7.79%，12.90%)，分别高于结核潜伏感染组的7.02%(5.15%，8.81%)和健康对照组的5.33%(4.26%，6.67%)，差异均有统计学意义(U＝31.00，P＝0.040；U＝36.00，P<0.001)；而结核潜伏感染组与健康对照组之间差异无统计学意义(U＝25.00，P＝0.095)。活动性肺结核未治疗组中，表达TGF-β1的CD4+CD25+Foxp3+ Treg占Treg总数的7.13%(4.25%，8.89%)，高于健康对照组的3.59%(2.10%，5.17%)，差异有统计学意义(U＝71.00，P＝0.001)。抗结核治疗<3个月组、治疗3～<6个月组、治疗≥6个月组活动性肺结核患者的CD4+CD8－CD25+Foxp3+Treg中GARP的表达量分别为7.82%(3.94%，13.17%)、6.92%(5.61%，9.47%)和7.26%(5.82%，9.64%)；3组中在CD4+CD8－CD25+Foxp3+Treg中TGF-β1表达量分别为11.16%(7.91%，15.23%)、8.66%(5.43%，12.54%)和7.82%(6.01%，9.53%)，其中治疗<3个月组TGF-β1的表达量高于治疗≥6个月组，差异有统计学意义(U＝37.50，P＝0.024)。结论Foxp3/GARP/TGF-β1通路可能参与Treg调控结核病发病的免疫机制，GARP有可能成为抗结核治疗的新型靶点。