摘要
摘要目的研究下调丝氨酸消旋酶(SRR)缓解β-淀粉样蛋白(Aβ)对PC12细胞的神经毒性、突触损伤作用及其可能机制。方法(1)将体外培养的PC12细胞分为0、20、40、80 μmol/L Aβ25-35组，分别加入0、20、40、80 μmol/L Aβ25-35作用24 h，采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞存活率，采用Western blotting实验检测细胞SRR蛋白的表达。用40 μmol/L Aβ25-35分别处理PC12细胞0、12、24、48 h，采用CCK-8法、Western blotting实验分别检测细胞存活率、SRR蛋白的表达。(2)将PC12细胞分为对照组、无义序列组、SRR小干扰RNA(siRNA) 1组、SRR siRNA 2组、SRR siRNA 3组，后4组细胞分别转染SRR无义序列或不同SRR siRNA序列，48 h后采用Western blotting实验检测细胞SRR蛋白的表达，选择效果最佳的SRR siRNA用于后续实验。(3)将PC12细胞分为对照组、AD组、AD+无义序列组、AD+SRR siRNA组，后2组细胞分别瞬时转染无义序列或SRR siRNA，作用48 h，后3组细胞均加入40 μmol/L Aβ25-35，对照组加入等量溶剂。处理24 h后采用Western blotting实验检测细胞SRR蛋白的表达，CCK-8法检测细胞存活率，Hoechst 33258染色检测细胞凋亡，ELISA法检测细胞半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)活性，Western blotting实验检测细胞活化Caspase 3、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体相关蛋白、突触后致密蛋白95(PSD95)的表达。结果(1)0、20、40、80 μmol/L Aβ25-35组细胞存活率依次降低，SRR蛋白的表达依次增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。40 μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞0、12、24、48 h后细胞存活率依次降低，SRR蛋白的表达依次增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)SRR siRNA 1组、SRR siRNA 2组、SRR siRNA 3组细胞SRR蛋白的表达均低于对照组和无义序列组，差异均有统计学意义(P<0.05)，其中SRR siRNA 2组降低最明显。(3)与对照组比较，AD组细胞SRR蛋白的表达、细胞凋亡率升高，细胞存活率降低，Caspase 3活性和活化Caspase 3蛋白表达升高，NMDA受体2A(NMDAR2A)和NMDA受体2B(NMDAR2B)蛋白的表达升高，PSD95蛋白的表达降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。与AD组比较，AD+SRR siRNA组细胞SRR蛋白的表达、细胞凋亡率降低，细胞存活率升高，Caspase 3活性和活化Caspase 3蛋白表达降低，NMDAR2A蛋白的表达降低，PSD95蛋白的表达升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论下调SRR可通过降低PC12细胞内NMDAR2A蛋白表达，缓解细胞NMDA受体的过度激活，减少细胞凋亡，提高细胞存活率，保护Aβ25-35损伤的神经细胞，还可以升高PSD95蛋白的表达，缓解突触损伤。
出版日期
2022年12月13日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
