摘要
摘要目的探讨Bmal1对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其相关机制。方法选择健康雄性清洁级SD大鼠65只，采用数字表法随机纳入非糖尿病假手术组（N-S组）10只、非糖尿病缺血再灌注组（N-I/R组）10只、非糖尿病+SR8278缺血再灌注组（NS-I/R组）10只；剩余35只采用高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素方法制备2型糖尿病模型，取造模成功的大鼠30只，采用数字表法随机分为糖尿病假手术组（DM-S组）、糖尿病缺血再灌注组（DM-I/R组）、糖尿病+SR8278缺血再灌注组（DMS-I/R组），每组10只。6组大鼠按观察项目不同随机分为A、B亚组，每组5只。各组大鼠制备心肌缺血再灌注模型，其中N-S组和DM-S组仅模拟手术过程，不结扎前降支；NS-I/R组、DMS-I/R组大鼠于心肌缺血再灌注模型制备前7天开始腹腔注射孤儿核受体Rev-erbα拮抗剂SR8278（50 mg/kg），每天1次×7 d。心肌缺血再灌注模型成功后维持灌注24 h，取各组A亚组大鼠，分离出左心室行病理染色检查和心肌超微结构透射电镜观察，分离左心室后的心脏制备病理切片进行心肌梗死灶体积的测定；各组B亚组大鼠，取心尖区心肌组织行Western blot测定心肌Bmal1、Sirt3、Nlrp3及Bnip3蛋白的表达。结果（1）N-S组和DM-S组未见心肌梗死灶，N-I/R组、NS-I/R组、DM-I/R组、DMS-I/R组心肌梗死灶体积分别为（0.48±0.08）cm3、（0.34±0.05）cm3、（0.65±0.06）cm3、（0.46±0.06）cm3。与N-I/R组比较，NS-I/R组心肌梗死灶体积较小，DM-I/R组较大，差异均有统计学意义（P值均<0.05）；与NS-I/R组比较，DM-I/R组、DMS-I/R组心肌梗死灶体积均较大，差异均有统计学意义（P值均<0.05）；与DM-I/R组比较，DMS-I/R组心肌梗死灶体积较小，差异有统计学意义（P<0.05）。（2）心肌组织病理检查：N-S组心肌组织结构完整，心肌细胞排列整齐、致密，细胞质染色均匀；DM-S组心肌纤维排列稍紊乱，细胞质有轻度的肿胀，可见轻度炎性细胞浸润；N-I/R组细胞形态不规则，心肌纤维排列紊乱或断裂，细胞质有不同程度的肿胀甚至破裂，胞核排列不齐、碎裂和溶解；DM-I/R组心肌病理损伤程度较N-I/R组更重，心肌纤维断裂，心肌细胞崩解，细胞核溶解，染色加深，可见大量炎细胞浸润。与N-I/R组和DM-I/R组相比，NS-I/R组和DMS-I/R组心肌细胞形态和心肌纤维排列有所恢复，炎性细胞浸润大大减少。（3）电子显微镜下心肌组织超微结构：N-S组线粒体形态及数量正常，未见自噬体；DM-S组较N-S组出现自噬小体；N-I/R组心肌细胞中正常线粒体数量减少，线粒体明显肿胀并含有大量自噬体，一些自噬体显示出封装未降解的线粒体结构和残留的细胞成分。与N-I/R组相比，NS-I/R组线粒体结构较完整，线粒体轻度肿胀，损伤较轻；DM-I/R组线粒体嵴结构异常，线粒体嵴分隔、肿胀和溶解，线粒体面积/周长比增加，线粒体自噬功能受损，自噬体增加。与DM-I/R组比较，DMS-I/R组肌纤维排列较为整齐，线粒体中结构异常的线粒体嵴减少，自噬体数量减少。（4）心肌组织Bmal1、Sirt3、Nlrp3及Bnip3蛋白表达水平。与N-S组比较，N-I/R组、NS-I/R组、DM-S组、DM-I/R组、DMS-I/R组Bmal1、Sirt3蛋白的表达呈下降趋势，Nlrp3、Bnip3蛋白的表达呈上升趋势，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。与DM-S组比较，DM-I/R组Bmal1、Sirt3蛋白表达下调，Nlrp3、Bnip3蛋白表达上调；DMS-I/R组Nlrp3蛋白表达下调，Bnip3蛋白表达上调：差异均有统计学意义（P值均<0.05）。与DM-I/R组比较，DMS-I/R组Bmal1、Sirt3、Bnip3蛋白表达上调，Nlrp3蛋白表达下调，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。结论Bmal1在大鼠糖尿病心肌缺血再灌注损伤中对心肌有保护作用，其保护机制可能与激活Sirt3途径诱导线粒体自噬和抑制炎性反应有关。
出版日期
2022年12月13日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
