摘要
摘要目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)源性外泌体中微小RNA(miR)-25参与促进食管癌细胞转移的作用及机制。方法获取新鲜食管癌及癌旁组织，通过贴壁法分别获得CAFs和成纤维细胞(NFs)，蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达进行鉴定。用超速离心法提取CAFs和NFs的外泌体，用Western blot和透射电镜对外泌体进行鉴定，采用荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测食管癌组织和癌旁组织中miR-25的表达，结果用配对样本t检验进行统计学分析。同时用RT-qPCR检测CAFs、NFs和相应外泌体，以及外泌体共培养的食管癌TE-1中miR-25的表达，并将外泌体与TE-1共培养后检测TE-1迁移侵袭能力。Western blot及荧光素酶实验明确miR-25的靶基因，结果用非配对样本t检验进行统计学分析。结果RT-qPCR结果提示，与癌旁组织比较，食管癌组织中高表达miR-25(n＝30，t＝ 3.46，P<0.05)；miR-25在CAFs中的表达高于NFs(t＝5.37，P<0.05)；免疫荧光结果提示，相较于NFs，CAFs中α-SMA、Vimentin荧光信号增强；Western blot结果提示外泌体中表达CD9和TSG101蛋白，且透射电镜鉴定符合外泌体特征；RT-qPCR结果提示，CAFs源性外泌体中miR-25的表达高于NFs外泌体(t＝5.45，P<0.05)。Transwell实验表明，NFs外泌体与TE-1共培养组，每视野TE-1迁移细胞数为(202.700±17.840)个，CAFs外泌体与TE-1共培养组为(558.000±19.430)个(t＝13.47，P<0.01，n＝3)；NFs外泌体与TE-1共培养组，每视野TE-1侵袭细胞数为(174.000±10.070)个，CAFs外泌体与TE-1共培养组为(428.000±8.888)个(t＝18.91，P<0.01，n＝3)；miR-NC转染TE-1组，每视野TE-1迁移细胞数为(68.000±2.082)个，miR-25 mimics转染TE-1组为(379.000±6.083)个(t＝48.37，P<0.01，n＝3)；miR-NC转染TE-1组，每视野TE-1侵袭细胞数为(40.000±2.082)个，miR-25 mimics转染TE-1组为(254.000±2.000)个(t＝74.13，P<0.01，n＝3)，进一步荧光素酶报告基因结果显示，过表达miR-25可降低58%的PTEN 3’UTR野生型的荧光素酶活性(野生型：t＝7.19，P<0.05)，证实miR-25可靶向促进PTEN的表达。结论CAFs外泌体miR-25能够通过激活PTEN信号通路，而促进食管癌细胞的远处转移。
出版日期
2022年12月13日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
