摘要
摘要目的研究艾拉莫德是否能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞（HLFs）活化及胶原分泌。方法在体内，建立小鼠肺纤维化模型，分为3组：正常对照组、博莱霉素组和博莱霉素+艾拉莫德组，苏木精-伊红（HE）染色观察肺形态，马松染色观察肺内胶原积累程度，组织免疫荧光检测肺内肌成纤维细胞标志蛋白纤维连接蛋白（fibronectin）和平滑肌22蛋白（SM22），氯胺-T法检测肺组织羟脯氨酸含量。在体外，用原代人肺成纤维细胞（pHLFs）进行细胞实验评估艾拉莫德对TGF-β1刺激的影响，分为4组：正常对照组、艾拉莫德组、TGF-β1组、TGF-β1+艾拉莫德组，流式细胞术检测细胞的凋亡情况，实时荧光定量（qRT）-PCR检测细胞Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平，蛋白质印迹法和细胞免疫荧光检测细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、fibronectin、p-Smad2和p-Smad3以及转录辅助激活因子p300的蛋白水平。数据均采用单因素方差分析，两两比较用LSD-t检验或Kruskal-Wallis检验。结果羟脯氨酸含量：正常对照组为（0.552±0.075）μg/mg，博莱霉素组为（1.293±0.081）μg/mg，博莱霉素+艾拉莫德组（0.833±0.053）μg/mg （F=169.672，P<0.01），艾拉莫德降低了小鼠肺组织羟脯氨酸含量，减少了肺内胶原积累，从而降低了博莱霉素诱导的肺纤维化程度，改善了小鼠肺部病理改变。在细胞实验中，艾拉莫德对细胞凋亡比例差异无统计学意义（F=0.83，P=0.54）；Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达量：正常对照组为（100.4±1.2），TGF-β1组为（299.0±13.0），TGF-β1+艾拉莫德组（202.5±7.0）（F=468.7，P<0.01）；Ⅲ型胶原蛋白mRNA相对表达量：正常对照组为（99.8±1.9），TGF-β1组为（350.6±8.0），TGF-β1+艾拉莫德组（220.3±9.9）（F=468.7，P<0.01）；α-SMA蛋白相对表达量：正常对照组为（0.193±0.038），TGF-β1组为（0.530±0.061），TGF-β1+艾拉莫德组为（0.410±0.065）（F=35.620，P<0.01）；Fibronectin蛋白相对表达量：正常对照组为（0.200±0.020），TGF-β1组为（0.700±0.020），TGF-β1+艾拉莫德组为（0.410±0.066）（F=123.326，P<0.01）；p-Smad3蛋白相对表达量：正常对照组为（0.120±0.020），TGF-β1组为（0.573±0.586），TGF-β1+艾拉莫德组为（0.327±0.252）（F=92.987，P<0.01）；p300蛋白相对表达量：正常对照组为（0.180±0.055），TGF-β1组为（0.923±0.025），TGF-β1+艾拉莫德组（0.650±0.050）（F=207.676，P<0.01）。艾拉莫德显著降低TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平，抑制α-SMA、Fibronectin、p300蛋白表达，以及Smad2、Smad3蛋白的磷酸化。结论艾拉莫德能够经Smad3/p300通路抑制TGF-β1介导的人肺成纤维细胞活化及胶原分泌，它可能作为一种有效的抗纤维化药物用于延缓PF的进展。
出版日期
2021年11月28日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
